动物细胞工程学

实验时间 4月11日 4月18日 4月25日 实验内容 实验一 培养用液的配制、除菌与分装 实验二 细胞的传代培养 实验三 鱼类细胞原代培养（组织块法）（1-5组）401 实验四 染色体制备（6-10组）301 5月2日 实验三 鱼类细胞原代培养（组织块法）（6-10组）401 实验四 染色体制备（1-5组）301 5月9日 实验五 细胞的复苏与冻存

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实验一 培养用液的配制、除菌与分装

【实验目的】

1. 掌握常见培养用液的配制方法。 2. 掌握常用的灭菌方法。 3. 了解每种培养用液的作用。

【实验原理】

常用细胞培养用液包括磷酸盐平衡盐溶液（Phosphate Buffered Saline，PBS）、液体培养基、胰蛋白酶（Trypsin）和EDTA溶液。PBS用于清洗细胞、配制胰蛋白酶和 EDTA。培养基含有细胞生长需要的各种营养元素，使用时通常还需填加血清和抗生素。鱼类细胞培养的培养基常用种类是MEM 和L-15；用于动物的一般是DMEM和RPMI-1640。胰蛋白酶可将贴壁的细胞从培养瓶壁上消化下来，通常使用浓度为0.25%或0.125%。EDTA 用于清洗细胞表面，螯合Ca2+等二价离子，使细胞易于为胰蛋白酶消化。

细胞

动物细胞工程课堂笔记

动物细胞工程常用的技术

? 动物细胞培养：是其他动物细胞工程技术的基础。 ? 动物细胞融合 ? 动物细胞核移植

? 生产单克隆抗体等

? 一.动物细胞培养

(一)概念

（二）、原理：

? 如何进行细胞培养?

（三）相关概念

1.细胞贴壁：培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖.

2.细胞接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。

3.原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以内

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的细胞称为原代细胞培养。

4.传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。

5.细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 6.细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。

7.细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。

动物细胞工程复习题

绪论

1、动物细胞工程技术应用的两面性。 2、动物细胞工程包含哪些主要研究内容？

实验室设置及无菌操作技术

1、你认为动物细胞培养无菌操作的要点有哪些？ 2、动物细胞培养液的主要成分有哪些？

3、常用的培养动物细胞的培养基的种类？目前实验室中中常用的培养基是什么？

4、什么是天然培养基、合成培养基和无血清培养基？ 5、目前常用的合成培养基有哪些？有哪些优点？

6、什么是无血清培养基?无血清培养基成分有哪些？无血清培养在实验研究中有什么特殊意义？

7、BSS有哪些功能？常用的BSS有哪些？ 动物细胞组织培养 名词解释： 原代培养

传代培养 接触抑制 密度抑制 细胞克隆 细胞系 细胞株

动物细胞固定化培养 微载体培养技术 大孔载体培养技术 有限细胞系和无限细胞系 问答题：

1、体外培养细胞有哪些类型及各自特点？

2、细胞系的生长过程包括哪些主要阶段？每一生长阶段各有什么特征？ 3、每代细胞的生长曲线包括哪几个主要时期？各期细胞有什么特点？ 4、动物细胞原代培养的方法？举例说明培养的基本过程。 5、贴壁细胞传代时采用何种方法，其技术关键是什么？ 6、为保证好的冻存复苏效果，需要考虑那些问

动物细胞工程 12月20日

动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 一、动物细胞培养

1、定义：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2、原理：细胞增殖 3、过程 注意：

①10代以内细胞保持正常的二倍体核型，无突变发生，常用于实践或冷冻保存。 ②超过50代，极少数细胞突破自然寿命极限，突变成癌细胞，具有无限增殖能力；若超过50代，细胞不再增殖，全部死亡，则说明细胞没有发生癌变。

③分瓶之前，称原代培养；出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培养为传代培养。 思考回答：

⑴、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养?

答：其细胞的分化程度低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。 ⑵、动物细胞培养需要脱分化吗?为什么?

答：不需要。因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以没有类似植物组织培养的脱分化过程，要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。

⑶、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞

细胞工程学习题

1．诱导试管苗生根时，培养基的调整应 D

A．加大盐的浓度 B．加活性炭 C．加大分裂素的浓度 D．加大生长素的浓度 2．下列实验中可能获得三倍体植株的是 C A．小麦的茎尖培养 B．番茄花药培养 C．玉米胚乳培养 D．玉米花粉培养

3．动物体内各种类型的细胞中，具有最高全能性的细胞是 C A．体细胞 B．生殖细胞 C．受精卵 D．干细胞 4．下列哪个是植物离体培养常用的主要糖类 D

A． 葡萄糖 B．果糖 C．麦芽糖 D．蔗糖 5．农杆菌介导的转化方法主要适用于 D

A．草本植物 B．木本植物 C．单子叶植物 D．双子叶植物 6．原生质体纯化步骤大致有如下几步：

①将收集到的滤液离心，转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准，一般以500r／min离心15min。用吸管谨慎地吸去上清液。

②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液相同)，再次离心，去上清液，如此重复三次。

③将原生质体混合液经筛孔大小为40～100um的滤网过滤，以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂

细胞工程学习题

1．诱导试管苗生根时，培养基的调整应

A．加大盐的浓度 B．加活性炭 C．加大分裂素的浓度 D．加大生长素的浓度 2．下列实验中可能获得三倍体植株的是 A．小麦的茎尖培养 B．番茄花药培养 C．玉米胚乳培养 D．玉米花粉培养

3．动物体内各种类型的细胞中，具有最高全能性的细胞是 A．体细胞 B．生殖细胞 C．受精卵 D．干细胞 4．下列哪个是植物离体培养常用的主要糖类

A． 葡萄糖 B．果糖 C．麦芽糖 D．蔗糖 5．农杆菌介导的转化方法主要适用于

A．草本植物 B．木本植物 C．单子叶植物 D．双子叶植物 6．原生质体纯化步骤大致有如下几步：

①将收集到的滤液离心，转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准，一般以500r／min离心15min。用吸管谨慎地吸去上清液。

②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液相同)，再次离心，去上清液，如此重复三次。

③将原生质体混合液经筛孔大小为40～100um的滤网过滤，以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂质，收集滤液。

细胞工程学习题

1．诱导试管苗生根时，培养基的调整应

A．加大盐的浓度 B．加活性炭 C．加大分裂素的浓度 D．加大生长素的浓度 2．下列实验中可能获得三倍体植株的是 A．小麦的茎尖培养 B．番茄花药培养 C．玉米胚乳培养 D．玉米花粉培养

3．动物体内各种类型的细胞中，具有最高全能性的细胞是 A．体细胞 B．生殖细胞 C．受精卵 D．干细胞 4．下列哪个是植物离体培养常用的主要糖类

A． 葡萄糖 B．果糖 C．麦芽糖 D．蔗糖 5．农杆菌介导的转化方法主要适用于

A．草本植物 B．木本植物 C．单子叶植物 D．双子叶植物 6．原生质体纯化步骤大致有如下几步：

①将收集到的滤液离心，转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准，一般以500r／min离心15min。用吸管谨慎地吸去上清液。

②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液相同)，再次离心，去上清液，如此重复三次。

③将原生质体混合液经筛孔大小为40～100um的滤网过滤，以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂质，收集滤液。

（？题号前有问号题表示需斟酌！） 一、名词解释

1、细胞工程学（cytotechnology或cell engineering）：是以生物细胞、组织或器官为研究对象，运用工程学原理，按照预定目标，改变生物性状，生产生物产品，为人类生产或生活服务的科学。

2、转基因动植物（transgenic animal and plant）：指用细胞工程结合基因工程的方法将人们需要的目的基因导入受体动植物基因组中，使外源基因与其基因整合在一起，并随细胞分裂而增殖，在动植物体内表达，并稳定地遗传给后代。 3、原生质培养（protoplast culture）：指将微生物或植物细胞游离成原生质体，在适宜培养条件下，依据细胞全能性使其再生细胞壁，并进行细胞分裂分化，形成完整个体的技术。 4、植物胚胎培养（embryo culture）：指使胚或具胚器官（如子房、胚珠等）在离体无菌条件下发育成正常植株的技术。 5、克隆动物（cloned animal）：是动物的无性繁殖，指不经两性结合，个体不断增值、复制出外形、性能和基因型一致的个体。 6、细胞周期（cell cycle）：从细胞一次分裂结束开始，到下一次细胞分裂结束所经历的过程。 7、端粒（telomere）：

第二章 细胞工程

第二节 动物细胞工程的应用（3）

【课标要求】

1．简述动物的细胞培养与体细胞克隆 2．举例说出细胞融合与单克隆抗体 【教学目标】

1.简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 2.举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用。 【教学过程】

知识点三、细胞融合和单克隆抗体 （一）动物细胞融合

1、概念：动物细胞融合也称细胞杂交，是指在一定的条件下将 。融合后形成的具有原来 遗传信息的单核细胞，称为 。科学研究表明，不同类型的动物细胞之间能进行融合形成杂种细胞，如鼠—鸡、鼠—猴杂种细胞等 【思考】动物细胞融合的原理？

2、动物细胞融合的方法：主要有 （如 ）、 （如 ）和 （如 ）。目前，应用 进行细胞融合的效率较高，且对细胞伤害小，易操作、控制和观察，因此在实验室被广泛使用。在细胞融合后，还需对融合细胞进行筛选和检测。 3、细胞融合技术的优点：_______________

哺乳动物的克隆方法：胚胎干细胞核移植、胚胎细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植、体细胞核

移植。

第一章 绪论课后习题答案

1. 动物细胞工程主要有哪些内容？这些技术有何用途？

答：1. 组织和细胞培养技术2. 细胞融合与单克隆抗体技术3. 细胞核移植技术4. 胚胎工程技术 5. 干细胞技术6. 转基因技术7. 染色体工程

细胞工程的应用有：A. 单克隆抗体的应用：疾病诊断与治疗、微量大分子物资的检测、贵重生物活性物的分离与提纯、特殊疾病治疗、与药物交联治疗疾病；B. 转基因技术的应用：建立疾病的动物模型、品种改良和抗病育种、“乳腺生物发应器”、基因代替治疗、异种器官移植、基因功能研究；C. 细胞与组织替代治疗；D. 治疗人类不孕症；E. 优良品种繁育；F. 生产转基因家畜；G. 保护濒危动物。

2. 追踪动物细胞工程研究与应用的最新进展，并预测其发展趋势。

第二章 细胞培养

1、体外培养细胞有哪些类型？其生长特点有什么区别？

答：体外培养的细胞根据其生长方式，主要分为贴壁生长型细胞和悬浮生长型细胞。离体细胞 必须贴附于底物上才能生长的细胞称为贴壁生长型细胞。有机体的绝大部分细胞必须贴附在某 一固相表面才能生存和生长。动物细胞培养中，大多数细胞