胡萝卜组织培养实验

实验一 植物组织培养实验的准备 （一）、实验室的设计与布局

1、目的要求

通过认知实习，了解植物组织培养实验室的布局，掌握植物组织培养的程序，同时熟悉组织培养中涉及的各种仪器设备和器皿用具。 2、仪器与用具

超净工作台、蒸馏水发生器或纯水发生器、高压灭菌器、普通冰箱、微波炉、煤气灶或电炉、显微镜、万分之一（或千分之一）电子天平、恒温箱、烘箱、各种培养器皿、分注器、各种实验器皿和各种器械用具。 3、方法步骤

1．结合所学理论知识，学习组织培养实验室守则及有关注意事项。 2．了解植物组织培养的具体流程。

3．了解组培实验室的构建情况，包括准备室、缓冲室、无菌操作室（又称接种室）和培养室的设计要求。

4．了解仪器设备的名称、用途及使用方法。

5．了解实验室中培养材料的一些常用参数，如培养间的温度、光照时数、光照度等。 4、作业

1．植物组织培养实验室一般由几部分构成？各个部分的功能主要有哪些？植物组织培养常用的设备有哪些？

2．每人设计一个植物组织培养实验室的组建方案。

（二）、培养器皿的洗涤

1、目的要求

了解各种洗涤液的特性，掌握酸液的配制方法和组织培养中常用器皿的洗涤技术。 2、基本原理

由于组织培养过程中器皿的重复利用，特别是培养基中有机

植物组织培养实验指导

2012.3

附录 培养基母液的配制

一、实验目的：掌握培养基母液配制的方法。

二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。 三、实验器具与药品：

电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。

配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。

四、培养基母液的配制过程

首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。 母液种类 成分 规定用扩大 称取量母液定配1LMS量ml/L 倍数 m

T

植物细胞组织培养技术

实验指导书

中国计量学院生命科学学院

二零零六年七月

《植物细胞组织培养》实验指导

目 录

实验一、植物组织培养培养基母液的配制 实验二、植物组织培养的培养基配制 实验三、康乃馨的离体快繁 实验四、胡萝卜愈伤组织的建立 实验五、组织培养物的继代培养

1

实验一 组织培养基母液的配制

一、 仪器及药品

冰箱、天平（0.0001g）

容量瓶: 1000 ml, 500 ml、250 ml、100 ml、25 ml 广口储液瓶：500 ml、250 ml、50 ml、25 ml 烧杯：1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml 数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺

标签纸、胶水、50%酒精、95%酒精、1 mol/L盐酸、1 mol/L NaOH 几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品 蒸馏水

二、方法和步骤：

按照培养基配方,把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类,每一类中各种药品分别称量,如N6培养基各种母液的配制步骤如下：

大量元素母液：包括用量较大的几种化合物〈见N6培养基配方〉，按表中排列顺序,将每种药品的用

实验三 胡萝卜离体根的培养（理论）

一、污染

◆组织培养中经常遇到的问题 ◆影响试管苗的质量，关系快繁的成败 1、污染的来源及危害 来源：

◆材料表面消毒不彻底

◆无菌操作中外界环境进入培养容器造成 危害：

◆初代培养失败、增殖速度慢、生长速度慢、玻璃化加剧

◆成活率低、病毒和病菌的扩散、培养物的遗传变异 2、污染的种类及其防止 种类： A、细菌性污染

◆培养基某一位置或培养材料周围出现黏液状物或浑

1

浊的水渍状痕，有时呈发酵状泡沫。接种后1 ~ 2天可见。 ◆材料、培养基灭菌不彻底 ◆操作不当 B、真菌性污染 ◆主要是霉菌污染

◆培养基污染部位发霉，接种3 ~ 5d或更长时间可见 ◆颜色有黝黑、白、黄等 原因：

◆周围环境和空气污染造成 ◆接种过程中，操作不慎造成 防止：

◆选择植物材料：品种、部位、大小、时期 ◆严格消毒灭菌 ◆合理安排繁殖程序 ◆规范操作，控制环境条件 二、外植体褐变

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1、原因

细胞内的酚类化合物经多酚氧化物氧化成褐色的醌类物质和水，醌类物质与酪氨酸酶发生作用使外植体蛋白聚合，导致外植体生长停顿，直至死亡。 2、影响褐变的因素

植物组织培养实验报告

实验小组成员：

姓名 班级

2013 年4 月 20 日

绿豆的植物组织培养

学号

一、实验目的

1．通过诱导绿豆根、茎、芽形成愈伤组织，学习愈伤组织的建立方法。

2．熟悉植物组织培养各阶段的过程，初步掌握无菌操作的植物组织培养方法。

3．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理解。 二、实验原理

1. 植物细胞的全能性：

一切植物，都是由细胞构成的，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植株的潜能。 2. 植物组织培养技术：

把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。 3. 组织的分化与器官建成 外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。 4. 培养基的组成

培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源

脱分化 外植体 继代培养 植物细胞全能型 种质 褐变 人工种子 器官培养 .胚胎培养 植物组织培养． 灭菌： 驯化

愈伤组织培养： 玻璃化现象 无病毒苗． 胚状体． 愈伤组织． 消毒

植物生长调节物质 接种 细胞悬浮培养 脱毒苗

褐化． 再分化．

1 植物组培对象分为 ， ， ,细胞培养，原生质体培养几种类型。 2 培养基中有机态氮素营养主要是 和 MS

3 种质保存的方式有 ， ， 。 4在组织培养中，不耐热对的用 法灭菌，耐热的培养基用 法灭菌 5幼胚培养的三种常见方式是 ， ， 。

6 去除植物病毒的主要方法是 ， ， 。 7 愈伤组织的形成大志经历 ， ， 三个时期 8植物组培过程中，最常用的培养基是

《植物组织培养实验指导》

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《植物组织培养实验指导》的相关说明

一、本指导用于《植物组织培养概论》课程的实验教学。 二、各专业班级根据实际情况做相应调整，调整情况详见各专业班级的授课计划。其中15个课时的内容调整如下： 实验一、二、五 3学时 实验六 3学时 实验七 3学时 实验九、实验十二 3学时 实验十三 3学时

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实验一 实验室基本设备及其用途的识别

一、

目的

认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。 二、

实验室的基本结构

（一） 化学实验室（工作室）培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析；制蒸馏水。

设备、药柜、工作台、蒸馏水器、天平、冰箱，手提高压消毒锅、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器等。

安装水、电、排气等装置。 （二）接种室 ①无菌操作室 ②接种箱 ③超净工作台 （三）培养室

（四）洗涤、消毒室；卧式高压消毒锅。 （

脱分化 外植体 继代培养 植物细胞全能型 种质 褐变 人工种子 器官培养 .胚胎培养 植物组织培养． 灭菌： 驯化

愈伤组织培养： 玻璃化现象 无病毒苗． 胚状体． 愈伤组织． 消毒

植物生长调节物质 接种 细胞悬浮培养 脱毒苗

褐化． 再分化．

1 植物组培对象分为 ， ， ,细胞培养，原生质体培养几种类型。 2 培养基中有机态氮素营养主要是 和 MS

3 种质保存的方式有 ， ， 。 4在组织培养中，不耐热对的用 法灭菌，耐热的培养基用 法灭菌 5幼胚培养的三种常见方式是 ， ， 。

6 去除植物病毒的主要方法是 ， ， 。 7 愈伤组织的形成大志经历 ， ， 三个时期 8植物组培过程中，最常用的培养基是

- 1 - 菊花花瓣组织培养

摘要：菊花在花卉生产中占有重要地位，而花瓣组织培养，可以缩短植物生长周期，

还可使再生植株特性的变异更加丰富多彩，在菊花育种研究中涉及的细胞杂交和基因转移等生物技术的应用中具有重要意义。本实验是利用黄色菊花花瓣为外植体。在诱导培养中，控制6-BA的浓度1.0 mg/l ，NAA的浓度0.3mg/l，将已分化的细胞脱去分化状态，使其恢复到未分化的分生状态，然后进行再分化，最终形成完整的植株。 关键词：菊花 激素诱导 愈伤组织 分化 1．前言

1．1实验背景

植物组织培养（tissue culture）是二十世纪初兴起的一项高新生物技术，至今已经有一百多年的历史。和植物组织培养的历史相比，中国的在这方面的研究起步算是比较早的，在二十世纪四十年代在这方面就有所研究，但是大范围的发展起来还是始于二十世纪七十年代的花药培养。

利用组织培养可以快速繁殖保存某些稀有植物或有较大经济价值的植物，挽救濒于灭绝的动植物，还可以为细胞杂交和基因转移等生物技术在育种研究中的应用提供帮助。随着人们生活质量的提高，人们甚至利用组织培养的花卉等发展装饰产业，作为一项实验技术，植物

《植物组织培养实验指导》

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《植物组织培养实验指导》的相关说明

一、本指导用于《植物组织培养概论》课程的实验教学。 二、各专业班级根据实际情况做相应调整，调整情况详见各专业班级的授课计划。其中15个课时的内容调整如下： 实验一、二、五 3学时 实验六 3学时 实验七 3学时 实验九、实验十二 3学时 实验十三 3学时

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实验一 实验室基本设备及其用途的识别

一、

目的

认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。 二、

实验室的基本结构

（一） 化学实验室（工作室）培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析；制蒸馏水。

设备、药柜、工作台、蒸馏水器、天平、冰箱，手提高压消毒锅、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器等。

安装水、电、排气等装置。 （二）接种室 ①无菌操作室 ②接种箱 ③超净工作台 （三）培养室

（四）洗涤、消毒室；卧式高压消毒锅。 （