培养大肠杆菌用液体培养基还是固体培养基

大肠杆菌培养

一、菌种冻存液的制备

含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80oC冻存。 二、培养基制备

LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）

液体培养基

胰化蛋白胨 10.0g 酵母粉 5.0g 氯化钠 10.0g 水 1000ml pH 7.4

固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂 三、平板的制备

1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。

2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。 3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。所有锥形瓶如上述操作。用记号笔注明培养基名称、配制日期。 4）

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

基本简介

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

主要特点

（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等； （2）维生素含量为依格尔培养基的4倍； （3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸； （4）含有微量的铁离子。

主要成分

DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 化合物名称 无水氯化钙 .2H 2 O 硝酸铁 .9H 2 O 氯化钾 无水硫酸镁 氯化钠 无水磷酸二氢钠 丁二酸 丁二酸钠 L-盐酸精氨酸 L-盐酸胱氨酸 甘氨酸 L-盐酸组氨酸 L-异亮氨酸 L-亮氨酸 含量 (mg/L) 265.00

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

基本简介

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

主要特点

（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等； （2）维生素含量为依格尔培养基的4倍； （3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸； （4）含有微量的铁离子。

主要成分

DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 化合物名称 无水氯化钙 .2H 2 O 硝酸铁 .9H 2 O 氯化钾 无水硫酸镁 氯化钠 无水磷酸二氢钠 丁二酸 丁二酸钠 L-盐酸精氨酸 L-盐酸胱氨酸 甘氨酸 L-盐酸组氨酸 L-异亮氨酸 L-亮氨酸 含量 (mg/L) 265.00

麦康凯琼脂

麦康凯可能是世界上常用的一种鉴别培养基，它主要通过乳糖发酵鉴别肠道致病菌，还能抑制革兰氏阳性菌生长，发酵乳糖的细菌能使培养基变红，这是因为细菌发酵乳糖产酸而使培养基的PH值变成酸性的。不发酵乳糖的细菌没有颜色的变化。

麦康凯抑制阳性菌的生长，是因为其中加了结晶紫。 MACCONKEY AGAR

MacConkey agar is probably the most popular solid differential medium in the world. It is mainly used in identification of lactose fermenting, Gram-negative enteric pathogens and for inhibiting growth of Gram-positive organisms. Bacterial colonies that can ferment lactose turn the medium red. This red color is due to the pH indicators response to the acidic environment cre

麦康凯琼脂

麦康凯可能是世界上常用的一种鉴别培养基，它主要通过乳糖发酵鉴别肠道致病菌，还能抑制革兰氏阳性菌生长，发酵乳糖的细菌能使培养基变红，这是因为细菌发酵乳糖产酸而使培养基的PH值变成酸性的。不发酵乳糖的细菌没有颜色的变化。

麦康凯抑制阳性菌的生长，是因为其中加了结晶紫。 MACCONKEY AGAR

MacConkey agar is probably the most popular solid differential medium in the world. It is mainly used in identification of lactose fermenting, Gram-negative enteric pathogens and for inhibiting growth of Gram-positive organisms. Bacterial colonies that can ferment lactose turn the medium red. This red color is due to the pH indicators response to the acidic environment cre

培养基验收规程

1 目的

规范培养基验收的过程和项目，以保证实验室所用培养基符合要求。

2 适用范围

适用于本实验室培养基的验收工作。

3 职责

培养基验收员应遵循本规程，按照本规程的要求进行培养基验收。 建立并更新《实验室在用培养基清单》

4 程序

4.1术语和定义

4.1.1培养基批量：是培养基完整的可追溯单位，是指满足产品要求（内部控制）和性能测试，产品型号和质量稳定的一定量的半成品或成品。这些产品在特定的生产周期生产，而且编号相同。

4.1.2商品化脱水合成培养基：使用前需加水和处理的干燥培养基，如：粉末、小颗粒、冻干粉等形式：

——完全培养基；

——不完全培养基，使用的时候需加入添加剂。

4.1.3商品化即用型培养基：以即用形式或融化后即用形式置于容器（例如平皿、试管或其他容器）内供应的液体、固体或半固体培养基： ——完全可即用的培养基； ——需重新融化的培养基；

——使用前需重新融化并分装的培养基；

——使用前需重新融化，添加物质并分装的培养基。

4.2培养基接货验收

培养基的接货验收，由培养基验收员完成。

新购买的商品化脱水合成培养基（通常为脱水的粉状或颗粒装）和商品化即用型培养基，应保

常用培养基的配制

（一）营养琼脂培养基

【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基基础之用。

【成分】牛肉膏 3g

NaCl 5g 蛋白胨 10g 琼 脂 20g

【pH值】7.2±0.2

【制法】上述成分称取38g加蒸馏水1000ml，经121.3℃ 30min高压灭菌备用。 （二）蛋白胨水培养基

【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。

【成分】蛋白胨 10g

氯化钠 5g

【pH值】7.6 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装于试管，每管2～3ml，经121.3℃ 20min高压灭菌备用。

（三）半固体培养基

【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。 【成分】蛋白胨 10g

氯化钠 5g 琼脂 2.5～3g

【pH值】7.6

【制法】上述成分加入1000ml蒸馏水中，加热溶解，分装于试管，每管3～4ml，经 121.3℃ 20min高压灭菌备用。

（四）营养肉汤培养基

【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等，也可用于消毒效果的测定。 【成

146种培养基配方

1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）

牛肉膏 蛋白胨 氯化钠 琼脂 pH

水

3g 5g 10g 15~20g 7.0~7.2 1000mL

2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉

硝酸钾 氯化钠 磷酸氢二钾 硫酸镁 硫酸亚铁 琼脂 水 pH

20g 1g 0.5g 0.5g 0.5g 0.01g 20g 1000mL 7.2～7.4

配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。 查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）

硝酸钠 磷酸氢二钾 氯化钾 硫酸镁 硫酸亚铁 蔗糖 琼脂 水 pH

2g 1g 0.5g 0.5g 0.01g 30g 15~20g 1000mL

自然

121℃灭菌20min。

4、马丁氏（

文献综述

发酵培养基的优化

申请学位： 院 （系）： 专 业： 姓 名： 学 号： 指导老师：

二 O 一 五 年 六 月 五 日

学士学位 药学院 生物技术 张永芳 114080107 张小华（讲师）

文献综述：

发酵培养基的优化

张永芳：114080107 指导老师：刘向勇

【摘要】：发酵，这一门悠久的技艺，在古今中外的生产生活与科学研究中扮

演着不可或缺的角色。在实验室发酵过程中,经常需要通过试验来寻找研究对象的变化规律,这些对象包括培养基的设计、工艺参数等;而这些变化规律的寻找就要通过科学的试验设计与数据分析来实现。通过对规律的研究达到各种实用的目的,比如提高产量、降低消耗、提高产品质量等,特别对于新菌种、新产品的试验。本文对发酵培养基优化的基本方向进行了综述,并比较了常用的试验设计与数据分析方法。

【关键词】：发酵、发酵培养基、优化、最优组合、响应面法优化 【内容】：

在工业化发酵生产中，发酵培养基的设计是十分重要的，因为培养基的成分对产物浓度、菌体生长都有重要的影响。培养基优化，是指面对特定的微生物，通过实验手段配比和筛选找到一种最适合其生长及发酵的培养基，在原来的基础上提高发酵产物的产量，以期达到生产最大发酵

毕业论文

课 题 名 称 枯草芽孢杆菌培养基的优化研究

2014年5月18日

邵阳学院2014届毕业设计（论文）

目 录

摘要 ..................................................................................................................... Ⅰ Abstract ············································································································ Ⅱ 1 前 言 ············································································································· 1 2 材料与方法 ························································································