联酶免疫吸附实验

全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法的检测结果比较

王胜虎1） 陈琪 1） 李媛 2）

1）昆明医科大学附属延安医院检验科，云南昆明 650051； 2）昆明医科大学海源学院基础部，云南昆明

650500

[摘要] 目的 通过比对全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法检测临床标本结果的相关性及符合率，探讨更科学可靠的检验方法。 方法 随机抽取90份临床与体检标本，经Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫分析仪和手工加样操作的IMARK2酶标仪测定甲肝、乙肝5项、丙肝、戊肝2项、TP及HIV的结果，并对结果进行相关性及合率的分析 。结果 对所检测项目中的HBsAg、HBsAb、HBeAg、TP、HIV的相关性系数r>0.9 ，其数据显示相关性较好；而HAV-IgM、HBeAb、HBcAb、HCV、HEV-IgM、HEV-IgG、的相关性系数为 0.9>r >0.6 ；Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法操作比对90个样本的11项检测结果总符合率达96.9％。 结论 全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法有较好的相关性。全自动酶联免疫分析仪的使用还大大的

实验九 吸附

一、实验目的

1、 了解吸附剂的吸附性能和吸附原理； 2、 测定吸附等温线。

二、实验水样与吸附剂

水样采用一定浓度的自配有机物溶液（如浓度为100mg/L的苯酚溶液）。选定某有机物之前首先需确定该有机物浓度的分析方法。

吸附剂为活性炭，有粉末、粒状和柱状等多种形式。粉末活性炭的制备过程如下：吸附剂经磨细（一般采用通过0.1mm筛孔以下的粒径）、水洗后，分别配制成80目和200目，在110℃下干燥（烘干1小时）后备用。

三、实验方法

在恒定温度下，于几个烧杯中加入V（L）溶质浓度为C0（mg/L）的水样，在各烧杯中同时投加不同量m（mg）的活性炭，分别进行搅拌，搅拌时间等于接触时间。试验过程中，不断测定各杯水样中的溶质浓度C1，直到溶质浓度不变的平衡浓度Ce（mg/L）为止。由试验结果可以算出单位重量活性炭可吸附的溶质量，即为吸附容量： V(C0?Ce)x?(mg/mg) mm由吸附容量xm和平衡浓度Ce的关系所绘出的曲线为吸附等温线，表示吸附

等温线的公式为吸附等温式。

1x最常用的吸附等温式是弗兰德利希（Freundich）经验公式：?KCen。在

m双对数坐标纸上，以吸附容量为纵坐标，Ce为横坐标，按静态烧杯实验结果绘图，可

分子诊断

中国生物制品学杂志

以只

年月第

卷第

期

坛

哈司

。

以”

,

抗体快速诊断试剂与酶联免疫诊断试剂灵敏度比较李秀华宋爱京摘

王佑春比较。

要」目的丑

抗体快速诊断试剂与抗体酶联免疫诊断试剂检测不同样品灵敏度的差异

。

方法,

用扭抗体诊断试剂和

抗体酶联免疫诊断试剂分别检测扭抗体酶联免疫试剂国家参考品结果检测印抗体酶联免疫试剂国家参考品中。,

、

丑

不同亚型

样品以及,

高危人群样品

份阳性样品只检出,

份阳性

份最低检出限样品只检出阳性符合率为,

份阳性

与酶联免疫试剂相比对,,

亚型样品的检测其灵敏度低。

一

倍对,,

重

组样品其灵敏度低印倍对,

重组样品其灵敏度低,

一

倍

在

】

高危人群样品中与酶联免疫诊断试剂

,

阴性符合率为

。

结论

快速诊断试剂的灵敏度明显低于酶联免疫诊断试剂因此其

应用范围不能等同于酶联免疫诊断试剂

。

关【键词】人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂基因型亚型

余家企业生产主要采用双抗原夹心法免疫诊断试剂,

目前我国已有,,

抗体酶联。

田

北京万泰,,

抗体酶联免疫诊断试剂批号珠海丽珠,

,

该类试剂,

田以以效期为田

抗体酶联以洲旧。

灵敏度高已广泛应用于血液的筛查,,

。

最近已有快抗抗。

免疫诊断试剂批号检测方法用重组血清以释。

效期为

速诊断试剂投放市场该类试剂主要采用胶体金或胶体硒对抗原进行标记采用层析原理检

非标记抗体酶法

由于酶标抗体存在一些缺点，例如①酶与抗体间的共价连结可损害部分抗体和酶的活性；②抗血清中的非特异性抗体被酶标记后，与组织成分结合，可致背景染色等。为此Sternberger等在酶标法的基础上，发展了非标记抗体酶法。包括酶桥法（Enzyme Bridge Method）和过氧化物酶抗过氧化物酶法（Peroxidase Antiperoxidase Method, PAP法）。现分述如下。 （一）酶桥法

1．基本原理 首先用酶免疫动物，制备效价高、特异性强的抗酶抗体，然后使用第二抗体作桥，将抗酶抗体连结在与组织抗原结合的第一抗体上，再将酶结合在抗酶抗体，经呈色显示抗原的分布。在此过程中，任何抗体均未被酶标记，酶是通过免疫学原理与抗酶抗体结合，避免了共价连结对抗体和酶活性的损害，提高方法的敏感性，且能节 省第一抗体的用量。

2．染色步骤 主要程序如图4-4

图4-4 酶桥法主要染色步骤

（1）切片准备及第一抗体孵育前处理同间接法，第一抗体（假设来自种属A）孵育24h（4℃）。第一抗体的稀释度可高些，使抗体的两个Fab段均与组织抗原结合，较牢固，漂洗时不易丢失。

（2）切片与第二抗体（也称桥抗体，抗种属a I

人胎球蛋白A检测试剂盒（酶联免疫法）

（德国DRG EIA4522）

预期用途

此试剂盒可用于血清，血浆，细胞上清，组织提取物和尿液中人胎球蛋白A也称之为α-2-HS糖蛋白的定量的检测；血清或血浆中胎球蛋白A的检测可作为某些癌症及基因遗传缺陷的血清蛋白诊断的辅助工具；此试剂盒仅供实验室专业人士使用 简介

胎球蛋白A也称之为α-2-HS糖蛋白，是由两个氨基末端抑制域和一个较小的羧基末端域组成的59 kDa 分子量的糖蛋白；由肝脏合成，分泌至血流，成年哺乳动物体内的浓度范围在0.5-1.0g/L；婴儿期的血清胎球蛋白A含量高，参与蛋白酶抑制活性，与钙代谢和骨生成调节相关；累积于骨和牙齿内，作为生物学上非胶原骨蛋白的主要部分，研究表明，胎球蛋白A是循环中主要的钙化抑制剂；干涉钙盐沉淀；近期研究显示低水平胎球蛋白A的慢性肾脏衰竭患者与心血管病的高死亡率显著相关；另一方面，糖尿病老年人血清胎球蛋白A含量比正常人高，这是独立于胰岛素抑制剂的其他标记物；另外，高胎球蛋白A水平还可作为心血管疾病的的危险标记物

实验原理

此试剂盒可用于血清样本中人胎球蛋白A的定量检测；采用双位点夹心法，羊抗人胎球蛋白A多抗结合人胎球蛋白A的不同位点

将含人胎球蛋白A的试

低温物理吸附实验

1．实验目的

（1）了解2020型物理吸附仪的功能、原理及用途 （2）掌握仪器的实际操作过程、软件使用方法 （3）学习分析实验结果和数据 2． 方法原理

低温吸附法测定固体比表面和孔径分布是依据气体在固体表面的吸附规律。在恒定温度下，在平衡状态时，一定的气体压力，对应于固体表面一定的气体吸附量，改变压力可以改变吸附量。平衡吸附量随压力而变化的曲线称为吸附等温线，对吸附等温线的研究与测定不仅可以获取有关吸附剂和吸附质性质的信息，还可以计算固体的比表面和孔径分布。 一．比表面的计算与测定

1．Langmuir吸附等温方程――单层吸附 理论模型：

三点假设：吸附剂（固体）表面是均匀的；吸附粒子间的相互作用可以忽略；吸附是单分子层。

吸附等温方程（Langmuir）

pv?1Vm?b?pVm ------ (1)

式中：v 气体吸附量

Vm 单层饱和吸附量

P 吸附质（气体）压力 b 常数

p以v对p作图，为一直线，根据斜率和截距可求出b和Vm，只要得到单分子层饱和吸附量Vm即可求出比表面积Sg 。用氮气作吸附质时，Sg由下式求得

Sg?4.36?VmW ------ (2)

2. 实验部分

2.1 实验原料和试剂

2.1.1 实验原料

实验所用的凹凸棒粘土原矿产地为甘肃靖远，原矿经烘干水洗，再烘干后研磨，过200目筛，外观呈砖色粉状，其主要成分为非晶质SiO2。 2.1.2 实验试剂

实验所用药品有苯酚(1.0g/L)、4-氨基安替比林、铁氰化钾、氨水(NH3·H2O) 、氯化铵、氢氧化钠、盐酸、溴代十六烷基吡啶、十二烷基磺酸钠、四丁基溴化铵。实验所用主要试剂见表2.1。

表2.1试验试剂

药品名称 溴代十六烷基吡啶 盐酸（HCL） 苯酚 氨水(NH3·H2O) 4-氨基安替比林 氢氧化钠 铁氰化钾 氯化铵 规 格 分析纯(AR) 分析纯(AR) 分析纯(AR) 分析纯(AR) 分析纯(AR) 分析纯(AR) 分析纯(AR) 分析纯(AR) 生产厂商 天津市化学试剂第六二厂三分厂 天津市化学试剂六厂三分厂 北京化学试剂二厂 天津市化学试剂六厂三分厂 上海试剂一厂 天津市化学试剂六厂三分厂 天津市化学试剂四厂 天津市大茂化学试剂厂 2.1.3 实验所用药品的配置 所用药品配置方法如下：

(1)苯酚标准储备液：称取0.5g无色苯酚溶于蒸馏

目的比较不同MTB抗原的酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT),探索其对活动性结核病的辅助诊断价值。方法对结核组132例和对照组90例观察对象应用PPD、克隆表达的早期分泌抗原靶6000(ESAT-6)和ESAT-6／培养滤液蛋白10000(CFP-10)融合蛋白(简称E／C)进行酶联免疫斑点检测(ELISPOT),检测外周血单个核细胞(PBMC)中经3种抗原刺激后斑点形成细胞(SFC)的数量;对照组同时进行P

结核病与胸部肿瘤 2 1 00参考文献1 H o d n s R . Cln c l h r a o i ei so l f z m i e A . liesM i ia a m c k n t f co a i n . p c rv e . ClnP a m a o i e, 1 8 e iw i h r c k n t 9 9, 1 6: 7 4~ 8 5. 2 V e k t s n K . Cln c l h r a o i ei o sd r to n t e n ae a i ia a m c k n tc c n i e ai n i h p te t e t o a in s w i e r s r a

实验一 活性炭吸附实验

一、实验目的：

（1）加深理解吸附的基本原理。

（2）掌握活性炭吸附公式中常数的确定方法。

二、实验原理：

当活性炭对水中杂质吸附时，会同时发生吸附和解吸现象，当吸附和解吸处于平衡状态时，称之为吸附平衡，这是活性炭和水之间的溶质浓度具有一定的分布比值，描述吸附容量qe与吸附平衡时溶液浓度C的关系常用Fruendlich吸附等温式来表达：

qe=kC1/n

qe：吸附容量（mg/g）

k：与吸附比表面积、温度有关的系数 n：与温度有关的系数 n＞1 C：吸附平衡时溶液浓度（mg/L）

这是一个经验公式，通常用图解方法来求k、n值，方法是将上式取对数变成线

性关系：lgqe=lg

c0?c1= lgC + lgk nmC0：水中被吸附物质原始浓度（mg/L） C：被吸附物质的平衡浓度（mg/L） m：活性炭投加量（g/L）

三、实验设备及仪器仪表：

1、振荡器或摇床 2、pH计 pHS型 3、活性炭、甲基橙 4、分光光度计、

5、温度计、三角烧杯、漏斗、1000mL烧杯、50mL容量瓶等。 四、实验步骤：

（1）甲基橙标准曲线制作：用吸量管分别吸取0.3、0.4 、0.5、0.6、0.7、0.8m

免疫层析实验

1．原理

金免疫层析试验（dot immunogold chromatographic assay，DICA）是用胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的快速的固相膜免疫分析技术。本项技是将各种反应试剂分点固定在试纸条 上，检测标本加在试纸条的一端，通过毛细血管作用使样品溶液在层析材料上泳动，样本中的待测物与层析材料中的反应试剂发生特异性结合反应，形成的复合物被 富集或固定在层析条上的特定区域（检测线），通过标记免疫技术显色。本项技术的特点是可进行单份标本检测且简便、快速、不需任何仪器设备，因此，发展非常 迅速。

DICA也是GICA（goldimmunochromatography assay）GICA试剂为试纸条形式。在以塑料条上依次黏贴上以下几种组分，1--吸水纸，2--破璃纤维膜，抹上固定着干燥的金标抗体，3--硝酸纤维素膜，膜上包被着线条状抗体，4--吸水纸。

因为1，4都是吸水纸，由于吸水作用， 一，使样品液从1端向4端移动

二，当样品液达到2时，金标抗体被溶解，同时与标本中的抗原反应形成复合物 三，样品液继续移动至3 时，金标记的抗体复合物与膜上的抗体结合，呈现红色的线条

四，多余的金条抗体继