病原菌的分离与纯化

.

普通植物病理学

实验十七、病原菌的分离培养和纯化

一、目的要求

(1)了解分离与纯化微生物的基本原理及方法。

(2)掌握倒平板的方法和组织分离、稀释分离、平板划线分离的基本操作技术。

(3)掌握在平板、斜面及液体培养基上培养病原菌及观察其培养性状的方法。

二、基本原理植物病原菌的分离培养，是植物病理实验室工作中的基本技能。为了获得某微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧气等条件要求不同，而供给它们适宜的生活条件，即让病原菌生活在适宜的培养基上，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而得到纯菌株。植物病原真菌的分离方法主要有组织分离法和稀释分离法两种。最常用的方法是组织分离法，而稀释分离法主要用于病组织上产生大量孢子的病原真菌的分离。病原细菌的分离方法以划线分离法为最常用，在有些情况下也采用稀释分离法。为了获得分离菌的纯培养，必须要进行分离菌的纯化，纯化的方法类似于分离工作中采用的稀释分离法或划线分离法。

三、材料、仪器与用具

1．材料(依当地情况进行选择，下列材料供参考)

(1)稻瘟病叶、病节、病穗颈(pyricularia orycae)。

(2)玉米大斑病叶(exserohilum turcicum)。

(3)玉米弯孢菌

第五章 常见病原菌

一、 填空题

1. 根据色素、生化反应的不同可将葡萄球菌分为__金黄色__葡萄球菌、__表皮__葡萄球菌和__腐生__葡萄球菌。

2. 链球菌感染后引起的超敏性反应疾病有__风湿热___和___急性肾小球肾炎__。

3. 脑膜炎奈瑟菌呈__肾或豆_形，通过__飞沫__传

播，引起的疾病是___流行性脑脊髓膜炎__。 4. 人患肠热病后可获得___牢固__免疫力，其免疫以__细菌免疫__为主。 5. 霍乱弧菌有单根__鞭毛_，可作穿梭氧运动，生长最适宜的PH__8.4~9.2__。

6. 常见致病的厌氧芽孢梭菌有__破伤风梭菌_、__产气荚膜梭菌__和__肉毒梭菌__。

7. 对受伤机会较多的人群

可定期接种破伤风__类毒素__，对伤口较深或有泥土污染者应肌注破伤风__抗毒素__进行紧急预防。

8. 在牛奶培养基中有汹涌发酵现象的细菌是__产气荚膜梭菌__。

9. 结核分枝杆菌革兰染色不易染色，常用__抗酸__染色，呈__红_色。

10. 检测机体对结核是否具有免疫力，常用的体内皮肤试验是___结核菌素

（PPD）试验__。

11. 麻风分枝杆菌的传播方式是__皮肤、黏膜、呼吸道及密切接触__，引起__麻风___。

12. 铜绿

第五章 常见病原菌

一、 填空题

1. 根据色素、生化反应的不同可将葡萄球菌分为__金黄色__葡萄球菌、__表皮__葡萄球菌和__腐生__葡萄球菌。

2. 链球菌感染后引起的超敏性反应疾病有__风湿热___和___急性肾小球肾炎__。

3. 脑膜炎奈瑟菌呈__肾或豆_形，通过__飞沫__传

播，引起的疾病是___流行性脑脊髓膜炎__。 4. 人患肠热病后可获得___牢固__免疫力，其免疫以__细菌免疫__为主。 5. 霍乱弧菌有单根__鞭毛_，可作穿梭氧运动，生长最适宜的PH__8.4~9.2__。

6. 常见致病的厌氧芽孢梭菌有__破伤风梭菌_、__产气荚膜梭菌__和__肉毒梭菌__。

7. 对受伤机会较多的人群

可定期接种破伤风__类毒素__，对伤口较深或有泥土污染者应肌注破伤风__抗毒素__进行紧急预防。

8. 在牛奶培养基中有汹涌发酵现象的细菌是__产气荚膜梭菌__。

9. 结核分枝杆菌革兰染色不易染色，常用__抗酸__染色，呈__红_色。

10. 检测机体对结核是否具有免疫力，常用的体内皮肤试验是___结核菌素

（PPD）试验__。

11. 麻风分枝杆菌的传播方式是__皮肤、黏膜、呼吸道及密切接触__，引起__麻风___。

12. 铜绿

分枝菌杆核杆菌

结细菌简结介核枝杆菌，俗称分结杆核菌，引起结核病 的病是原菌 可侵犯全。各身器，官以但结核肺最为见多结。核 病至今为重要仍传的染病。计估界人口中1世3感 /结染分枝杆核菌据W。H报道，O每约有年800万新病 发例，生少有至30万人死于0病该。我建国国前 亡率死200达-300人1/万，居各种0疾死亡原病因之 首建国，人后生民水活提平高卫生状态，善改，特 是别开展了防群治群，儿童遍接普种卡苗，介核结 病的发率病死和率亡大为低降。一、

物学生性状态染色形：、结1核枝杆菌为分细略带弯长曲杆的 ；细胞菌脂壁质含较量高约，占重的6干%; 0大有分枝菌量包酸围在聚肽糖的层外面可， 响染料影穿入的，故分枝杆一菌般用抗染酸色:法 以% 石5炭复红酸温染加色后以染上，可用但 3盐酸乙%不易醇脱色―是由―于石酸炭复红分与 菌酸枝固牢结合成复物。合再加若用美蓝复，则分染 枝菌杆红色，而其他细呈和菌景背的中物被质精酒脱色 为蓝染色。

2 、荚膜：无鞭，毛芽无孢，年近发现结核分 杆菌枝细胞在壁尚外一层荚膜有。一 因般制片遭受破时而坏不易到。若看制在备电 标镜本定前用明固胶处，理防可止膜 荚水收缩。在电脱下镜看可到菌体外有层一 较的厚明区，即荚透膜荚，对结膜分

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第31卷第8期2009年8月

中国预防兽医学报

ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine

Vol.31，No.8Aug.2009

5株抗常见动物病原菌的优良拮抗放线菌的分类鉴定

来航线，傅艳萍，赵卉琳，朱

华

(西北农林科技大学生命科学学院/资源环境学院，陕西杨凌712100)

摘要：为寻找新的抗菌微生物，本研究从西北部分地区盐渍土中分离到5株具有拮抗作用的放线菌1202、

02-F-17、66J03、3501及3010，其代谢产物对引起鸡大肠杆菌病的大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli)和引起牛隐性乳房炎的无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)等多种动物病原菌均有较强的抑菌作用。通过对其进行形态学特征、生理生化特性、细胞壁化学组分以及16SrDNA序列等多相分类研究，初步确定其分类地位分别为：5株菌均属链霉菌，其中1202与戈壁三素链霉菌(Streptomycesgobitricini)最接近，02-F-17与晶体链霉菌(Streptomycescavis-

cabies)相近，66J03与易变链霉菌(Streptomycesmutabilis)相近

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第31卷第8期2009年8月

中国预防兽医学报

ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine

Vol.31，No.8Aug.2009

5株抗常见动物病原菌的优良拮抗放线菌的分类鉴定

来航线，傅艳萍，赵卉琳，朱

华

(西北农林科技大学生命科学学院/资源环境学院，陕西杨凌712100)

摘要：为寻找新的抗菌微生物，本研究从西北部分地区盐渍土中分离到5株具有拮抗作用的放线菌1202、

02-F-17、66J03、3501及3010，其代谢产物对引起鸡大肠杆菌病的大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli)和引起牛隐性乳房炎的无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)等多种动物病原菌均有较强的抑菌作用。通过对其进行形态学特征、生理生化特性、细胞壁化学组分以及16SrDNA序列等多相分类研究，初步确定其分类地位分别为：5株菌均属链霉菌，其中1202与戈壁三素链霉菌(Streptomycesgobitricini)最接近，02-F-17与晶体链霉菌(Streptomycescavis-

cabies)相近，66J03与易变链霉菌(Streptomycesmutabilis)相近

夸质量－卫生 标准 安全呤

由凌鼻业

２０１０年第１期ＭＥＡＴＩＮＤＵＳＴＲＹ

总第３４５期

动物源性食品病原茵防控现状与发展趋势

黄金林潘志明焦新安＋

扬州Ｉ大学（江苏省人兽共患病学重点实验室）

江苏扬州２２５００９

摘要动物源性病原茵是引起人类疾病和食品安全的主要原因之一。针对我国动物源性食品病原茵防控现状进行了客观分析，指出了防控体系中存在的不足，指出了动物源性食品病原茵防控发展趋势。

关键词动物性食品病原茵

防控现状发展趋势

Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉａｉｎａｎｉｍａｌ——ｄｅｒｉｖｅｄｆｏｏｄｓａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｔｒｅｎｄｓＡｂｓｔｒａｃｔ

Ａｎｉｍａｌ—ｂｏｒｎｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｓ

ａ

ｍａｊｏｒ

ｒｅａｓｏｎ

ｆｏｒｈｕｍａｎｄｉｓｅａｓｅａｎｄｆｏｏｄｓａｆｅｔｙ．Ａｉｍｅｄ

ａｔ

ｃｕｒｒｅｎｔｓｔａｔｅ

ｉｎａｎｉｍａｌ—ｄｅｒｉｖｅｄ

ｆｏｏｄｓ，ｏｂｊｅｃｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｃａｒｒｉｅｄｔｈｒｏｕｇｈ，ｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｔｒｏｌ

ｓｙｓｔｅｍｓｈｏｒｔｃｏｍｉｎｇｓｗｅｒｅｐｏｉｎｔｅｄｏｕｔａｎｄｓｕｇｇｅｓｔｉｏｎ

ｔｏ

ｉｍｐｒｏｖｅｉｔｗａｓｐｕｔｆｏｒｗａｒｄｉ

土壤中放线菌的分离和纯化实验

一、实验目的

1、制作

MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。

2、掌握培养基的灭菌方法。

掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。 4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程； 5、 掌握高氏一号培养基的配制方法；

6、 复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。

7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。

二、实验材料

高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、

显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀

三、实验原理

植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）

第 1 页

或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。

四、实验步骤

1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制

土壤中放线菌的分离和纯化实验

一、实验目的

1、制作

MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。

2、掌握培养基的灭菌方法。

掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。 4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程； 5、 掌握高氏一号培养基的配制方法；

6、 复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。

7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。

二、实验材料

高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、

显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀

三、实验原理

植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）

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或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。

四、实验步骤

1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制

I床缶医兽

国中牧兽畜医文摘20 1 3年2 9卷第l O期猪中暑的诊断 与一疗治 J,日 7 J范广习陆仙红 (1 江.苏省苏市州吴中区东山镇物防疫动，站苏苏州江 2江.省苏苏市州吴区横中泾动防物疫站江，苏州苏 1 2 150 7; 2 1 5 103 )

暑中日射是病和射病热的统称夏。季受到 I{光 直射时，引 ~43 h,重注复射 1次。对心功能全不患的可用猪浓度为2%安钠0 起中枢经神发生急性病变，脑及脑膜血充，致使神经机发能严生咖注液5射~ 0l l,肌 m注肉射或皮下注。同时射服内荷薄水 1 0 o ml 重障碍的叫射日；因气病候热炎环，境潮，湿体产热得多生放而樟或酊脑 0 3 l m。 散得 少全，身过热而，引起枢中神经机能紊乱叫热的射病。临床 4 防预上以超高体温循环衰竭、为特征。近年来，盛夏酷暑，气天持第1,续气炎候热，时要供给足充饮的水，猪舍要通良风好，圈高温燥热、,环境、栏、猪舍的防暑体温工降作的不好做舍，内不要拥内挤，最好让猪自由洗澡，或用常水喷冷洒猪体，中午应 风通不良，再加上猪饲养密度、大度拥挤过，很容易致导猪体内在阴凉休处息。车运船输不要时过拥于挤注，通意风途，中定时积热过多而能及时不散发出，使中