酶技术的原理

酶工程发展概况及应用前景

生工090419 张祎伟

【前言】

回顾21世纪，生物科学与生物工程在全球崛起并迅速发展，已经从整体水平发展到细胞水平和分子水平，在基础与应用研究领域取得了举世瞩目的成果\酶工程作为生物工程的重要组成部分，其作用之重要、研究成果之显著已为世人所公认。展望21世纪，生物科学与生物工程将以更快的速度发展，在世界科技与经济的发展中起支柱和骨干作用。

一、酶工程在食品工业中的应用

在我国古代就开始将产酶的微生物运用于食品的制作中。在现代食品工业中，酶的应用渗透到各个领域。随着固定化酶、修饰酶、基因工程酶等技术的突破性发展，酶工程在食品工业中的应用将更加广泛和深入。

酶工程在食品分析与检测

由于酶具有特异性,因此,它适合于植物和动物材料的化合物的定性和定量分析。例如,采用乙醇脱氢酶测定食品中的乙醇含量;采用柠檬酸裂解酶测定柠檬酸的含量等。另外,在食品中加入一种或几种酶,根据它们作用于食品中某些组分的结果,可以评价食品的质量,这是一种十分简便的方法。

酶工程在食品保鲜方面的应用

生物酶用于食品保鲜主要就是制造一种有利食品保质的环境,它主要根据不同食品所含的酶和种类,而选用不同的生物酶,使食品所含的不利食品保质的酶受到抑制或降低

蛋白酶酶活测定方法及原理 Protease activity assay method and principle

方法

原理

福林-酚试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色钼蓝和钨蓝

福林酚法

混合物，而蛋白质分子中有含酚基的氨基酸如酪氨酸、色氨酸等，可使蛋白质及其水解产物呈上述反应，利用此原理测定蛋白酶酶活。 考马斯亮蓝染料与蛋白质在酸性条件下结合，主要是染料与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合，使

考马斯亮蓝法

染料的最大吸收峰的位置由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色，在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。

甲醛滴定法

蛋白酶催化蛋白质水解成氨基酸，再用甲醛固定氨基酸的氨基，用0.1mol/LNaOH溶液滴定生成的氨基酸，从而测定其酶活。 用5-氨基四唑重氮盐将氨基酸中部分组氨酸和酪氨酸重氮化，得到黄色的重氮5-氨基四唑酪蛋白（DHT-酪蛋白）。以DHT-酪蛋白为

DHT-酪蛋白法

底物，在蛋白酶作用下，水解生成DHT-肽，二价离子可与DHT-蛋白与DHT-肽形成稳定的可溶性红色螯合物，而锌离子可迅速沉淀DHT-酪蛋白，但不沉淀DHT-肽。选用合适浓度的锌离子和镍离子作为沉

固定化酶在食品中的运用

摘要:固定化酶有许多优点，尤其是稳定性和可重复使用性使其在许多领域得到广泛应用。固定化酶技术是一门交叉学科技术，目前已得到长足的发展。介绍了固定化酶制备的传统方法以及一些新方法，同时对酶在一些性能优良的载体上的固定进行了综述。 关键词：固定化酶；制备；载体

酶是由活细胞产生的一类特殊的蛋白质催化剂(核酶除外)，具有催化效率高、底物高度专一、反应条件温和、反应容易控制等特点。酶的最大缺点是其不稳定性，在酸、碱、热及有机溶剂中易发生变性，活性降低或丧失；而且酶反应后，会在溶液中残留，造成酶反应难以连续化、自动化，同时也不利于终产品的分离提纯，这些都大大阻碍了酶工业的发展，所以有必要采取酶工程技术改善这些缺点。酶工程技术措施较多，其中酶的固定化技术是重要举措之一。酶的固定化是用人工方法把从生物体内提取出来的酶固定在特定的载体上或使酶与酶相交联，酶被限定在一定区域内，但仍保持原有高效、专一、条件温和的催化功能。通常酶是游离的，而经过固定化以后，酶被束缚在一定区域内，因而这样的酶被称为固定化酶。固定化酶在生物、医药、农业、食品、化工、能源开发、环境保护等方面得到了广泛应用。本文介绍了固定化酶的制备方法和优缺点，对其在食品行业中的

——纯生黄酒的酿造超滤去酶技术的应用

产量

食品与发酵工业

F o n ere tt nId sd s oda dF r nai n ut e n o

vo.9 N . 1 12 o 1

拇磅——

纯生黄酒的酿造超滤去酶技术的应用朱一松赵光鳌帅桂兰魏运平邹慧君谢广发1江南大学生物工程学院沙多利斯过滤实验室，锡，2 4 3 ) (无 1 0 62中国绍兴黄酒集团公司，兴，3 2 0 ) (绍 1 0 0

经蝰

摘

要

对纯生黄酒的研制进行了探讨。通过模拟实验验证了超滤去酶的效果，且用截留并

分子量为 3 0 00 0和 1 0 0的超滤膜对生黄酒进行过滤，析了超滤处理前后的黄酒样品。 00分

结果表明， 2种规格的超滤膜对淀粉酶、化酶、白酶都能达到去除的要求；滤处理后这糖蛋超的黄酒各理化指标均符合 GB T1 6 2 2 0/ 3 6— 0 0的指标要求，白质和氨基酸均有所减少，样蛋酒

颜色变浅，酒有新的香味感觉，有淡爽感，现一种黄酒新品种的风味。黄具呈关键词纯生黄酒，滤，滤去酶，酒酿造超超黄

黄酒是世界 3大古酒种之一 -]深受 3,广大消费者喜爱]新产品的开发，当前 。是各黄酒生产企业面临的主要问题。而纯生黄

精密科学仪器有限公司制造； TGL 1 C台式一6离心机

关于酶学

第27卷第6期

Vol127　No16长春师范学院学报(自然科学版)JournalofChangchunNormalUniversity(NaturalScience)2008年12月Dec.2008

应用于PCR技术的DNA聚合酶

盛艳敏,杨燕平,吴英杰,王倩倩

(长春师范学院生命科学学院,吉林长春　130032)

[摘　要]DNA聚合酶作为聚合酶链式反应(PCR)的重要因素之一,在PCR过程中起着至关重要的

作用,在某种意义上甚至可以说,PCR技术就是耐热DNA聚合酶的技术。故综合研究聚合酶并改善

其酶学性能,已成为分子生物学工作者关注的热点之一。本文就PCR技术产生至今DNA聚合酶的研

究历史及现状进行简要综述。

[关键词]PCR;DNA聚合酶;酶学特性

[中图分类号]Q94615　　　[文献标识码]A　　　[文章编号]1008-178X(2008)06-0067-04

　　聚合酶链式反应(PCR)是一种体外快速扩增特定DNA片段的技术,是在由DNA模板、引物、dNTP、适当缓冲液等组成的反应混合物中,由DNA聚合酶催化,对一对寡核苷酸引物所界定的DNA片断进行扩增的反应。在此过程中,DNA聚合酶起着关键性作用,所以自PCR技术产生至今,人们一直在通

为克服单一化学法脱胶对环境污染严重和单一的生物酶脱胶率低的缺点,研究了大麻纤维高温-酶联合脱胶技术,讨论了高温脱胶后3种不同酶处理的大麻纤维化学成分与断裂强度的变化,用SEM、FTIR对大麻纤维高温酶脱胶前后的表面形态结构、化学成分进行表征。实验结果表明：果胶酶可作为高温脱胶后大麻纤维的脱胶酶使用;高温-果胶酶脱胶后大麻纤维中的果胶和半纤维素、木质素含量分别下降

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第2 8卷

第 6期

纺

织

学

报

Vo . 8 No. 12 6

20 0 7年 6月

J un lo e t eRe e r h o r a fT xi s ac l

J n. 2 0 u 07

文章编号：2 3 7120 )607.4 05 . 2 (0 70— 90 9 0

大麻纤维高温一联合脱胶技术酶俞春华，新星，冯贾长兰，建勇陈(江理工大学先进纺织材料与制备技术教育部重点实验室，江杭州 30 1)浙浙 108

摘

要

为克服单一化学法脱胶对环境污染严重和单一的生物酶脱胶率低的缺点，研究了大麻纤维高温一酶联合

脱胶技术，论了高温脱胶后 3不同酶处理的大麻纤维化学成分与断裂强度的变化， S M、TR对大麻纤维高讨种用 E FI温一酶脱胶前后的表面形态结构、学成分进行表征。实验结果表明：

酶的固定化技术及其在食品工业中的应用

摘 要

酶的固定化是用人工方法把从生物体内提取出来的酶固定在特定的载体上，酶被限定在一定区域内，但仍保持其原有高效、专一、条件温和的催化功能。固定化酶在生物、医药、农业、食品、化工、能源开发、环境保护等方面得到了广泛应用。本文概述了固定化酶的制备方法及优缺点，总结了固定化酶在食品工业中的最新应用情况，并对其应用前景进行了展望。 关键词:固定化酶；制备；应用；食品工业

Technology of immobilized enzyme and its applications in

food industry

Abstract

Immobilization of enzyme is that enzyme, extracted from organic body, is fixed to a special vector.However,it has its original catalyzing functions with high efficiency, specificity and moderate reaction condition.Immobilized enzyme has been use

酶的固定化技术及其在食品工业中的应用

摘 要

酶的固定化是用人工方法把从生物体内提取出来的酶固定在特定的载体上，酶被限定在一定区域内，但仍保持其原有高效、专一、条件温和的催化功能。固定化酶在生物、医药、农业、食品、化工、能源开发、环境保护等方面得到了广泛应用。本文概述了固定化酶的制备方法及优缺点，总结了固定化酶在食品工业中的最新应用情况，并对其应用前景进行了展望。 关键词:固定化酶；制备；应用；食品工业

Technology of immobilized enzyme and its applications in

food industry

Abstract

Immobilization of enzyme is that enzyme, extracted from organic body, is fixed to a special vector.However,it has its original catalyzing functions with high efficiency, specificity and moderate reaction condition.Immobilized enzyme has been use

实验26 过氧化氢酶活力的测定（必修）

[目的与原理]

掌握过氧化氢酶活力的测定原理和比色测定方法，并用此方法测定水产动物血清中过氧化氢酶的活力。

血清中的过氧化氢酶（CAT）分解H2O2的反应，可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其生成量，即可计算出CAT的活力，CAT活力单位定义为：每1分钟分解1μmol的过氧化氢即为1个酶活力单位（U）。 [试剂与器材] 试剂：

1、磷酸盐缓冲液（67mmol / l，pH=7.4）：取Na2HP04 7.60g，KH2P041.82g，溶于1L蒸馏水中，调pH至7.4。

2、基质液（65μmol/ l, H2O2）：取30% H2O2 3.69 ml加pH7.4磷酸盐缓冲液至500ml。 3、钼酸铵：称取［(NH4)6Mo7O24］20.2g溶于500ml蒸馏水中。 器材：

721分光光度计 , 0.5cm比色杯，恒温水箱（37℃±0.5℃），试管 16mm×100mm，移液管，吸耳球，可调微量进样器。 [实验步骤]

1、样品测定：基质液置于37℃水浴 5 min，然后按下列步骤操作 试剂 基质液 钼酸铵 缓冲液 血清

对照管 1.0

准确称取天山云杉种子0.1 g，先加入 1 ml 预冷的50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0，内含1 mmol/ L EDTA)，研磨成匀浆，然后用 4.5 ml 分两次冲洗研钵至试管中，4 ℃，10000 r/min 离心 20 min，上清液即为酶提取液，4 ℃保存用于ROS系统酶活性分析。 3 酶活性的测定

3.1 过氧化物酶 (POD，EC 1.11.1.7) 活性的测定。

按照 Chance 和 Maehly[6]的方法，并作如下修改:反应混合液为50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0，内含 0.1 mmol/ L EDTA) 2.9 mL，2 % H2O2 1.0 mL，50 mmol/ L 愈创木酚1.0 mL。测定时，反应混合液先在 25 ℃ 水浴中预热，立即加入0.1 mL酶液以启动反应，以缓冲液调零，测定OD470值，每隔 30 s读数一次。取 0 — 60 s 时间段，即 1 min 反应时间来计算酶活性。以每分钟OD470增加0.01的酶量为一个酶活单位，U·g-1。

计算公式: POD活性 = ΔA470 × Vt × (0.01× t × FW × V1) -1 注: ΔA470:反应时间内