糖基化检测方法

糖基化对膜蛋白功能影响常常是很重要的，对特异的生物学功能起介导作用:1，对细胞具有保护、稳定、组织及屏障等多方面作用；

2，可作为外源性受体的特异性配体，某些糖连可作为各种病毒、细菌及寄生物的特异受体； 3，糖连也可作为内源性受体的特异性配体，参与介导清除、周转及胞内穿行作用；

4，最后要说的正是我所关心的：在受精和发育生物学中，糖连在受精过程中起着重要的作用，这方面的证据有：在小鼠卵透明带糖蛋白ZP3上的O－聚糖参与精卵结合。 活细胞中去糖基化的方法： 1，衣霉素在体内阻断N－连糖，

2，将内切神经氨酸酶注入发育中的视网膜提示了多唾液酸的特异性作用－－将高纯度酶注入细胞内＋恰当的对照

3，将糖基修饰酶的cDNA在活细胞或动物中表达 4，在培养环境中加入凝集素或抗体把特异的聚糖封闭掉

定点突变。一般蛋白质的突糖基化位点是一定的，各个物种相对比较保守，这个很容易就能分析出来，克隆到这个基因之后就可以使用引物突变等方法使糖基化位点发生定点突变，然后转入载体进行表达就可以得到去糖基化的蛋白。

蛋白质的修饰与加工包括糖基化、羟基化、酰基化、二硫键形成等，其中最主要的是糖基化，几乎所有内质网上合成的蛋白质最终被糖基化。

糖基化的作用是：①使蛋白质

药 物 生 物 技 术

PharmaceuticalBiotechnology 2011,18(1):077~080

77

蛋白质糖基化的研究进展

王家红,童 玥,朱 玥,田 浤,高向东

*

(中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京210009)

摘 要 作为一种普遍存在的翻译后修饰,糖基化对蛋白质的结构和功能有着重要影响,弄清糖基化发生发展的规律是理解蛋白质复杂多样的生物功能的一个重要前提。文章就糖基化对蛋白质结构的影响、对治疗性蛋白的药理学意义、糖基化位点分析及糖链分析方法作了简要介绍。

关键词 糖基化;蛋白质结构;药理学意义;糖基化位点;糖链分析

中图分类号 Q51 文献标志码 A 文章编号 1005-8915(2011)01-077-04

蛋白质糖基化修饰是最重要的蛋白质翻译后修饰之一,蛋白质功能的实现多与糖基化修饰密切相关。糖基化对于蛋白质的折叠、运输、定位起着重要作用,并参与受体激活、信号转导等诸多重要的生物进程[1]。蛋白质的糖基化,特别是N-连接糖基化普遍发生在细胞外环境的蛋白质中,包括膜蛋白、分泌蛋白和体液中蛋白,而这些恰巧都是容易获得并易于用作诊断和治疗的对象,因此,许多临床的生物标志物及治疗的靶标常是糖蛋白。系统定性定量分析糖蛋白

河南农业科学

ＤＮＡ甲基化检测方法研究进展

邢宝松１，郭启祥２，马

强１，阎祥洲１，白红杰１

（１．河南省农业科学院畜牧兽医研究所，河南郑州４５０００２；２．河南省进出境检验检疫局，河南郑州４５０００３）

中图分类号：Ｑ７５文献标识码：Ｂ文章编号：１００４—３２６８（２００７）１１—００１７—０３

分离与杂种优势有关的基因提供一些新的思路。因此，ＤＮＡ甲基化的研究逐渐成为新的研究热点。随着对甲基化研究的不断深入，各种各样甲基化检测方法被开发出来以满足不同类型研究的要求。因此，探讨甲基化形成与改变的可能机制，建立准确性高，灵敏度高，操作简单的ＤＮＡ甲基化检测方法，对探讨甲基化调控规律，提高哺乳动物体细胞核移植效率、揭示杂种优势的表观遗传学基础意义重大。

１１．１

ＤＮＡ甲基化是一种重要的遗传外修饰，是表观遗传学（ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ）的重要组成部分［１］。它参与了动物胚胎发育、基因印迹和Ｘ染色体失活等过程，在基因表达的调控中具有重要作用，异常甲基化可以导致肿瘤的形成。ＤＮＡ甲基化与组蛋白去乙酰化协同调节基因的表达。ＤＮＡ甲基化可以随着外界环境因素的变化而改变。在哺乳动物胚胎移植和体细胞核移植（ＳＣＮＴ）过程中，人工操作会引起ＤＮＡ甲基化修饰改变，从而影响成功

河南农业科学

ＤＮＡ甲基化检测方法研究进展

邢宝松１，郭启祥２，马

强１，阎祥洲１，白红杰１

（１．河南省农业科学院畜牧兽医研究所，河南郑州４５０００２；２．河南省进出境检验检疫局，河南郑州４５０００３）

中图分类号：Ｑ７５文献标识码：Ｂ文章编号：１００４—３２６８（２００７）１１—００１７—０３

分离与杂种优势有关的基因提供一些新的思路。因此，ＤＮＡ甲基化的研究逐渐成为新的研究热点。随着对甲基化研究的不断深入，各种各样甲基化检测方法被开发出来以满足不同类型研究的要求。因此，探讨甲基化形成与改变的可能机制，建立准确性高，灵敏度高，操作简单的ＤＮＡ甲基化检测方法，对探讨甲基化调控规律，提高哺乳动物体细胞核移植效率、揭示杂种优势的表观遗传学基础意义重大。

１１．１

ＤＮＡ甲基化是一种重要的遗传外修饰，是表观遗传学（ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ）的重要组成部分［１］。它参与了动物胚胎发育、基因印迹和Ｘ染色体失活等过程，在基因表达的调控中具有重要作用，异常甲基化可以导致肿瘤的形成。ＤＮＡ甲基化与组蛋白去乙酰化协同调节基因的表达。ＤＮＡ甲基化可以随着外界环境因素的变化而改变。在哺乳动物胚胎移植和体细胞核移植（ＳＣＮＴ）过程中，人工操作会引起ＤＮＡ甲基化修饰改变，从而影响成功

粉喷桩钻孔取芯检测资料整理的自动化实现方法

李军海

（江苏省交通规划设计院 210001）

【摘 要】 钻孔取芯法在粉喷桩检测中的应用日益广泛。文章首先介绍了取芯检测资料整理的基本内容及评价方法；随后重点阐述了如何利用VB5.0结合AutoCAD的 ActiveX Automation技术以及DAO数据库编程技术进行取芯检测资料整理的自动化实现。

【关键词】 粉喷桩；钻孔；客户\\服务器；VB；OLE自动化；数据获取对象

0 引言 粉喷桩作为软土路基处理方法目前在高速公路建设中已被广泛采用。已建的沪宁、锡澄等高速公路均有采用粉喷桩处理软基的成功经验，尽管如此，粉喷桩的质量状况仍是令人关注的重点问题，因为粉喷桩的施工质量与其软基处理效果直接相关。目前对粉喷桩进行质量检测的方法较多，其中钻孔取芯法因其直观、评价方法全面可靠等特点而被广泛采用。粉喷桩取芯检测法是同时考虑桩体现场描述、原位标准贯入击数和室内无侧限单轴抗压强度的一种桩体质量综合评价方法。在进行资料整理时要同时将上述三方面信息随深度的变化反映在检测表中。但粉喷桩检测往往数目较大，如果资料全部由手工处理更是耗时劳力。笔者在从事此方面工作时，利用VB5.0结合AutoCAD的Act

PH

参考方法：城污水处理厂污泥检验方法 CJ/T 221-2005 4 PH的测定 电极法 一、原理

PH由测量电池的电动势而得。以玻璃电极为指示电极，饱和甘汞电极组成电池。在25℃条件下，溶液中每变化1个PH单位，电位差改变为59.16mV，据此在仪器行直接以PH的读数表示。温度差异在仪器上没有补偿装置。

用无CO2水浸泡污泥样品，最终使污泥中的[H+]完全转化至水中，达到凝固平衡后，测定此时的PH值。

二、样品制备

对于脱水后的污泥样品称取5.00g置于150ml具塞磨口锥形瓶中，加入50mlCO2水浸泡，密封。置于复式振荡器上，于室温下振摇4h后，离心5min，取上清液作为待测液。

对于含水率大于99%的污泥，可直接将玻璃电极插入测定，但侧低昂数值至少要保持恒定30s。

对于不溶解粘稠状的污泥，则将样品进行离心5min后，收取足够量上清液于量筒中，作为待测液。 三、测试程序 1、样品测定

用PH酸度计测定经处理后的样品待测液的PH值，记录结果。 2、结果表示

PH值一般保留一位小数。 四、精密度和准确度

经过7个实验室，对13个样不同浓度污泥样品PH值进行测定，实验室内相对标准偏差为0.07%～0.

免疫分析检测技术

原理：

基于抗原、抗体的特异性识别和结核反应的分析方法，通过对抗原或抗体进行标记（酶、荧光物质、放射性同位素标记等），利用标记物的信号放大作用，与现代测试技术相结合，对样品中特定的目标物进行一定的目标物进行定性定量测定。 特点：

1) 特异性强、灵敏度高

2) 方法便捷、分析容量大、检测成本低

3) 可提供系列化的产品以及技术，产品可以商业化。

1. 免疫检测技术按标记抗原或抗体标记物的不同可区分为放射免疫分析法（RIA）、酶免疫分析法（EIA）、荧光免疫分析法（FIA）等，并由这些方法延伸形成了免疫传感器、免疫亲和层析法等。最早残留免疫检测中，RIA占了很大比重，但由于该方法存在放射性防护和废物处理等问题，应用受到较大限制。免疫检测法特别是酶联免疫吸附法（ELISA）按抗原、抗体的特异性结合过程中是否有两种抗体（抗原）同时与一种抗原（抗体）竞争结合的情况，而区分为非竞争性ELISA法和竞争性ELISA法两种类型。一般目标检测物是大分子的常用非竞争性ELISA法，而目标检测物是小分子的则常采用竞争性ELISA法。大部分残留物质分子量小于1000，不具备免疫原性，以此制备的抗体，进行农药残留免疫检测时多用竞争性酶联免疫反应。

免疫分析检测技术

原理：

基于抗原、抗体的特异性识别和结核反应的分析方法，通过对抗原或抗体进行标记（酶、荧光物质、放射性同位素标记等），利用标记物的信号放大作用，与现代测试技术相结合，对样品中特定的目标物进行一定的目标物进行定性定量测定。 特点：

1) 特异性强、灵敏度高

2) 方法便捷、分析容量大、检测成本低

3) 可提供系列化的产品以及技术，产品可以商业化。

1. 免疫检测技术按标记抗原或抗体标记物的不同可区分为放射免疫分析法（RIA）、酶免疫分析法（EIA）、荧光免疫分析法（FIA）等，并由这些方法延伸形成了免疫传感器、免疫亲和层析法等。最早残留免疫检测中，RIA占了很大比重，但由于该方法存在放射性防护和废物处理等问题，应用受到较大限制。免疫检测法特别是酶联免疫吸附法（ELISA）按抗原、抗体的特异性结合过程中是否有两种抗体（抗原）同时与一种抗原（抗体）竞争结合的情况，而区分为非竞争性ELISA法和竞争性ELISA法两种类型。一般目标检测物是大分子的常用非竞争性ELISA法，而目标检测物是小分子的则常采用竞争性ELISA法。大部分残留物质分子量小于1000，不具备免疫原性，以此制备的抗体，进行农药残留免疫检测时多用竞争性酶联免疫反应。

（19）中华人民共和国国家知识产权局

（12）发明专利申请

（10）申请公布号

CN107788967A

（43）申请公布日 2018.03.13（21）申请号CN201610765712.1

（22）申请日2016.08.30

（71）申请人华邦电子股份有限公司

地址中国台湾台中市大雅区科雅一路8号

（72）发明人张家齐;许弘毅

（74）专利代理机构北京同立钧成知识产权代理有限公司

代理人马雯雯

（51）Int.CI

权利要求说明书说明书幅图

（54）发明名称

疲劳检测装置与疲劳检测方法

（57）摘要

本发明提供一种疲劳检测装置与疲劳检测

方法，其疲劳检测装置，包括第一检测单元、第

二检测单元以及处理单元。第一检测单元用以取

得第一生理信号，第二检测单元用以取得第二生

理信号。处理单元耦接于第一检测单元以及第二

检测单元，依据第一生理信号以及第二生理信号

取得多个特征时间差，并且依据所取得的多个特

征时间差随着时间的变化趋势来判定疲劳检测结

果。此外，一种疲劳检测方法也被提出。本发明

TaqMan SNP基因分型

技术方法：

此技术是由美国Life technologies公司研发的SNP分型技术，其技术原理如下简介。PCR 反应时，加入一对两端有不同荧光标记的特异探针来识别不同的等位基因（allele1和allele2），5’端为报告荧光基团（reporter），3’端为淬灭荧光基团 (quencher)。PCR过程中，两个探针能与正向引物和反向引物之间的互补序列特异退火结合。当探针以完整形式存在时，由于能量共振转移，荧光基团只发出微弱荧光。特异的探针与相应的等位基因杂合后，DNA聚合酶发挥5’到3’外切酶活性，把报告荧光基团切割下来，脱离了3’端淬灭荧光基团的淬灭作用 (quench)，从而发出荧光。两个探针的5’端标有不同的荧光 (FAM或VIC)，3’端标有MGB 淬灭基团结合体。根据检测到的不同荧光，可以判断相应的样本的SNP 等位基因型。 整个技术的示意图如下：

应用领域：本方法适用于多个涉及到SNP分型的遗传研究领域。尤其适合针对全基因组SNP关联研究获得的初步阳性位点，以及全基因组测序得到的大量初筛突变位点进行进一步的大样品验证研究。

RFLP (多重荧光)SNP分型技术

已知的很多SNP位点正好位于限制性