miRNA分析流程

miRNA数据库及靶基因分析软件 1.miRBase: http://www.mirbase.org

miRBase序列数据库是一个提供包括已发表的miRNA序列数据、注释、预测基因靶标等信息的全方位数据库，是存储miRNA信息最主要的公共数据库之一。miRBase提供便捷的网上查询服务，允许用户使用关键词或序列在线搜索已知的miRNA和靶标信息。

2.miRecords: http://mirecords.biolead.org/

动物 mirna的靶相互作用的数据库, 包括人工收集实验验证的, 预测的 miRNA的靶目标. 靶标预测工具DIANA-microT, MicroInspector, miRanda, MirTarget2, miTarget,

NBmiRTar,

PicTar,

PITA,

RNA22,

RNAhybrid,

and

TargetScan/TargertScanS.

3.PMRD: http://BioInformatics.cau.edu.cn/PMRD/ PMRD是一个关于植物microRNA数据库，包括了microRNA序列和它们的靶基因、二级结构、表达谱、基因组搜索等等，并且该数据库尝试着整合大量的关于

miRNA数据库及靶基因分析软件 1.miRBase: http://www.mirbase.org

miRBase序列数据库是一个提供包括已发表的miRNA序列数据、注释、预测基因靶标等信息的全方位数据库，是存储miRNA信息最主要的公共数据库之一。miRBase提供便捷的网上查询服务，允许用户使用关键词或序列在线搜索已知的miRNA和靶标信息。

2.miRecords: http://mirecords.biolead.org/

动物 mirna的靶相互作用的数据库, 包括人工收集实验验证的, 预测的 miRNA的靶目标. 靶标预测工具DIANA-microT, MicroInspector, miRanda, MirTarget2, miTarget,

NBmiRTar,

PicTar,

PITA,

RNA22,

RNAhybrid,

and

TargetScan/TargertScanS.

3.PMRD: http://BioInformatics.cau.edu.cn/PMRD/ PMRD是一个关于植物microRNA数据库，包括了microRNA序列和它们的靶基因、二级结构、表达谱、基因组搜索等等，并且该数据库尝试着整合大量的关于

已有文献报道表明,等量的miRNA mimics 和pre-miRNA 进入体外或体内时,pre-miRNA能更特异地且高效的形成mature miRNA,并表现出更高的生物学活性。鉴于pre-miRNA 具有高效、低细胞毒性的特点,我们合成了pre-miR-21 和miRNA mimic,以相同剂量转染细胞,然后用RT-PCR 检测miRNA-21 成熟体的形成。试验结果表明效果远优于mimics,因此pre-miRNA在系统多因素的研究中具备其更独特的优势!

使用siRNA、miRNA mimic 、pre-miRNA进行miRNA 生物学功能研究的区别

Frank 20120715

miRNA是一类大小约为22个碱基的小RNA分子。它们在转录后阶段对基因表达进行调控。调控机制是通过与靶基因的mRNA互补序列结合，抑制蛋白质的 翻译或降低mRNA的稳

定性，从而抑制靶基因的表达。科研人员已逐步认识到miRNA在细胞的发育，分化，生长等生命活动中起着非常重要的调控作用，因此越来越多的科研人员把目光聚焦到这一领域，并期待能一窥miRNA的科学奥妙。

成熟的miRNA是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，初级转录物称为pri-miRN

Human Brain Cancer miRNA PCR Array: MIHS-108Z

Anaplastic Astrocytoma: miR-107, miR-10b-5p, miR-124-3p, miR-125b-5p, miR-127-5p, miR-129-5p, miR-137, miR-138-5p, miR-187-3p, miR-203a, miR-218-5p, miR-296-5p,

miR-31-5p, miR-320a, miR-7-5p.

Glioblastoma: miR-101-3p, miR-107, miR-10b-5p, miR-124-3p, miR-128, miR-129-5p, miR-130a-3p, miR-132-3p, miR-133a, miR-133b, miR-137, miR-138-5p, miR-149-5p, miR-153, miR-16-5p, miR-181a-5p, miR-181b-5p, miR-185-5p, miR-187-3p, miR-191-5p, miR-203a, miR-21-5p, miR-210, miR-218-5p, miR-221-

已有文献报道表明,等量的miRNA mimics 和pre-miRNA 进入体外或体内时,pre-miRNA能更特异地且高效的形成mature miRNA,并表现出更高的生物学活性。鉴于pre-miRNA 具有高效、低细胞毒性的特点,我们合成了pre-miR-21 和miRNA mimic,以相同剂量转染细胞,然后用RT-PCR 检测miRNA-21 成熟体的形成。试验结果表明效果远优于mimics,因此pre-miRNA在系统多因素的研究中具备其更独特的优势!

使用siRNA、miRNA mimic 、pre-miRNA进行miRNA 生物学功能研究的区别

Frank 20120715

miRNA是一类大小约为22个碱基的小RNA分子。它们在转录后阶段对基因表达进行调控。调控机制是通过与靶基因的mRNA互补序列结合，抑制蛋白质的 翻译或降低mRNA的稳

定性，从而抑制靶基因的表达。科研人员已逐步认识到miRNA在细胞的发育，分化，生长等生命活动中起着非常重要的调控作用，因此越来越多的科研人员把目光聚焦到这一领域，并期待能一窥miRNA的科学奥妙。

成熟的miRNA是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，初级转录物称为pri-miRN

miRNA研究方法

尽管早在1993年，科学家就发现了第一个microRNA，但直到2003年以后，这种小RNA分子的大作用才不断被发现。研究显示：miRNA通过与转录本的相互作用，关闭或抑制基因的表达，影响了30%的基因。miRNA在多个组织中，例如正常和肿瘤组织中差异表达。因此，通过表达谱分析寻找疾病相关miRNA并进行发病机理研究，最终应用于肿瘤诊断和治疗，已经成为目前miRNA研究的重要方向。在研究中，从深度测序、miRNA芯片到通过导入化学合成的mimics/antagomirs等实现miRNA过表达和抑制，都是研究中常用的方法。同时，在miRNA研究中，生物信息学分析扮演着越来越重要的角色。

下表介绍了miRNA研究和应用中科学家关注的主要科学问题以及目前常用的研究方法。

miRNA主要研究技术

深度测序 抽提分离小分子（例如18-30nt）RNA，通过RT-PCR扩增之后，利用solexa深度测序，并进行生物信息学分析，获得miRNA表达谱。深度测序结合生物信息学分析手段，可以对海量数据进行分析，分别统计出已知的miRNA（miRNA-known）、新的miRNA（miRNA-new）以及可能的新miRNA（miRNA-cadida

调控DNA损伤修复基因的microRNA

摘要：肿瘤的发生是个多级的过程，正常细胞的基因组受到各种各样的损伤而无法修复时，就有可能发生癌变转化为肿瘤细胞。细胞为了保护其基因组的完整性，会需要一套复杂的DNA损伤修复系统，当细胞的DNA受到损伤时，细胞就会启动该系统，引起细胞周期阻断、凋亡或者进行DNA损伤修复。放、化疗是通过引起DNA损伤而杀死肿瘤细胞的，也是一种主要的肿瘤治疗方法。损伤DNA修复蛋白，使细胞损伤无法修复，就能增加肿瘤放、化疗的效率。近年来，越来越多的证据证明microRNA（miRNA）参与DNA损失修复网络的调控过程。miRNA是一类内源性的小的非编码RNA，能在转录后水平调节基因的表达。由于其本身的特性，miRNA在许多生命进程中扮演着重要角色，本文探讨了miRNA在DNA损伤修复通路和肿瘤中的作用。

关键词：DNA损伤修复通路；miRNA；调控 1、前言

DNA损伤修复（DDR）通路是一个复杂的信号传导通路，在DNA损伤之后被激活。人体基因组DNA每时每刻都在遭受着来自体内外的各种因子的攻击而被损伤，细胞为了保护基因组的完整性，会启动DNA损伤修复系统，使细胞发生周期阻滞，最终细胞被修复或者凋亡[1]。许多研究已证实，

组织miRNA提取(E.Z.N.A. miRNA Kit)

器具和耗材

E.Z.N.A. miRNA试剂盒 、加样器一套、涡旋器、离心机、离心管架、各种规格离心管（15ml、1.5ml、）、RNase-free的各种规格吸头（1ml、200ul、10ul）、镊子、研钵、研棒、保温杯（盛液氮用） 试剂：

氯仿、75%乙醇、100%乙醇、RNase-free水 操作步骤： 准备工作

1. 实验前1天将研钵和研棒放在84消毒液中浸泡24小时，实验前30min加入液氮冷却。 2. 实验前清理实验台面，用75%乙醇擦拭台面2篇，喷洒RNase-free水于台面和要用的器械盒试剂盒；

3. 将15ml离心管在液氮中提前预冷。

4. RWB Wash Buffer中加入48ml无水乙醇。

5. 将冻存样品从-70℃冰箱转移至装有液氮的保温杯中。

组织研磨和匀浆

1. 取冰冻组织材料50－100mg置于放有液氮的研钵中，在研钵中加液氮研磨成粉末（尽量细），注意持续补充液氮； 2. 用在液氮中预冷的1ml吸头转移组织粉末至提前预冷的15ml离心管中 3. 待液氮完全蒸发后加入1mlRNA-Solv试剂，室温下孵育2-3min

4. 每1mlRNA-Solv试

组织miRNA提取(E.Z.N.A. miRNA Kit)

器具和耗材

E.Z.N.A. miRNA试剂盒 、加样器一套、涡旋器、离心机、离心管架、各种规格离心管（15ml、1.5ml、）、RNase-free的各种规格吸头（1ml、200ul、10ul）、镊子、研钵、研棒、保温杯（盛液氮用） 试剂：

氯仿、75%乙醇、100%乙醇、RNase-free水 操作步骤： 准备工作

1. 实验前1天将研钵和研棒放在84消毒液中浸泡24小时，实验前30min加入液氮冷却。 2. 实验前清理实验台面，用75%乙醇擦拭台面2篇，喷洒RNase-free水于台面和要用的器械盒试剂盒；

3. 将15ml离心管在液氮中提前预冷。

4. RWB Wash Buffer中加入48ml无水乙醇。

5. 将冻存样品从-70℃冰箱转移至装有液氮的保温杯中。

组织研磨和匀浆

1. 取冰冻组织材料50－100mg置于放有液氮的研钵中，在研钵中加液氮研磨成粉末（尽量细），注意持续补充液氮； 2. 用在液氮中预冷的1ml吸头转移组织粉末至提前预冷的15ml离心管中 3. 待液氮完全蒸发后加入1mlRNA-Solv试剂，室温下孵育2-3min

4. 每1mlRNA-Solv试

CAE分析流程

一、3D建模：在三维模型在装配车架上零部件。

二、抽取中面：在CATIA中，对车架纵梁、纵梁加强板、横梁及横梁连接板等车架系统本体的零部件进行抽取中面；板簧支座、油箱托架、电瓶框、尿素罐支架等保留3D模型。（保存为.stp格式或者直接使用.CATProduct格式）

三、划分网格：

1、在Hypermesh中打开3D模型，对components中的名字重新命名，方便查找对应的零部件。

2、对车架上的孔进行优化处理。（更优网格质量） Geom autocleanup

效果

3、对components进行2D网格划分。（横梁为例）

2D automesh选中要划分网格的components（shift+鼠标左键框选） mesh， 完成后 return elem cleanup清除坏的网格（shift+鼠标左键框选），完成后return qualityindex 检测网格质量同时手动优化网格，直至failed趋近于0

清除网格

手动清除

4、对components进行3D网格划分。（板簧支架为例）

3D tetramesh选中要划分网格的components（shift+鼠标左键框选） 选择 Volum