酵母菌dna复制的主要聚合酶
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酵母菌DNA
采用3种方法对不同酵母菌的总DNA进行提取,经琼脂糖凝胶电泳、ND-1000型微量紫外分光光度计检测以及酶切、连接、预扩增试验结果的分析,表明采用改良氯化苄法提取酵母菌的总DNA质量最好,基本无DNA碎带,蛋白质污染小。通过对野生酵母菌菌株的验证试验,进一步证明采用改良氯化苄法提取的总DNA产量稳定、重复性好,可以直接用于限制性内切酶酶切试验,完全适于AFLP分析及一些其它分子生物学研究的要求方法三:酵母菌genomics/\基因组DNA的提取
一:仪器:同方法一
二:试剂:SE缓冲液(1M山梨醇,0.1MEDTA pH7.5);溶菌酶(蛋白酶K缓冲液(10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA);其余同前
三:操作
1.5ml 对数生长期细菌细胞
离心,12000rpm,1-2min
沉淀
溶于590ulSE缓冲液中混匀+10ul溶菌酶37℃,1hr
离心,12000rpm,8-10min
沉淀
溶于100μL,0.5μl蛋白酶K,混匀,37℃,1hr
加入1.2ml的CTAB
酵母菌DNA的提取
酵母DNA提取方法
方法一:
石英砂法
1、5000rpm×5min 收集过夜培养的菌体(5ml左右),于 200μL 裂解液(50 mmol/ L Tris-HCl pH 8.0 , 180 mmol/ LEDTA pH 8.0 , 1 % SDS , 现配)中,加入 3/10 总体积石英砂在涡流混合器上振荡 13min,每隔 4min 将离心管取出用力甩几下,然后 65℃水浴 10min。 2、加入 200μL 5mol/L KAc,冰浴 8min; 3、12000rpm×5min 转移上清至新的离心管中;
4、加入 3 mol/L NaAc 35μl,加入异丙醇 200μL混匀后冰浴 8min,12000rpm×5min收集沉淀;
5、200μL TE 溶解,加入 RNase10μL,65℃水浴 10min; 6、加入 200μL 氯仿-异戊醇(24:1),抽提;
7、温柔地取上清 150μL ,加入 20μL 3 mol/L NaAc 及 375μL 无水乙醇,混匀后12000rpm×8min 收集 DNA;
8、70% 乙醇洗涤沉淀,吹干后 TE 溶解,-20℃保藏。
方法二:
蜗牛酶法
1. 接种于5 ml的YEPD培养基中在
哺乳动物DNA聚合酶Pol δ
摘 要
哺乳动物DNA聚合酶Pol δ,是一个由四亚基组成的复合物,四个亚基分别是p125、p50、p68和p12。它不但在真核生物DNA复制过程中起着重要的作用,而且也参与DNA的修复和基因重组。在维持细胞周期的正常调节以保证基因组结构的完整性和遗传的稳定性等方面具有特殊的重要意义。
DNA在细胞内外各种因素的作用下可产生严重的损伤,破坏了基因组的完整性。为了应对复制压力或基因损伤试剂造成的DNA损伤,细胞自身拥有一套防御机制─DNA损伤应答(DDR)。这一机制通过募集和装备一系列与修复相关的蛋白复合物来协调整个应答网络系统,包括DNA修复、细胞周期检查点的激活以及细胞的凋亡等。目前普遍认为DDR是一个复杂的过程,它能够使DNA进行修复,固定损伤突变的位置或者通过细胞的死亡来消除损伤。就像Derks等提到的,传感蛋白检测到DNA损伤,并将一系列的相关因子招募到损伤点。例如,修复因子等。相应的,这些感受器扩大对效应器的损伤信号,如p53和微小RNA,它们能够控制细胞多种通路的活性,如细胞周期的停滞和凋亡。传感器和DDR信号的转导主要依赖于蛋白质和蛋白质的相互作用以及蛋白质翻译后的修饰。转录组学、全基因组RNA转录表达水平和蛋白质组学的研究极大
应用于PCR技术的DNA聚合酶
关于酶学
第27卷第6期
Vol127 No16长春师范学院学报(自然科学版)JournalofChangchunNormalUniversity(NaturalScience)2008年12月Dec.2008
应用于PCR技术的DNA聚合酶
盛艳敏,杨燕平,吴英杰,王倩倩
(长春师范学院生命科学学院,吉林长春 130032)
[摘 要]DNA聚合酶作为聚合酶链式反应(PCR)的重要因素之一,在PCR过程中起着至关重要的
作用,在某种意义上甚至可以说,PCR技术就是耐热DNA聚合酶的技术。故综合研究聚合酶并改善
其酶学性能,已成为分子生物学工作者关注的热点之一。本文就PCR技术产生至今DNA聚合酶的研
究历史及现状进行简要综述。
[关键词]PCR;DNA聚合酶;酶学特性
[中图分类号]Q94615 [文献标识码]A [文章编号]1008-178X(2008)06-0067-04
聚合酶链式反应(PCR)是一种体外快速扩增特定DNA片段的技术,是在由DNA模板、引物、dNTP、适当缓冲液等组成的反应混合物中,由DNA聚合酶催化,对一对寡核苷酸引物所界定的DNA片断进行扩增的反应。在此过程中,DNA聚合酶起着关键性作用,所以自PCR技术产生至今,人们一直在通
DNA 聚合酶β的研究现状_董子明
JournalofZhengzhouUniversity(MedicalSciences) Jul. 2003 Vol.38 No.4
#477#
系列研究作者简介
董子明,病理生理学教授,博士研究生导师,国家人事部专家顾问委员会委员,享受政府特殊津贴专家。1988年至1998年赴美,先后在新泽西医学院、哥伦比亚大学医学院、康奈尔大学医学院学习,后在耶鲁大学做博士后研究员。1998年回国后从事肿瘤免疫学、食管癌病因学和肿瘤生物治疗研究,现承担多项国家自然科学基金、河南省重大科技攻关项目。先后主持食管癌聚合酶B基因突变、树突状细胞疫苗及临床应用等研究并已获得突破性进展。主编参编教材专著多部。自1998年至今已经培养博士9名,硕士15名。
早在上世纪90年代初,董子明教授在美期间即致力于DNA聚合酶Ó系列研究,关于DNA5个亚单位的研究在著名的美国生化杂志(J.B.C)上非常罕见地作为/系列研究文献0,同时刊登了5篇文章。该研究结果对分子生物学的发展具有重要意义,在当年的美国分子生物学年会上引起轰动。回国后,董子明教授承担了国家自然科学基金资助项目:食管癌组织中DNA聚合酶B基因突变。经过几年来的刻苦攻关,在国际上首次发现:¹食管癌组
利用酵母菌生产蛋白质
《生命科学文献与论文写作》课程论文
利用酵母菌生产蛋白质
摘要:蛋白质在细胞和生物体的生命活动过程中,起着十分重要的作用,是生命机体几乎所有重要活动的承担者。酵母菌应用于生物领域由来以久。6000年来人们用这种微小的真菌制作面包、啤酒和酒。现今用于直接治疗疾病的人类蛋白质的生产,已经成为一个每年有着190亿美元产值的产业。但是这种生物大分子目前却不能大批量的生产。它们大都是费时费力的从培养皿中培养的动物(如中国仓鼠)细胞分泌提取的。基因工程研究人员发现了一种用低等的酵母菌来生产人类蛋白质的新技术。这种技术开辟了一条大量生产生物药品的新途径。酵母菌能够用来生产复杂的人类糖蛋白,这种技术对于治疗用人类蛋白的生产有着革命性的意义。更好、更便宜、更快、更安全,并提供了一个对产品的最终质量进行控制的手段。作为宿主的酵母最常用的是毕赤氏酵母和酿酒酵母。 关键词:酵母菌;生产;蛋白质
Production of proteins using the yeast
Abstract: Protein in cells and organisms of biological processes, play an important role in almost
RNA聚合酶是否有解旋的作用
RNA聚合酶是否有解旋的作用?
看2013年浙江省高考题
3.某生物基因表达过程如图所示。下列叙述与该图相符的是 A.在RNA聚合酶作用下DNA双螺旋解开 B.DNA-RNA杂交区域中A应与T配对 C.mRNA翻译只能得到一条肽链 D.该过程发生在真核细胞中
【答案】:A
说明RNA聚合酶有解旋作用
浙科版上有该知识点
这个问题对不同的生物来说不一样,原核生物RNA聚合酶有解旋作用,而对真核生物来说,转录的时候是需要RNA聚合酶和解旋酶一起来发挥解旋作用的。
应该是在转录的过程中,始终没有提到DNA的解旋酶,虽然说酶具有专一性,但是专一性是可以一类的,我问过一些老教师,他们说RNA聚合酶本身有解旋的作用,看到的资料书中,也没有说用DNA解旋酶的。 ...
不同的生物具体情况不同!这是个有争议的话题!也有的书上说,RNA聚合酶属于解旋酶的一种!也有的说RNA聚合酶只能打开起始一段DNA双链,之后需要解旋酶辅助解旋!建议人教版的同学不要再纠结了!个人认为正规考试不会考!仅供参考!
解旋酶一词是在人教版必修一第三章第三节中提出的:“在DNA复制开始时,DNA分子首先利用细胞提供的能力,在解旋酶的作用下,把两条螺旋的DNA链解
利用重组酵母菌生产人胰岛素
利用重组酵母菌生产人胰岛素
摘要:利用重组酵母菌生成人胰岛素为以下流程:获得目的基因→构建重组质粒→构建基因工程菌→工程菌发酵→产物分离纯化→产品检验。其中前三个流程为产人胰岛素酵母工程菌的构建,根据人胰岛素的氨基酸序列和酵母偏爱的密码子, 采用基因半合成技术合成人胰岛素基因。将合成的胰岛素基因克隆到pPIC9质粒,构建了毕赤(Pichia)酵母重组表达载体pPINS319,用BglII线性化后用电转化法导入毕赤酵母GSll5菌株,经过营养筛选和PCR 复筛,得到含人胰岛素基因的毕赤酵母工程菌株。后三个流程为胰岛素的大规模发酵生产,通过补料-分批发酵获得发酵液,分离纯化后获得人胰岛素。纯化后的重组人胰岛素产品经SDS-PAGE检测,氨基酸组成分析及小鼠惊厥实验证明制得产品为有生物活性的人胰岛素。
关键词:重组酵母;人胰岛素;发酵;纯化;鉴定
Using recombinant yeast to produce human insulin
HuSheng 1142043040
Abstract:The proceedings of produce human insulin by recombinant yeast show as foll
RNA聚合酶是否有解旋的作用
RNA聚合酶是否有解旋的作用?
看2013年浙江省高考题
3.某生物基因表达过程如图所示。下列叙述与该图相符的是 A.在RNA聚合酶作用下DNA双螺旋解开 B.DNA-RNA杂交区域中A应与T配对 C.mRNA翻译只能得到一条肽链 D.该过程发生在真核细胞中
【答案】:A
说明RNA聚合酶有解旋作用
浙科版上有该知识点
这个问题对不同的生物来说不一样,原核生物RNA聚合酶有解旋作用,而对真核生物来说,转录的时候是需要RNA聚合酶和解旋酶一起来发挥解旋作用的。
应该是在转录的过程中,始终没有提到DNA的解旋酶,虽然说酶具有专一性,但是专一性是可以一类的,我问过一些老教师,他们说RNA聚合酶本身有解旋的作用,看到的资料书中,也没有说用DNA解旋酶的。 ...
不同的生物具体情况不同!这是个有争议的话题!也有的书上说,RNA聚合酶属于解旋酶的一种!也有的说RNA聚合酶只能打开起始一段DNA双链,之后需要解旋酶辅助解旋!建议人教版的同学不要再纠结了!个人认为正规考试不会考!仅供参考!
解旋酶一词是在人教版必修一第三章第三节中提出的:“在DNA复制开始时,DNA分子首先利用细胞提供的能力,在解旋酶的作用下,把两条螺旋的DNA链解
微生物实验7 酵母菌 - 图文
微生物实验报告
酵母菌的培养及观察实验
刘欣怡201100140057
生物科学基地班
组别:周一下午三组
同组者:曹平平,周楠,
刘艺,刘希伟
实验完成时间:2012年11月19号
一、实验目的
1、了解酵母菌的形态及出芽方式 2、学习区分酵母菌的死细胞和活细胞 3、掌握酵母菌子囊孢子的观察方法 4、巩固显微镜操作技术和无菌操作技术
二、实验器材
1.菌种 :
酿酒酵母7d麦氏培琼脂(产孢培养基)斜面培养物,酿酒酵母2d YPD(酵母合成培养基)液体培养物。 2. 培养基 :
酵母合成培养基,麦氏琼脂斜面 3、试剂:
0.01%美蓝水溶液,5%孔雀绿水溶液,0.5%番红水溶液,95%乙醇,蒸馏水、香柏油、去离子水等。 4. 仪器
试管,锥形瓶,酒精灯,显微镜,擦镜纸,酒精灯,载玻片,盖玻片,双层瓶,接种环,滴管,滤纸,镊子、培养皿等。
三、实验原理
1、培养基:
酵母菌的能源主要是糖,一般用麦芽汁琼脂培养基培养。但实验要求不是很严格时,可以用