豌豆凝集素的分离纯化实验设计

- 1 - 单位代码 10635

学 号

S2005073

硕士学位论文

豌豆早期结瘤素基因克隆与凝集素基因psl

转化烟草研究

论文作者：周小全

指导教师：张兴国 研究员

学科专业：细胞生物学

研究方向：细胞工程

提交论文日期：2008年05月25日

论文答辩日期：2008年05月31日

学位授予单位：西南大学

中 国 重 庆

2008年5月

- 2 -

2008 Master Thesis of Southwest University

Isolation of Early nodulin Genes from Pisum sativum and Introduction of Lectin Gene psl into Nicotiana tobacum

Candidate：Xiaoquan Zhou

Supervisor：Xingguo Zhang

Major：Cell biology

Field：Cell engrneering

College of Horticulture and Landscape Architecture,Southwest University，Beibei，Chongqing，400715，P

噬菌体的分离与纯化

（小组成员：宋淑芳、项媛媛、谢坤、陈金杰、陶思凡）

一、实验目的

学习分离纯化噬菌体的基本原理和方法，观察噬菌斑 二、实验原理

噬菌体感染宿主细胞后，其DNA（或RNA）在细胞体内进行复制、转录，相关基因表达，装配成完整的噬菌体颗粒，最后裂解宿主细胞或通过挤出方式从宿主细胞（宿主细胞不被杀死，如M1噬菌体）中释放出来。因此，①在液体培养基中可使浑浊的菌悬液变为清亮或较清亮。利用噬菌体的这种特性，在样品中加入敏感菌株与液体培养基混合后培养，噬菌体便能大量增殖，释放，从而可分离到特定的噬菌体。②在有宿主细菌生长的软琼脂平板上，噬菌体可裂解细菌或限制被染细菌的生长，形成透明的或浑浊的空斑，亦称噬菌斑。一个噬菌体产生一个噬菌斑，利用这种现象可将分离获得的噬菌体进行纯化。 三、实验用具及材料

1.菌种：大肠杆菌 2.试剂：氯仿 3.培养基：

液体牛肉膏培养基：胰蛋白胨2g，牛肉膏0.6 g，NaCl 1g，加H2O至200mL，pH7.4，121 ℃20min高压灭菌；

3×牛肉膏培养液：胰蛋白陈3g，牛肉膏 0.9g，NaCl 1.5g，加H2O至100mL，pH7.4，121 ℃20min高压灭菌；

固体牛肉膏培养基：每100m

- 1 - 单位代码 10635

学 号

S2005073

硕士学位论文

豌豆早期结瘤素基因克隆与凝集素基因psl

转化烟草研究

论文作者：周小全

指导教师：张兴国 研究员

学科专业：细胞生物学

研究方向：细胞工程

提交论文日期：2008年05月25日

论文答辩日期：2008年05月31日

学位授予单位：西南大学

中 国 重 庆

2008年5月

- 2 -

2008 Master Thesis of Southwest University

Isolation of Early nodulin Genes from Pisum sativum and Introduction of Lectin Gene psl into Nicotiana tobacum

Candidate：Xiaoquan Zhou

Supervisor：Xingguo Zhang

Major：Cell biology

Field：Cell engrneering

College of Horticulture and Landscape Architecture,Southwest University，Beibei，Chongqing，400715，P

冷凝集素综合征

冷凝集素综合征是由于自身反应性红细胞凝集及冷诱导因素导致慢性溶血性贫血和微循环栓塞为特征的一组疾病。冷凝集素主要为IgM抗体，这种冷抗体在31℃以下温度时能作用于自身的红细胞抗原而发生可逆性的红细胞凝集。当体表皮肤温度较低时，凝集的红细胞阻塞微循环而发生发绀，可伴有较轻的溶血。

简介

冷凝集素综合征是免疫球蛋白M(IgM)抗体引起的自体免疫性疾病，又叫“冷血凝集素病”或“冷凝集素病”。其特点是在较低的温度下，这种抗体能作用于患者自己的红细胞，在体内发生凝集，阻塞末梢微循环，发生手足紫绀症或溶血。在体外，抗体与抗原发生作用的最适宜温度是0℃～4℃，在37℃或31℃～32℃以上的温度，抗体与红细胞抗原发生完全可逆的分解，症状迅速消失。本综合征可以是特发性的或继发于淋巴组织系统的恶性肿瘤或支原体属肺炎及传染性单核细胞增多症等病毒感染。

临床表现

具有贫血及黄疸，临床进展很慢。多数患者在冷环境中表现为耳郭、鼻尖、手指足趾发绀，加温后即消失。急性大量溶血时可出现血红蛋白尿，溶血过程多为自限性的。由于继发性更为多见，应有伴随的原发病临床症状及体征。

临床诊断

多见于女性及老年，多在冷环境中出现症状。 不同轻重程度的贫血表现，黄

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亨堇卷？§ｌｉ雀）和标准温度下，在一定叫间内形成菌落的细菌数

量。从细菌繁殖曲线我们得知，细菌繁殖要经过延迟期、对数期、恒定期和衰亡期。大多数所检测食品中的细菌，繁殖一代约需２０ｍｉｎ左右，细菌须经过延迟期后，才能进入快速分裂期——对数期。

从图１可以看出，随着温度的升高，解冻所需时间缩短，细菌数量在短时间内相对变化较小。细菌在高温解冻时．细菌繁殖还没进入对数期时解冻已经完成，所以细菌数量变化小。

３００

２５０

２００

１５０

１００

５０

０

１０２０３０４０

温度（℃）

图１解冻温度与解冻时间的关系

２３解冻时间对细菌数量的影响

时间也是影响样品中细菌数量的主要因素之?。不同细菌在同?温度下，繁殖的速率不同；同一细菌在不同的温度下代时也不同。冷冻食品在解冻过程中，时间达到细菌的代时时，就可能造成细菌数量的增加，检验结果数值偏大。

环工综合实验细菌的分离纯化和接种实验

实验报告

环境科学与工程学院实验中心

实验题目 细菌的分离纯化和接种实验 实验类别 综合

实验原理问答题：

1. 为什么湖水用10_4、10_5

低的浓度? 答：因为在这三个浓度范围内能尽量使样品中的微生物分散开, /细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个个体生长而成的，从而方便计数。

2. 为什么平板培养皿要倒置放入恒温箱中进行培养

:第一，为了防止重力对菌落的生成产生影响；第二，为了防止培养基中的水 分蒸发后凝结在壁上，滴落后影响菌的生长和形态观察；第三，防止培养基干涸。

3. 微生物常用接种方式有哪些？进行微生物接种应该注意哪些方面?

答：⑴划线接种，涂布接种，穿刺接种，三点接种，浇混接种，液体接种，注射 接种，活体接种等。

⑵接种用具及培养基等均需灭菌处理， 接种过程必须在煤气灯旁进行，接种 环、玻

璃涂棒等器具要过火处理，把所要用到的器材和菌种培养基有序编号放置， 操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品的接触， 往培养基是划线或 点菌时动作要轻以防把培养基划破等。

四、实验步骤

1. 制备细菌稀释液：

使用5ml 移液管加4.5ml 无菌水放入贴有10-3、10-4、10-5、10-6

标签的小试管中， 用一根Iml

粮食与食品工业

Vol . 16 ,2009 ,No . 1

Ce real an d Food I n d ust ry

食品科技

葡萄籽原花青素的分离纯化研究

王 璐 , 郑茂强 , 王 猛 , 王四维国家粮食

储备局无锡科学研究设计院 (无锡 214035)

摘 要:对 4 种大孔吸附树脂吸附葡萄籽原花青素的性能进行了筛选 ,研究了 AB - 8 树脂对原花

青素的分离条件 ,在上样浓度为 71 5 mg/ mL ,吸附时间为 4 h ,吸附流速为 3 BV/ h ,用 25 %～ 30 %浓度乙醇进行洗脱时 ,得到纯度大于 95 %、低聚体含量为 671 82 %的原花青素样

品。关键词:原花青素; 葡萄籽; 大孔吸附树脂 中图分类号: TS224

文献标识码:B

文章编号:1672 - 5026 (2009) 01 - 0026 - 03

Study on purif ication of grape seed procyanidins

Abstract : The adso rp tio n perfo rmance of fo ur kinds of macropo ro us adso rbent resin fo r p uri

酶的分离纯化

摘要：本文概述了在实验中由于酶浓度、饱和度等不同条件下对酶进行分离纯化的适用方法。酶的分离纯化有很多种方法，在纯化的工艺上有很大的不同，不同来源的酶在分离纯化中表现出不同的洗脱特性。现有酶的分离纯化方法都是依据酶和杂蛋白在性质上的差异而建立的。

关键词：酶；分离；纯化；方法

前言：酶的分离纯化工作，是酶学研究的基础。酶的纯化过程在目前来说仍是一门实验科学。一个特定酶的提纯往往需要经过多个实验的探索才能总结出一般经验规律。酶的分离纯化又与其他蛋白质的纯化过程存在很大的差异，酶的分离纯化有其自己独有的特点：一是特定酶在细胞中的含量少，二是酶通过测定活力的方法可以加以跟踪，前者给实验带来困难，后者为实验提供了捷径。 正文：

1. 酶的分离与纯化的概念[1]

酶的分离与纯化是指将酶从细胞或其他含酶材料中提取出来，再与杂质分开，从而获得符合使用目的、有一定纯度和浓度的酶制剂的过程。

酶分离纯化的一般原则： ①防止酶变性失活

1．）酶纯化一般在低温条件下进行（0~4℃）

2.）各种溶液应该用缓冲液，PH应调到使酶最稳定的PH 3.）各种溶液中还可以加入酶保护剂

②建立一个可靠和快速的测活方法 方法专一、灵敏、精确、简便、经

生物高考复习。

第1章 遗传因子的发现 孟德尔的豌豆杂交实验( 第1节 孟德尔的豌豆杂交实验(一) 分离定律

生物高考复习。

问题探讨： 问题探讨： 不同颜色的牡丹： 不同颜色的牡丹：

红牡丹和白牡丹杂交后子代的牡丹花会是什么颜色？ 红牡丹和白牡丹杂交后子代的牡丹花会是什么颜色？

生物高考复习。

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遗传学奠基人孟德尔简介

(Mendel, 1822-1884) )奥国人，天主神父。主要工作： 奥国人，天主神父。主要工作： 1856-1864经过 年的杂交试验， 经过8 1856-1864经过8年的杂交试验， 1865年发表了 植物杂交试验》 年发表了《 1865年发表了《植物杂交试验》 的论文。 的论文。

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孟德尔选择了豌豆作为遗传试验材料

豌

豆

1、豌豆是自花传粉，且是闭花受粉的植物 豌豆是自花传粉，且是闭花受粉的植物 自花传粉 闭花受粉 2、豌豆有易于区分的相对性状 豌豆有易于区分的相对性状

生物高考复习。

相对性状孟德尔选用豌豆作试验材料的另一个原因， 孟德尔选用豌豆作试验材料的另一个原因，是因 为他在栽培豌豆的过程中发现， 为他在栽培豌豆的过程中发现，豌豆的一些品种之间 具有易于区分的性状，例如， 具有易于区分的性状，例如，豌豆

产淀粉酶菌株的分离纯化

一、 实验目的

1. 掌握产淀粉酶菌种的分离纯化的原理和方法技术； 2. 巩固十倍稀释法。 二、 实验原理

土壤是微生物生活的大本营，是寻找有重要应用潜力的微生物主要的菌源。因此本实验选择从土壤中分离出产淀粉酶菌种，再进行纯培养。主要运用富集培养技术，稀释涂布平板法和平板划线分离法及无菌操作技术获得我们所需要的产淀粉酶菌种。

淀粉酶作用于淀粉时，打开了淀粉分子的糖苷键，从而使淀粉失去粘性，同时使其失去了与碘的显色反应能力，不再与碘结合，从而形成透明圈。产淀粉酶菌株在选择培养基上培养后，会水解淀粉形成水解圈，加碘液染色后，水解圈尤为明显。 三、 实验材料 1. 菌种：

从自然界筛选获得的淀粉酶产生菌种 2. 土壤样品：

从栽种土豆的菜园中采集土壤样品 3. 培养基：

淀粉液体培养基（50mL）： 蛋白胨 0.5g，NaCl 0.25g，牛肉膏0.25g，可溶性淀粉 0.1g，蒸溜水 50mL。

淀粉琼脂培养基 (200mL)： 蛋白胨 2g，NaCl 1g，牛肉膏 1g，可溶性淀粉 0.4g，蒸溜水 200mL，琼脂 3-4g。

牛肉膏蛋白胨培养基 (200mL)： 蛋