tcid50与pfu换算

1、PFU:plaque forming unit，空斑形成单位：感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml。由于测定pfu往往重复性较差，因此近些年许多研究又开始采用TCID50方法来计算病毒的感染单位。因此建议也可使用TCID50法。

2、MOI :multiplicity of infection，感染复数：传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。

然而，由于病毒的数量单位有不同的表示方式，从而使MOI产生了不同的含义。能产生细胞裂解效应的病毒例如单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu表示病毒数量，因此其MOI的含义与传统的概念相同。传统意义上的MOI的测定，其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件，遵循Poisson分布规律，可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数（MOI）。其公式为：

P = 1- P(0) ,P(0) = e-m 或m = -InP（0）。 其中

病毒TCID50测定

操作步骤 (1) 准备细胞

取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细 胞消化后加10ml培养液正好传一块96孔板，要传匀）。每个孔的细胞铺成单层大约60％丰度即可接种病毒（下午传好板第二天早上就能用）。

细胞对照选取16个孔即可。滴定与对照可以在一块培养板上进行，操作中注意不要窜孔。也可以分别在不同的细胞培养板上进行，但要保证实验条件一致。 (2) 稀释待测病毒液。

A法为参考书上标准的操作方法 B法参照书将液体量减少后的结果

病毒稀释液根据是否需要胰酶来选择适合的液体，无论哪种都无血清。

A向每支试管中加入1.8ml病毒稀释液。向1号试管中加入0.2ml病毒，依次10倍系列稀释至适宜浓度，最后一支试管。

B在EP管中用无血清的孵育液10倍倍比稀释病毒原液(10-1，10-2…10-10等)，根据病毒大致的滴度确定稀释的倍数。首次滴定可以多稀释几个滴度。

根据接种的孔数稀释病毒，常规每个稀释度接种4孔，则每个稀释度配500μl，即10-1为50μl加入450μl的孵育液中；如每个稀释度接种8个孔，则各配制1ml，即10-1为100μl加入900μl孵育液中。若接种8个孔，则相应增加液

实验 病毒感染力的滴定（TCID50的测定）

滴度：在半定量或定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱。 滴度（抗体的多少）越高，受传染的机会就越小。

一、实验目的

了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。

二、测定病毒感染力的方法

半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测 半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测

半数细胞培养物感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞来检测 蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测

三、材料

1、长满单层的细胞1瓶 2、胰酶、吸球、吸管、生长液 3、96孔细胞培养板 4、加样器、枪头 5、病毒液（PRV） TCID50的操作步骤

1) 准备细胞

取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细

胞消化后加10ml培养液正好传一块96孔板，要传匀）。每个孔的细胞铺成单层

TCID50测定方案

2012112339

1 简介

TCID50(Tissue Culture Infective Dose)，半数组织培养感染量，又称50%组织细胞感染量，指能在半数细胞培养板孔或试管内引起细胞病变(Cytopathic effect，CPE)的病毒量。

将不同稀释度的病毒接种到96孔板上培养的单层细胞上。观察细胞病变，待细胞不再病变时记录每个稀释度出现病变和未出现病变的孔数，按照Reed-Muench公式计算TCID50值。

2 试剂

试剂

DMEM-basic培养基 胰蛋白酶

胎牛血清Fetal bovine serum PBS

来源 Gibco，上海 Gibco， Hyclone， Hyclone，

保存条件 4℃保存 -20℃冻存 -20℃冻存 -20℃冻存

3 仪器与耗材

仪器

CO2培养箱 生物安全柜 倒置显微镜 显微照相系统 高速冷冻离心机 电子天平 移液器 液氮罐 电冰箱

规格

耗材 细胞培养瓶 无菌离心管 一次性移液管 细胞培养板

规格

25cm2

15mL，50mL

1mL，2mL，5mL，10mL 96孔

4 细胞及培养基

DF-1细胞株

细胞

中和试验

动物受到病毒感染后，体内产生特异性中和抗体，并与相应的病毒粒子呈现特异性结合，因而阻止病毒对敏感细胞的吸附，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力。中和试验

(Neutralization Test)是以测定病毒的感染力为基础，以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依据，来判定免疫血清中和病毒的能力。

中和试验常用的有两种方法：一种是固定病毒量与等量系列倍比稀释的血清混合，另一种是固定血清用量与等量系列对数稀释(即十倍递次稀释)的病毒混合；然后把血清－病毒混合物置适当的条件下感作一定时间后，接种于敏感细胞、鸡胚或动物，测定血清阻止病毒感染宿主的能力及其效价。如果接种血清病毒混合物的宿主与对照(指仅接种病毒的宿主)一样地出现病变或死亡，说明血清中没有相应的中和抗体。中和反应不仅能定性而且能定量，故中和试验可应用于：

1.病毒株的种型鉴定：中和试验具有较高的特异性，利用同一病毒的不同型的

毒株或不同型标准血清，即可测知相应血清或病毒的型，所以，中和试验不但可以定属而且可以定型。

2.测定血清抗体效价：中和抗体出现于病毒感染的较早期，在体内的维持时间

较长。动物体内中和抗体水平的高低，可显示动物抵抗病毒的能力。

3.分析病毒的抗原性。

毒素和抗毒素亦可进行中和

病毒感染力的滴定（TCID50的测定）

概念：半数感染量（median infective dose， ID50） 表示在规定时间内，通过指定感染途径，使一定体重或年龄的某种动物半数感染所需最小细菌数或毒素量。 一、实验目的

了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。 二、测定病毒感染力的方法

半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测 半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测 半数细胞培养物(tissue,组织)感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞来检测

蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测 三、材料

1、长满单层的细胞1瓶 2、胰酶、吸球、吸管、生长液 3、96孔细胞培养板 4、加样器、枪头 5、病毒液（PRV） 四、TCID50的操作步骤

1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。

2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100μl

病毒感染力的滴定（TCID50的测定）

概念：半数感染量（median infective dose， ID50） 表示在规定时间内，通过指定感染途径，使一定体重或年龄的某种动物半数感染所需最小细菌数或毒素量。 一、实验目的

了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。 二、测定病毒感染力的方法

半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测 半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测 半数细胞培养物(tissue,组织)感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞来检测

蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测 三、材料

1、长满单层的细胞1瓶 2、胰酶、吸球、吸管、生长液 3、96孔细胞培养板 4、加样器、枪头 5、病毒液（PRV） 四、TCID50的操作步骤

1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。

2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100μl

包括单位换算 照片换算的一些知识,还有腰围的换算

照片尺寸对照表

照片尺寸(英寸) 打印尺寸(厘米)

5寸：5*3.5(5寸/3R) 12.70*8.89

6寸：6*4(6寸/4R) 15.24*10.16

7寸：7*5(7寸/5R) 17.78*12.70

8寸：8*6(8寸/6R) 20.32*15.24

10寸：10*8(10寸/8R) 25.40*20.32

12寸：10*12(12寸) 25.40*30.48

14寸：12*14(14寸) 30.48*35.56

16寸：12*16(16寸) 30.48*40.64

18寸：14*18(18寸) 35.56*45.72

20寸：16*20(20寸) 40.64*50.80

24寸：20*24(24寸) 50.80*60.96

30寸：24*30(30寸) 60.96*76.20

36寸：24*36(36寸) 60.96*91.44

ps:分辨率：300dpi 1inch＝2.54cm以英寸为单位，以长边为标准。讲多少寸，是指长边的英寸数，比如5 x 3.5就是5寸。讲多少R，指短边的英寸数，比如4R是6 X 4寸，而3R就是5寸的5 X 3.5寸一般照片的大小为：

1英寸照片的尺寸应为3.6厘米×2.7厘

包括单位换算 照片换算的一些知识,还有腰围的换算

照片尺寸对照表

照片尺寸(英寸) 打印尺寸(厘米)

5寸：5*3.5(5寸/3R) 12.70*8.89

6寸：6*4(6寸/4R) 15.24*10.16

7寸：7*5(7寸/5R) 17.78*12.70

8寸：8*6(8寸/6R) 20.32*15.24

10寸：10*8(10寸/8R) 25.40*20.32

12寸：10*12(12寸) 25.40*30.48

14寸：12*14(14寸) 30.48*35.56

16寸：12*16(16寸) 30.48*40.64

18寸：14*18(18寸) 35.56*45.72

20寸：16*20(20寸) 40.64*50.80

24寸：20*24(24寸) 50.80*60.96

30寸：24*30(30寸) 60.96*76.20

36寸：24*36(36寸) 60.96*91.44

ps:分辨率：300dpi 1inch＝2.54cm以英寸为单位，以长边为标准。讲多少寸，是指长边的英寸数，比如5 x 3.5就是5寸。讲多少R，指短边的英寸数，比如4R是6 X 4寸，而3R就是5寸的5 X 3.5寸一般照片的大小为：

1英寸照片的尺寸应为3.6厘米×2.7厘

今天用taq酶将我的目的基因扩出来了，但是相同条件用pfu却没扩出来。目的片段长度1。4kb，pcr程序是， 94℃ 5min 94℃30sec 50℃30sec 72℃1min30sec 30个循环 72℃10min

请问该如何改进才能适合pfu的扩增？

可能含有uracil污染，uracil会抑制pfu的活性，你可以加用dUTPase试试，或者100倍稀释模板试试

见笑，uracil是什么啊？模板浓度高也会影响pfu的活性吗？

uracil是脱氧尿嘧啶。会干扰高保真酶的3’－5’外切酶的活性，稀释模板的目的是为了稀释其中高保真酶抑制剂的浓度

另外taq酶的延伸时间可以按1kb/min，pfu呢？另外，退火温度是不是和taq酶的有所不同啊？

pfu比taq的力量稍弱。 可试：

1. 0.25单位的pfu，在25ul中。

2. 减少在94℃ 中的时间；降低延链的温度为68℃ 。 94℃ 3min 94℃ 15 sec 50℃ 15 sec 68℃ 1 min 30 sec 35 个循环 68℃ 5 min

延伸时间可能不够吧，有说法，PFU的延伸速率是600bp/min,我 扩2KB片段，要延伸时间4分钟才能出条带。2分钟以下都是