植物培养室

植物组织培养:指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞或原生质体，培养在人工配制的培养基上，人为控制培养条件，使其生长、分化、增殖，发育成完整植株或生产次生代谢物质的过程和技术。也称为离体培养。

外植体:凡是用于离体培养的细胞、组织或器官统称为外植体。 组织培养六要素: 无菌条件 外植体 人工培养基

人工条件:温度、光强、光照时间

细胞全能性:增殖、分化、发育成完整植株 培养容器:能进行气体交换 培养材料类型:

1. 组织培养:指以分离出植物各部位的组织（如分生组织、形成层、薄壁组织等）或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养，是狭义的组织培养。 2. 器官培养:植物的六大器官的无菌培养

3. 胚胎培养:幼胚、成熟胚、胚乳、胚珠、子房的无菌培养

4. 细胞培养:指对单个细胞或较小细胞团的离体无菌培养，获得单细胞无性繁殖系。 5. 原生质体培养:指以除去细胞壁的细胞（原生质体）为外植体的离体无菌培养。 6. 其他:次生代谢物生产、脱毒培养、人工种子等。 按照培养过程分为:初代培养和继代培养 按照培养基类型分为:液体培养和固体培养

按照培养目的分:愈伤组织培养、分化培养和生根培养 主要研究任务:

细胞、组织、器官等在离体培养下的: 营养条件、

第一章 实验室与基本操作

第一节 实验室及其基本设备

实验室的大小取决于工作的目的和规模：

1. 以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产影响效率。

2.在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来设计避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。

实验室设计

标准的组织培养实验室包括：洗涤室（准备室）；配置室；灭菌室；接种室；培养室；观察室等

一、准备室

作用：材料、培养器械的清洗、培养基准备、灭菌等的准备工作。

普通化学实验室：仪器及设备、化学药品。

纯水仪、冰箱、移液枪、过滤灭菌器、电炉、微波炉、磁力搅拌器、低速台式离心机、电脑等 。 作用：配制培养基。

洗涤室：清洗、贮存器皿设施、鼓风干燥箱等。 作用：玻璃器皿、用具和培养材料的洗涤。

灭菌室：

①高压蒸气灭菌装置：如立式、卧式和手提式灭菌器。 作用：培养基、器械、棉塞、无菌纸等灭菌消毒 ②细菌过滤器

二、无菌操作室

作用：进行植物材料分离接种的重要场所，需长时间的无菌操作，对组织培养成功起关键作用。

试验设施；超净工作台；紫外灯；固定式和移

实验11 植物组织培养

1．植物组织培养的原理是植物细胞的全能性。

2．植物组织培养的各个步骤应严格执行无菌操作技术，所以在生产时为了防止污染，植物组织一般要先进行消毒，先用70%的酒精浸泡，再用5%的次氯酸钠浸泡，最后用无菌水清洗。各种器皿和培养基等通常用高压蒸汽灭菌法灭菌。

3．与培养微生物的LB培养基相比，植物组织培养的MS培养基中要添加生长素和细胞分裂素类似物。4．在菊花的组织培养过程中，首先将消毒后的菊花茎的切段接种在加有适当配比生长调节剂的MS培养基上，给予一定的温度和光照，使其先脱分化形成愈伤组织，再将其转移至含有较多细胞分裂素类似物——苄基腺嘌呤（简称BA，需用HCl溶解）的培养基上，诱导其长出丛状苗。将它分株后，再移入含有较多生长素类似物——萘乙酸（简称NAA，需用NaOH溶解）的培养基上，使其生根。

5．通过植物组织培养产生的幼苗需要移栽至草炭土或蛭石中，给予适宜的光照、温度和80%以上的湿度等条件，锻炼一段时间，最后再定植到土壤中。

植物的克隆

（1）植物克隆的理论基础是植物细胞的全能性，技术基础是植物组织培养。

（2）在植物组织培养过程中，将离体的植物组织或细胞放在加有适当配比生长调节剂的培养基上进行培养，它会先发生脱

植物组织培养试题

一、名词解释

1. 外植体

2. 愈伤组织培养

3. 单倍体育种

4. 液体悬浮培养

5. 玻璃化现象

1、外植体：在植物组织培养过程中，由植物体上切取的根、茎、叶、花、果、种子

等器官以及各种组织、细胞或原生质体等统称为外植体。

2、热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。

3、平板培养法：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。

4、消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。

5、玻璃化现象：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。

1、脱毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。

2、灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。

3、褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。 4、纸桥培养：将培

植物组织培养试卷

植物组织培养试卷

一、名词解释：（每小题3分，共15分）

1．初代培养基：是指用来第一次接种外植体的培养基。

2．脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。

3．液体培养：指在进行培养时，培养基中不加琼脂等凝固剂，一般需要通过振荡等方法解决培养基的通气情况。

4．细胞全能性：一个细胞能产生一个完整植株的固有能力，或植物细胞具有全部的遗传信息，不论是性细胞还是体细胞，在特定环境下，能进行表达而产生一个独立完整的个体。

5．再分化：愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。

二、填空（每空1分，共40分）

1． 植物组织培养过程中，最常用的培养基是 ，培养基的pH因外植体的来源不同而异，常用 和 调节pH，大多数植物的pH要求调节在 范围内。 2． 可以通过 、 、 、 、 等措施预防褐变的发生。 3． 植物组织培养时，外植体可以是 、

拟南芥组织培养

一、种子消毒：

方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。

方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。

消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。

方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。 二、选用的培养基

选用1/2MS培养基对种子进行培养。（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。

MS培养基

植物细胞培养技术的应用及前景

09生物科学 叶跃磷

摘要：植物细胞培养技术是应用生物工程研究成果，在细胞水

平上生产植物生物制品的技术。细胞工程是生物技术的四大领域之一 ,随着社会的不断进步和科学的不断发展,细胞工程在生命科学研究中起着不可估量的作用。植物细胞培养技术作为细胞工程中的重要技术现已广泛应用于生命科学的各个研究领域,是生物技术最新发展的重要组成部分。本文着重介绍了植物细胞培养技术的应用及其发展前景。

关键词：植物细胞培养、次生代谢产物、技术、生物转化、植物、人工种子、植物细胞培养、应用

前言：植物细胞培养技术作为细胞工程中的重要技术现已广泛应用于生命科学的各个研究领域,是生物技术最新发展的重要组成部分。植物细胞离体培养包括细胞、组织和细胞融合。[2]植物细胞的大量培养是利用植物细胞体系、通过现代生物工程手段,进行工业规模生产,以获得各种产品的一门新兴的跨学科技术。十九世纪九十年代, Haberlandt首先进行了植物细胞的培养; 1939 年, White, Nobecourt, Gau theret分别发表论文, 提出非分化的植物细胞可以无限期地进行培养, 为植物细胞培养的发展奠定了基础 。1942 年,Gau the

毕业论文(设计)

题 目 姓 名 专 业 指导教师

浅谈植物细胞的悬浮培养技术 姚虎 学号 014010210118 生物工程（070404） 王大红 职称 讲师 中国·武汉 二○一二年四月

目录

摘 要 ........................................................................ 3 关键词 ....................................................................... 3 Abstract ....................................................................... 3 Key words ..................................................................... 3 前言 ......................................................................... 4 1.细胞悬浮培养的定义 .........

植物组织培养实验指导

2012.3

附录 培养基母液的配制

一、实验目的：掌握培养基母液配制的方法。

二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。 三、实验器具与药品：

电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。

配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。

四、培养基母液的配制过程

首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。 母液种类 成分 规定用扩大 称取量母液定配1LMS量ml/L 倍数 m

植物细胞培养技术的应用及前景

09生物科学 叶跃磷

摘要：植物细胞培养技术是应用生物工程研究成果，在细胞水

平上生产植物生物制品的技术。细胞工程是生物技术的四大领域之一 ,随着社会的不断进步和科学的不断发展,细胞工程在生命科学研究中起着不可估量的作用。植物细胞培养技术作为细胞工程中的重要技术现已广泛应用于生命科学的各个研究领域,是生物技术最新发展的重要组成部分。本文着重介绍了植物细胞培养技术的应用及其发展前景。

关键词：植物细胞培养、次生代谢产物、技术、生物转化、植物、人工种子、植物细胞培养、应用

前言：植物细胞培养技术作为细胞工程中的重要技术现已广泛应用于生命科学的各个研究领域,是生物技术最新发展的重要组成部分。植物细胞离体培养包括细胞、组织和细胞融合。[2]植物细胞的大量培养是利用植物细胞体系、通过现代生物工程手段,进行工业规模生产,以获得各种产品的一门新兴的跨学科技术。十九世纪九十年代, Haberlandt首先进行了植物细胞的培养; 1939 年, White, Nobecourt, Gau theret分别发表论文, 提出非分化的植物细胞可以无限期地进行培养, 为植物细胞培养的发展奠定了基础 。1942 年,Gau the