含量测定分析方法验证

含量测定方法学验证试验操作规程

1.目的

为保证检测工作的可靠性和可重现性，在未知样品的检测前必须对检测方法进行验证以证明所采用的检测方法适合于相应的检测要求。 2.范围

建立药品质量标准时、药品生产工艺变更时、制剂组分发生变更时、原分析方法修订时均应进行含量测定方法学的验证。 3.责任人

检测员、项目负责人、各级项目经理：要求系统、全面验证含量测定方法并记录整理验证数据。 4.程序

4.1 验证内容 专属性试验、检测限、定量限、系统适用性试验、线

性试验、精密度试验、稳定性试验、重现性试验、回收率试验(药典中为准确度)。

4.2验证方法及可接受标准（以HPLC法为准，UV法可接受标准不同的以下划线标识）

1）准确度（回收率试验）

该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份（即将已知量的对照品加入空白辅料中，制备供试品溶液）分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。 可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。 2）线性

线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具

****制药股份有限公司

题目

***原料含量分析方法验证方案 文件编号： 第 1 页 共 9页

***原料含量分析方法验证方案

20**年**月

****制药股份有限公司

题目 ***原料含量分析方法验证方案 文件编号： 第 2 页 共 9页

验证方案的起草与审批

验证小组成员 部门 人员 职责 验证小组组长 部门 人员 职责 负责组织起草验证方案并按批准方案组织实施；督促验证人员做好记录；负责各阶段验证结果汇总及评价、组织起草验证报告；组织相关培训 方案审核 审核 验证委员会 签名及日期 方案批准 批准人 方案实施日期：

批准日期 ****制药股份有限公司

题目 ***原料含量分析方法验证方案 文件编号： 第 3 页 共 9页 目 录

1. 验证目的 .................................................................................................................................. 4 2. 方法简介与确认范围 ...

第四章 药物的含量测定方法与验证

1、药物的含量：指药物中所含主成分的量，是评价药物质量的重要标准。 2、可供药物含量测定的分析方法： （1）容量分析法

①优点：操作简便，结果准确，方法耐用性高。 ②缺点：方法缺乏专属性。

③适用：适用于对结果准确度与精密度要求较高的样品的测定。 （2）光谱分析法

①优点：简便，快速，灵敏度高，并具有一定的准确度。 ②缺点：方法专属性稍差。

③适用：适用于对灵敏度要求较高、样本量较大的分析项目。 （3）色谱分析法

①优点：高灵敏度与高专属性，并具有一定的准确度。 ②缺点：结果计算需要对照品。

③适用：适用于对方法的专属性与灵敏度要求较高的复杂样品的含量测定。 3、为确保分析结果的可靠性，要求分析方法应准确、稳定、耐用。

4、验证内容包括：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用

性。

§4-1 定量分析方法的分类与特点

一、容量分析法

容量分析法：也称滴定法。是将已知浓度的滴定液（标准物质溶液）由滴定管滴加到

被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反应完全（通过适当方法指示），然后根据滴定液的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系计算出被测药物的含量。

当滴定液与被测药物完全作用时，反应达到化学计

时珍国医国药２００７年第１８卷第８期

ＩＪＩｓＨＩｚＨＥＮＭＥＤＩｃｌＮＥＡＮＤ

ＭＡＴＥＲｎＭＥＤＩｃＡＲＥＳＥＡＲｃＨ２０ｃｒ７ＶｏＬ．１８

Ｎｏ．８‘

多糖含量测定方法比较

钟方晓１，任海华２，李岩１

（１．山东省中医药研究院，山东济南２５００１４；２．山东省肿瘤医院，山东济南２５０１１７）

摘要：目的探讨中药多糖含量测定方法酶可行性及稳定性。方法对测定多糖常用对照品葡萄糖、鼠李糖、半乳糖，参

考文献方法，分别采用硫酸一苯酚法、硫酸一蒽酮法比较显色反应后吸收曲线的稳定性。结果不同单糖对照品显色反

应后最大吸收波长不同，其中硫酸一苯酚法显色反应后稳定性较好，硫酸一蒽酮法稳定性较差。结论硫酸一苯酚法为

较理想的多糖含量测定方法。

关键词：多糖；硫酸一苯酚法；硫酸一蒽酮法．中图分类号：Ｒ２８４．２

文献标识码：Ａ

文章编号：１００８电８０５（２００７）０８－１９１６旬１

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实验维八生B1片素含量定的方测法验证计性实验设药分析实物

实验验原理 维素生1又称B盐硫胺酸 (tiahimnehy rdcohlroide),化名学为称氯4化甲基--3[2-甲(基-4氨--5-嘧基基)啶基]甲5-(-2羟-基基噻唑鎓乙盐盐

酸3H NCN

H2N H2 C

C2CHH2OH N+C 3HCl-HlC

性质溶解 :水中性易，溶乙醇中微，溶乙醚不中溶硫色素反 :应 外吸紫特性收Amax:=24n6 m 生物与沉淀试碱反应剂 氯化物性特：氯化物查检特性鉴别征含量测定

原

理征特鉴别—性硫—素色应反生素维1B在碱中可被液氰化铁钾化氧成生色硫素色素转，溶于正丁(醇异丁醇、或异戊醇中),显于现酸中失的消蓝色荧。光(见文英主刘编《药物分》析第版，六P528) 量含定测1%生维素1B有外吸收紫，Ama=246xm,n E1c m4 21

实验方法

.1鉴反应别取品本约m5,加g氧化钠试液氢2.ml5使溶其，解加铁氰钾试化液.5m0l正与丁醇5l,强力m摇振min,2置放成两液层，使层上醇液显强烈的蓝色荧光，加酸使即酸成荧光性消失即，加再碱成碱使，则性荧光复现

2.。量测含定如计算出所需何的要？量精称取密粉适量，片当于相维生B素125mg,置10ml0瓶量中

实验维八生B1片素含量定的方测法验证计性实验设药分析实物

实验验原理 维素生1又称B盐硫胺酸 (tiahimnehy rdcohlroide),化名学为称氯4化甲基--3[2-甲(基-4氨--5-嘧基基)啶基]甲5-(-2羟-基基噻唑鎓乙盐盐

酸3H NCN

H2N H2 C

C2CHH2OH N+C 3HCl-HlC

性质溶解 :水中性易，溶乙醇中微，溶乙醚不中溶硫色素反 :应 外吸紫特性收Amax:=24n6 m 生物与沉淀试碱反应剂 氯化物性特：氯化物查检特性鉴别征含量测定

原

理征特鉴别—性硫—素色应反生素维1B在碱中可被液氰化铁钾化氧成生色硫素色素转，溶于正丁(醇异丁醇、或异戊醇中),显于现酸中失的消蓝色荧。光(见文英主刘编《药物分》析第版，六P528) 量含定测1%生维素1B有外吸收紫，Ama=246xm,n E1c m4 21

实验方法

.1鉴反应别取品本约m5,加g氧化钠试液氢2.ml5使溶其，解加铁氰钾试化液.5m0l正与丁醇5l,强力m摇振min,2置放成两液层，使层上醇液显强烈的蓝色荧光，加酸使即酸成荧光性消失即，加再碱成碱使，则性荧光复现

2.。量测含定如计算出所需何的要？量精称取密粉适量，片当于相维生B素125mg,置10ml0瓶量中

天然产物

一些天然产物的含量测定方法

成分名称 提取方法 流动相 检测波长(纳米) 流速 柱温

丹参酮IIA 甲醇回流 甲醇-水(75:25/73：27) 270 1 室温

丹酚酸B 75%乙醇回流 甲醇-乙腈-甲酸-水(30:10:1:59) 286 1 室温

丹参素 水,超声/乙醇-水超声/盐酸(1->10)50毫升,超30分钟,冷,补足,氯化钠5克,取上清液25毫升,乙乙提取4次,合并,干,50%甲醇溶,定10毫升./50%甲醇超提 甲醇-水-乙酸(8:91:1)/乙腈-水-磷酸(2:60:0.5)/乙腈-水-乙酸(9:90:1)/甲醇-二甲基甲酰胺-水-乙酸(4:4:90:2/2:95:2:1)/甲醇-0.4%乙酸(5:95)/甲醇-1%乙酸(8:92)/乙腈-甲醇-水-冰醋酸（0.5：8：92：1） 280 1 室温

天然产物

362页后

《欧洲药典》中蛋白含量的测定方法

1. 《欧洲药典》第7版2.5.33，USP<1057>Biotechnology-derived articles-Total protein assay。

EP2.5.33收录了7种检测方法，即扫描法、Lowry 法、Bradford 法、BCA法、Biuret 法、荧光法和氮分析法。 1.1 扫描法：

原理：依据蛋白质结构中含有芳香族氨基酸（如酪氨酸、色氨酸），其在280nm处有吸光值。检测时，如果溶解蛋白质的溶剂也有高吸光度，则采用干扰对照液进行补偿消除。但如果干扰对照液吸光值也很高，则检测结果误差大。此外，低浓度蛋白质溶液会因蛋白质吸附至检测池上而影响浓度，后者可使用高浓度或用去离子去污剂处理样品。 待测品：蛋白质溶液浓度一般为0.2mg/mL~2 mg/mL。

对照品：选择合适的对照品，用溶解待测品蛋白质的溶剂配制，浓度与待测品溶液一致。 检测：检测过程中，将待测蛋白溶液、对照品溶液和干扰对照液保持在相同温度。使用石英比色皿检测280nm处吸光值，并使用规定的溶液进行补偿。溶液浓度应尽可能保持在适宜范围内以便获取准确结果。

光散射影响：样品引起的光散射会导致蛋白质检测结果准确度降低。如果蛋白质溶液中存

果胶的测定（方案一）：

黄晓钰，刘邻渭等．食品化学综合实验[M]．中国农业大学出版社. 2002．158~159

实验原理：果胶经水解，其产物——半乳糖醛酸可在强酸环境中与咔唑试剂产生缩合反应，

生成紫红色化合物，其呈色深浅与半乳糖醛酸含量成正比，由此可进行比色定量测定果胶。 实验试剂：1.化学纯无水乙醇或95%乙醇。

2.精制乙醇：取无水乙醇或95%乙醇1000ml，加入锌粉4g，硫酸（1:1）4ml，

至于衡温水浴中回流10h，用全玻璃仪器蒸馏，馏出液每1000ml加锌粉和氢氧化钾各4g，并进行蒸馏。

3. 0.15%咔唑乙醇溶液：称取咔唑0.150 g，溶于精制乙醇并定容至100ml。 4.半乳糖醛酸标准溶液：先用水配置成浓度1 g/L的溶液，再配制成浓度分别为

（0、10mg/L、20 mg/L、30 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、60 mg/L、70mg/L）的

系列半乳糖醛酸标准溶液。

5.优级纯浓硫酸。

操作方法：1样品处理： 总果胶提取：（鲜样）研磨新鲜样品50g，放入1000ml烧杯中，加入0.05mol/L

HC

阿司匹林含量测定方法综述

一、阿司匹林原料药的含量测定 （1）酸碱滴定法 1、直接滴定法 2、水解后剩余滴定 3、两步滴定法 （2）仪器法

4、反相高效液相色谱法 5、薄层色谱法 6、紫外分光光度法

二、阿司匹林制剂的含量测定 1、两步滴定法 光谱法： 2、比色法

3、双波长紫外分光光度法 4、双波比值光谱法 5、同步扫描荧光光谱

6、萃取-火焰原子吸收光谱法 7、紫外分光光度法 8、分光光度法 9、荧光光度法 10、差示分光光度法 11、紫外褶合光谱法 12、近红外漫反射法 色谱法：

13、高效液相色谱法 14、反相高效液相色谱法

15、离子抑制-反相高效液相色谱法 16、气相色谱法

17、大口毛细管气相色谱法 18、胶束薄层色谱法 电泳法：

19、非水毛细管电泳法 20、反向高效毛细管电泳法 其他法：

21、动力学光度法测定痕量乙酰水杨酸 23、电极法

24、柱分配色谱-紫外分光光度法 25、阻尼最小二乘法

26、线性扫描伏安法测定阿司匹林 27、百分吸收系数法

摘要：阿司匹林是水杨酸类解热镇痛药物，临床上主要用于治疗感冒发烧、牙痛等慢性疼

痛，现在的研究发现小剂量的阿司匹林也