醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验

醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质(山东大学）

Xxxx

20110014xxxx

生科三班 同组者：xxx

一、 实验目的：

掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。

二、 实验原理：

蛋白质是两性电解质。在pH小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带静电荷不同，因此在电场中移动速度不同，故可利用电泳法奖它们分离。

血清中含有白蛋白、α-球蛋白，β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同（见表1），在电场中迁移速度不同。由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH7.0，所以在缓冲液（pH8.6）中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。

表1 人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量

蛋白质名称

白蛋白 α1-球蛋白 α2-球蛋白 β-球蛋白 γ-球蛋白 三、 实验器材：

醋酸纤维薄膜（2㎝×8㎝，厚度120μm）、人血清（新鲜、无溶血现象）、培养皿Φ10㎝（×5）、点样器（或玻璃片）、镊子、玻璃棒、电吹风、吸管5.0㎝（×1

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聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质

【目的】

1 ．掌握圆盘电泳分离血清蛋白的操作技术。

2 ．熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。

【原理】

带电粒子在电场中向着与其自身电荷方向相反的电极移动，称为电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ PAGE ）就是以聚丙烯酰胺凝胶作为电泳介质的电泳。在电泳时，蛋白质在介质中的移动速率与其分子的大小，形状和所带的电荷量有关。

聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，是由丙烯酰胺（ Acr ）单体和少量交联剂 N,N- 亚甲基双丙烯酰胺（ Bis ）在催化剂过硫酸铵（ Ap ）和加速剂四甲基乙二胺（ TEMED ）的作用下发生聚合反应而制得的（其化学结构式见第 2 篇第 1 章）。

聚丙烯酰胺凝胶具有网状结构，其网眼的孔径大小可用改变凝胶液中单体的浓度或单体与交联剂的比例来加以控制。根据血清蛋白分子量的大小，学生实验一般选用 7 ％聚丙烯酰胺凝胶分离血清蛋白质。

不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳利用浓缩效应、分子筛效应和电荷效应的三重作用分离物质（见第 2 篇第 1 章），使样品分离效果好，分辨率较高。一般醋酸纤维薄膜电泳只能把血清蛋白质分离出 5 ～ 7 条带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳却能分离出十几条到几十条

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聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质

【目的】

1 ．掌握圆盘电泳分离血清蛋白的操作技术。

2 ．熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。

【原理】

带电粒子在电场中向着与其自身电荷方向相反的电极移动，称为电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ PAGE ）就是以聚丙烯酰胺凝胶作为电泳介质的电泳。在电泳时，蛋白质在介质中的移动速率与其分子的大小，形状和所带的电荷量有关。

聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，是由丙烯酰胺（ Acr ）单体和少量交联剂 N,N- 亚甲基双丙烯酰胺（ Bis ）在催化剂过硫酸铵（ Ap ）和加速剂四甲基乙二胺（ TEMED ）的作用下发生聚合反应而制得的（其化学结构式见第 2 篇第 1 章）。

聚丙烯酰胺凝胶具有网状结构，其网眼的孔径大小可用改变凝胶液中单体的浓度或单体与交联剂的比例来加以控制。根据血清蛋白分子量的大小，学生实验一般选用 7 ％聚丙烯酰胺凝胶分离血清蛋白质。

不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳利用浓缩效应、分子筛效应和电荷效应的三重作用分离物质（见第 2 篇第 1 章），使样品分离效果好，分辨率较高。一般醋酸纤维薄膜电泳只能把血清蛋白质分离出 5 ～ 7 条带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳却能分离出十几条到几十条

血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定及电泳分析

【实验目的】

1、了解蛋白质分离提纯的总体思路。

2、掌握盐析法、凝胶层析法和离子交换层析的实验原理及操作技术 3、掌握电泳法分离纯化蛋白质的方法。

【实验原理】

1、蛋白质的粗提——盐析法 胶体的盐析是加盐，盐中的带电粒子使蛋白质周围的水化膜减弱，胶粒溶解度降低，形成沉淀析出的过程，是胶体的聚沉现象的一种。向蛋白质溶液中加入某些浓的无机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后，可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出，这种作用就叫做盐析。盐析不能使蛋白质变性，可以复原。利用这个性质，可以采用多次盐析的方法来分离、提纯蛋白质。蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时，离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，蛋白质溶解度更加降低，之蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫

血清清蛋白、γ-球蛋白的分离、提纯与鉴定

一、实验目的

1. 掌握盐析法、凝胶层析法、离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法； 2. 掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法； 3. 了解柱层析技术。

二、实验原理

血清蛋白主要由清蛋白和球蛋白组成，各行使其重要的功能。

本实验利用盐析方法将血清中的清蛋白和球蛋白分离，并用电泳技术观察蛋白质分离教果。

1．盐析

蛋白质分子能稳定存在于水溶液中是因为有两个稳定因素：表面的电荷和水化膜。当维持蛋白质的稳定因素破坏时，蛋白质分子可相互聚集沉淀而析出，蛋白质分子沉淀析出的方法很多，根据对蛋白质稳定因素破坏的不同有中性盐析法、有机溶溶剂法、重金属盐法以及生物碱试剂法等。盐析法的原理是：中性盐如硫酸铵((NH４)２SO4)等对蛋白质作用破坏了蛋白质表面水化膜，并且中和了部分电荷，从而使蛋白质相互聚集而析出。由于血清中各种蛋白质分子的颗粒大小、所带电荷的多少和亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不同，因此调节盐的浓度可使不同的蛋白质沉淀从而达到分离的目的。血清球蛋白在半饱和状态下发生沉淀，而血清清蛋白在完全饱和状态下沉淀，利用此特性可把蛋白质分段沉淀下来，即在半饱和的中，血清蛋白不沉淀，而血球蛋白沉淀

血清清蛋白、γ-球蛋白的分离、提纯与鉴定

一、实验目的

1. 掌握盐析法、凝胶层析法、离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法； 2. 掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法； 3. 了解柱层析技术。

二、实验原理

血清蛋白主要由清蛋白和球蛋白组成，各行使其重要的功能。

本实验利用盐析方法将血清中的清蛋白和球蛋白分离，并用电泳技术观察蛋白质分离教果。

1．盐析

蛋白质分子能稳定存在于水溶液中是因为有两个稳定因素：表面的电荷和水化膜。当维持蛋白质的稳定因素破坏时，蛋白质分子可相互聚集沉淀而析出，蛋白质分子沉淀析出的方法很多，根据对蛋白质稳定因素破坏的不同有中性盐析法、有机溶溶剂法、重金属盐法以及生物碱试剂法等。盐析法的原理是：中性盐如硫酸铵((NH４)２SO4)等对蛋白质作用破坏了蛋白质表面水化膜，并且中和了部分电荷，从而使蛋白质相互聚集而析出。由于血清中各种蛋白质分子的颗粒大小、所带电荷的多少和亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不同，因此调节盐的浓度可使不同的蛋白质沉淀从而达到分离的目的。血清球蛋白在半饱和状态下发生沉淀，而血清清蛋白在完全饱和状态下沉淀，利用此特性可把蛋白质分段沉淀下来，即在半饱和的中，血清蛋白不沉淀，而血球蛋白沉淀

血清白蛋白

第33卷第5期

福州大学学报(自然科学版)Vol.33No.5文章编号:1000-2243(2005)05-0691-04

血清白蛋白的分离纯化及鉴定

张少权,李昊,郭春腾,饶平凡

(福州大学生物工程研究所,福建福州　350002)

摘要:由新鲜驴血浆离心得到的血清经冷冻,离心,透析,0.22μm滤膜过滤,经过两步Source15Q离子交换

色谱于HPLC进行纯化,得到3个含有驴血清白蛋白的峰.经SDS-PAGE电泳测定,其分子量在66.0kDa左

右,纯度达到电泳纯.经PAGE电泳鉴定,均为单一驴血清白蛋白.此法步骤简单,用血量少,适用于实验

室常规分析和研究.

关键词:驴;血清白蛋白;阴离子交换色谱;HPLC

中图分类号:Q512文献标识码:A

Isolation,purificationandidentificationofdonkeyserumZHANGShao-quan,LIHao,GUO-,(InstituteofBiotechnology,Fuzhou,,,China)

Abstract:Donkeyserumalbuminfromoffreezing,centrifugation,di2

andpurifiedthroughtwostepso

采用聚乙二醇单甲醚(MPEG)作为改性剂,与二醋酸纤维素(CDA)进行接枝反应。用正交实验法研究了聚乙二醇的分子量、二醋酸纤维素与聚乙二醇的配比、2,4-甲苯二异氰酸酯的用量、催化剂的用量和反应时间对接枝反应的影响,确定了最佳的配方和工艺。对相应的接枝共聚物进行了FT-IR、DSC和 1H-NMR的表征分析。

维普资讯 http://www.77cn.com.cn

第1卷期 8第620 0 2年 l 1月

高分子材料科学与工程PO LYM ER AT ERI M ALS S ENCE AN D CI ENG I EERI N NG

v18。 。1N. ., 6No .2 0 v 02

二醋酸纤维素与聚乙二醇单甲醚 接枝反应的正交实验研究王东山，黄勇~,沈家瑞 (南理工大学材料学院，广东广州 5 0 4;。中国科学院广州 4￣t究所纤维素 华 16 1 ge i￣化学研究开放实验室，广东广州 5 0 5。中国科学院 4￣t究所，北京 1 0 8 ) 1 6 0; ge i￣ 0 0 0

摘要：用聚乙二醇单甲醚 ( E作为改性荆，二醋酸纤维素 ( A )行接枝反应。用正交实验法采 MP G)与 CD进研究了聚乙二醇的分子量、醋酸纤维素与聚乙二醇的配比

Ⅲ—01血清γ球蛋白的分离与纯化

精品资料

Ⅲ—01 血清γ球蛋白的分离与纯化【目的要求】

1.掌握分离纯化蛋白质的基本原理和基本过程。

2.熟悉盐析、离心、层析、电泳、比色等生物化学基本技术在蛋白质分离纯化中的综合应用。

4.学会设计和制定分离纯化蛋白质的实验方案、技术路线和质量监控和保证措施。

【实验原理】

不同蛋白质的理化性质和生物学性质各有不同，利用这些不同便可获得分离纯化。

血清蛋白有300多种,可粗略分成清、球蛋白两大类，γ球蛋白只是球蛋白中的一个亚类。欲用常规方法获得，可先用半饱和硫酸铵从血清中盐析出球蛋白，接着用葡聚糖凝胶G—25（Sephadex—25）脱去球蛋白中的盐分（硫酸铵），最后用DEAE（二乙基氨基乙基）纤维素阴离子交换柱，便可直接从脱盐的球蛋白溶液中分离纯化出γ球蛋白，其反应机理如下：

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精品资料

被柱层析交换结合的α球蛋白和β球蛋白，可通过增加洗脱液的离子强度或降低洗脱的pH值（也可两者同时改变），使其分部洗脱下来而被纯化。

纯化前后的γ球蛋白可用电泳方法进行比较鉴定。

【实验准备】

一、器材

1.离心机

2.层析柱(直径约1-1.2cm,长约30cm)

3.电泳仪

二、试剂

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青岛大学

硕士学位论文

醋酸纤维素/聚丙烯腈复合超滤膜的制备

姓名：胡丽伟

申请学位级别：硕士

专业：材料加工工程

指导教师：逄奉建;夏延致

20080609

摘要

本文以醋酸纤维素（ＣＡ）及聚丙烯腈（ＰＡＮ）为膜材料，以纳米三氧化二铝（Ａ１２０３１

为添加剂，通过浸入一沉淀相转化法制备了有机一无机超滤膜，从铸膜液组成及成膜

条件两个方面考察成膜规律，并对膜进行了酸、碱水解改性实验。在铸膜液组成方

面，考察了纳米舢２０３的含量对铸膜液粘度、膜接触角、机械性能、水通量及截留

率的影响。成膜条件方面主要考察了凝固浴温度及凝固浴中表面活性剂的浓度。水

解改性实验主要考察了不同浓度的ＮａＯＨ的乙醇溶液以及不同浓度ＨＣｌ溶液对膜性

能的影响。

实验结果表明，纳米他０３的加入使铸膜液的粘度大大增加，更易成膜；随着纳

米粒子含量的增加，膜与水的接触角降低，亲水性增强；膜的断裂强度及断裂伸长

率增大，膜的机械性能得到改善。膜表层孔径及空隙率先增大后减小，水通量增大，

截留率减小。

在一定温度下，膜表面孔径及孔隙率随凝固浴温度的增加而变大，水通量增大，

截留率降低。凝固浴中加入表面活性剂，膜的水通量及截留率得到改善。

采用ＮａＯＨ的乙醇溶液对膜进行水解改性时，机械性能大大降低，效果不理想；

不同浓度ＨＣＩ