生物分离纯化的特点

第六章 核酸的分离与纯化

第一节 核酸分离与纯化的设计与原则

细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子，均与蛋白质结合成核蛋白（nucleoprotein）。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白（deoxyribonucleoprotein，DNP），RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP）。其中真核生物的DNA又有染色体DNA与细胞器DNA之分。前者位于细胞核内，约占95%，为双链线性分子；后者存在于线粒体或叶绿体等细胞器内，约占5%，为双链环状分子。除此之外，在原核生物中还有双链环状的质粒DNA；在非细胞型的病毒颗粒内，DNA的存在形式多种多样，有双链环状、单链环状、双链线状和单链线状之分。DNA分子的总长度在不同生物间差异很大，一般随生物的进化程度而增长。如人的DNA大约由3.0×109个碱基对（base pair, bp）组成，与5 243bp

相对来讲，RNA的猿猴病毒（simian virus 40, SV40）相比，其长度约为后者的5.7×105倍。

分子比DNA分子要小得多。由于RNA的功能是多样性的，RNA的种类、大小和结构都较DNA多样化。DNA与RNA性质上的差异决定了两者的

生物分离与纯化技术授

课教案

Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】

《生物分离与纯化技术》授课教案

第一章绪论

教学目的：

熟悉生物物质的概念、种类和来源；

了解分离纯化技术及其基本原理；

熟悉分离纯化工艺的优化、放大和验证工作；

掌握分离纯化的特点与一般步骤；

了解生物分离纯化技术的发展历史；

熟悉生物分离纯化技术的发展趋势。

教学重点：

生物物质的概念、种类和来源；分离纯化工艺的优化、放大和验证工作；分离纯化的特点与一般步骤；生物分离纯化技术的发展趋势。

教学难点：

分离纯化技术及其基本原理；分离纯化工艺的优化、放大和验证工作。

教学课时：4学时

教学方法：多媒体教学

教学内容：

第一节生物分离与纯化的概念与原理

一、生物物质的概念、种类和来源

1.生物物质：氨基酸及其衍生物类、活性多肽类、蛋白质、酶类、核酸及其降解物、糖、脂类、动物器官或组织制剂、小动物制剂、菌体制剂。

2.生物物质来源：动物器官与组织、植物器官与组织、微生物及其代谢产物、细胞培养产物、血液、分泌物及其代谢物

二、生物分离纯化概念

指从发酵液、动植物细胞培养液、酶反应液或动植物组织细胞与体液等中分离、纯化生物产品的过程。

三、生物分离纯化技术

生物分离与纯化复习题 第一章

1、生物分离纯化技术的概念？

以生物物质原料为基础，对目标产物进行提取、纯化、加工制备的生产技术。 2、生物物质与生物产品的区别？

生物物质：生物物质是指存在于生物体内的所有生物活性物质的总称。生物物质的制成品统称为生物产品。

生物产品：在产业中的生物物质的制成品。 3、生物分离纯化技术的原理和特点？

基本原理：利用混合物中不同组分间物理、化学和生物学性质的差别来实现组分间的分离或纯化。

技术原理：选用能够识别这些差别的分离介质或扩大这些差别的分离设备来实现组分间的高效分离。

特点：⑴环境复杂、分离纯化困难含量低、工艺复杂

⑵ 稳定性差、操纵要求严格

⑶ 目标产物最终的质量要求很高

⑷ 终极产品纯度的均一性与化学分离上纯度的概念并不完全相同 ⑸ 终极产品纯度的均一性与化学分离上纯度的概念并不完全相同

4、发酵生物产品分离纯化的生产工艺？ ⑴原材料的预处理 ⑵颗粒性杂质的去除

⑶可溶性杂质的去除和目标产物的初步纯化 ⑷目标产物精制

⑸目标产物的成品加工 5、生物分离技术的应用？ 食品添加剂 药物

第二章

6、预处理的目的？

使目标产物最大限度的转移到溶液中。 7、改变发酵液过滤特性的基本方法？

⑴降

酶的分离纯化

摘要：本文概述了在实验中由于酶浓度、饱和度等不同条件下对酶进行分离纯化的适用方法。酶的分离纯化有很多种方法，在纯化的工艺上有很大的不同，不同来源的酶在分离纯化中表现出不同的洗脱特性。现有酶的分离纯化方法都是依据酶和杂蛋白在性质上的差异而建立的。

关键词：酶；分离；纯化；方法

前言：酶的分离纯化工作，是酶学研究的基础。酶的纯化过程在目前来说仍是一门实验科学。一个特定酶的提纯往往需要经过多个实验的探索才能总结出一般经验规律。酶的分离纯化又与其他蛋白质的纯化过程存在很大的差异，酶的分离纯化有其自己独有的特点：一是特定酶在细胞中的含量少，二是酶通过测定活力的方法可以加以跟踪，前者给实验带来困难，后者为实验提供了捷径。 正文：

1. 酶的分离与纯化的概念[1]

酶的分离与纯化是指将酶从细胞或其他含酶材料中提取出来，再与杂质分开，从而获得符合使用目的、有一定纯度和浓度的酶制剂的过程。

酶分离纯化的一般原则： ①防止酶变性失活

1．）酶纯化一般在低温条件下进行（0~4℃）

2.）各种溶液应该用缓冲液，PH应调到使酶最稳定的PH 3.）各种溶液中还可以加入酶保护剂

②建立一个可靠和快速的测活方法 方法专一、灵敏、精确、简便、经

广东工业大学土壤中微生物的分离与纯化实验报告

微生物学实验报告

实验名称：土壤中微生物的分离与纯化

课程名称 环境微生物学实验

学 院 环境科学与工程学院

专业班级 2011级环境科学（1）班

学 号 3111007364

姓 名 刘迪鸿

联系方式 13824426973

2013年 12 月 10 日

广东工业大学土壤中微生物的分离与纯化实验报告

实验报告 土壤中微生物的分离与纯化

刘迪鸿

（广东工业大学11级环科（1）班）

摘要：各种微生物生长所需条件存在差异，根据需要配制不同的培养基可以得到只含目标菌株的纯培养。

关键词：选择培养基，分离，纯化

一、 实验目的与要求

1. 明确培养基的配制原理，并通过对微生物培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。

2. 掌握根据需要选取不同的环境以找到目标菌株的基本方法，学习分离纯化微生物的基本操作技术，进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术，掌握微生物培养方法以及接种方法。

二、实验方案

1. 实验原理

培养基是人工的将多种物质按各种微生物生长的需要配制而成的一种混合营养基质，用以培养或分离各种微生物，因此，培养基质应当有微生物所能利用的营养成分（包括碳源，氮源，能源，无机盐

简答题

1.简述生物分离过程的特点。

答：（1）产品丰富：产品的多样性导致分离方法的多样性； （2）绝大多数生物分离方法来源于化学分离； （3）生物分离一般比化工分离难度大： ※成分复杂；

※悬液中的目标产物浓度低； ※生物活性条件相对温和； ※生物产品要求高质量； ※获得高纯度的干燥产品； ※卫生。

因此，生物分离过程往往成本很高，在某些产品的生产过程中，分离成本可能占到总成本的80％以上。

（补充：常无固定操作方法可循；生物材料组成非常复杂；分离操作步骤多，不易获得高收率；培养液（或发酵液）中所含目的物浓度很低，而杂质含量却很高；分离进程必须保护化合物的生理活性；生物活性成分离开生物体后，易变性、破坏；基因工程产品，一般要求在密封环境下操作。）

2.简述超临界流体萃取的原理及其特点。

答：超临界流体萃取是利用超临界流体具有的类似气体的扩散系数，以及类似液体的密度（溶解能力强）的特点，利用超临界流体为萃取剂进行的萃取单元操作。

利用超临界流体的特殊性质，使其在超临界状态下，与待分离的物料接触，萃取出目的产物，然后通过降压或升温的方法，使萃取物得到分离。

其特点是密度接近液体，萃取能力强；粘度接近气体，传质性能好；且安全、无毒、产品分离简单

微生物分离纯化技术及其应用

摘要：微生物的分离纯化技术是进行微生物学研究的基础。本文介绍了微生物学中常用的传统分离纯化技术并且分析了其所存在的问题，综述了近年来涌现微生物分离纯化的新技术、新方法，并对其今后的发展趋势作了展望。 关键词：微生物；分离；纯化

Abstract: The microbial separation and purification technology is the basis of microbiological studies. The traditional separation and purification technology in microbiology and its problems of existence was described in this paper. The new methods and new technologies of microbial separation and purification emerged in recent years were summarized .Then its development trends in the future was pr

生物分离与纯化技术模拟试卷八

考试学科 考生班级 生物分离与纯化技术 组、命题教师 系主任 课题组

装 订 线

一、名词解释（每小题3分，共15分） 1．超临界流体： 2．临界胶团浓度： 3．生物分离技术： 4．凝胶过滤： 5．高效液相色谱：

二、单选题（每小题1分，共15分） 1．有机溶剂为什么能够沉淀蛋白质（ ）

A.介电常数大 B介电常数小 C.中和电荷 D.与蛋白质相互反应 2．若两性物质结合了较多阴离子，则等电点pH会（ ） A.升高 B降低 C.不变 D.以上均有可能 3．离子交换树脂适用（ ）进行溶胀 A.水 B乙醇 C.氢氧化钠 D.盐酸

4．下列关于离子交换层析洗脱说法错误的是（ ）

A. 对强酸性树脂一般选择氨水、甲醇及甲醇缓冲液等作洗脱剂 B弱酸性树脂用稀硫酸、盐酸等作洗脱剂

C. 强碱性树脂用盐酸-甲醇、醋酸等作洗脱剂 D. 若被交换的物质用酸、碱洗不

生物分离与纯化技术模拟试卷八

考试学科 考生班级 生物分离与纯化技术 组、命题教师 系主任 课题组

装 订 线

一、名词解释（每小题3分，共15分） 1．超临界流体： 2．临界胶团浓度： 3．生物分离技术： 4．凝胶过滤： 5．高效液相色谱：

二、单选题（每小题1分，共15分） 1．有机溶剂为什么能够沉淀蛋白质（ ）

A.介电常数大 B介电常数小 C.中和电荷 D.与蛋白质相互反应 2．若两性物质结合了较多阴离子，则等电点pH会（ ） A.升高 B降低 C.不变 D.以上均有可能 3．离子交换树脂适用（ ）进行溶胀 A.水 B乙醇 C.氢氧化钠 D.盐酸

4．下列关于离子交换层析洗脱说法错误的是（ ）

A. 对强酸性树脂一般选择氨水、甲醇及甲醇缓冲液等作洗脱剂 B弱酸性树脂用稀硫酸、盐酸等作洗脱剂

C. 强碱性树脂用盐酸-甲醇、醋酸等作洗脱剂 D. 若被交换的物质用酸、碱洗不

土壤微生物分离纯化及测数

作者：土壤微生物|分离纯化及测数 来源：生物秀 时间：2008-5-28

一、实验目的要求

1 了解土壤微生物的分离纯化及测数的基本原理。 2 学习并掌握微生物分离纯化技术方法。 3 学习并掌握微生物平板菌落计数的技术方法。 二、基本原理

土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过分离进行纯培养，并能对特定类群进行数量测定。基本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。 三、实验步骤 （一）土壤样品采集

在待测田块上，若田块面积小于50平方米则按对角线三点采样，若田块面积大于50平方米按对角线五点采样。采样一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土1--2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。 （二）好气性细菌的分离纯化及测数 1.制备土样稀释液 吹吸三次混匀 无菌操作

另留一管不稀释留作对照（CK）

2.培养基的准备

融化牛肉膏蛋白胨培养基，融化后保温在48℃。并取6个无菌培养皿，分别在皿底贴好标签，注明10-5、10-6、CK（每个稀释