污泥粪大肠菌群检测方法

方法名称 水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 申请人 （纸片快速法） 项目负责人员 验证检测方法符合实验制定原因 室要求、确保数据准确性与有效性 方法适用范围 适用于地表水、地下水及废水中的总大肠菌群和粪大肠菌群的快速测定。 方法来源 HJ 755-2015《水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法》 1.仪器和设备 1.1高压蒸汽灭菌器 1.2培养箱 1.3冰箱 1.4 采样瓶 1.5 试管 1.6 水质总大肠菌群和粪大肠菌群测试纸片 2.试剂：2.1硫代硫酸钠 2.2乙二胺四乙酸二钠 采样和测试过程中，所用到的玻璃器皿需灭菌后方可使用。 按MPN法，将一定量的水样以无菌操作的方式接种到吸附有适量指示剂（溴甲酚紫和2,3,5-氯化三苯四氮唑即TTC）以及乳糖等营养成分的无菌滤纸上，在特定的温度（37℃或44.5℃）培养24h，当细菌生长繁殖时，产酸使pH值降低，溴甲酚紫指示剂由紫色变黄色，同时，产气过程相当的脱氢酶在适宜的pH范围内，催化底物脱氢还原TTC形成红色的不溶性三苯甲（TTF）。即可在产酸后的黄色背景下显示出红色斑点（或红晕）。通过上述指示剂的颜色变化就可对是否产酸产气作出判断，从而确定是否有总大肠菌群或粪大肠菌群存在，再通

BS ISO 4832:2006食品和动物饲料的微生物学 大肠菌群计数水

平法--菌落计数技术

序

ISO是国际标准的全球性组织。准备国际标准这项工作通常由ISO技术联盟来完成。每一个团体成员负责各自的学科。与ISO有合作的国际性机构、政府与非政府机构，也有参与这项工作。ISO与国际电子组织（IEC）在电子标准化方面有着密切的合作关系。

国际性标准的起草原则在《ISO/IEC 细则》第三部分中有给出。

起草的国际性标准被技术委员会采用是通过全体成员投票决定的。发布一个国际性标准需要至少75％成员投赞成票。国际性标准ISO 4831 由ISO/IEC 34技术委员会（农产品，小组委员会SC9，微生物）起草的。

这个第三版的ISO 4832取代了ISO 4832:1991和ISO 5541-1:1986。主要的修改内容如下：

——在35℃下培养这个可选择的程序已被删除（见4.2）； ——引入使用亮绿乳糖胆汁培养基做确证实验（见5.4和9.4）。

考虑到本标准的上一个版本已被修改，已确认ISO 4832:1991的选择性方法不受影响。 绪论

由于食品与饲料的种类繁多，这个标准不一定适合某一类产品。在这种情况下，可使用不同的方法，但必须有绝对的

粪大肠菌群测定复习试题

一、填空题

1.地表水环境质量标准(GHZB1—1999)中，对环境质量卫生指标粪大肠菌群项目作出明确规定：Ⅰ类水质标准值为；Ⅱ类水质标准值为；Ⅲ类水质标准值为；Ⅳ类水质标准值为，Ⅴ类水质标准值为。

答：≤200个/L；≤1000个/L；≤2000个/L；≤5000个/L；≤10000个/L。

2.粪大肠菌群是一部分，用粪大肠菌群作为卫生学指标比用

更有。目前，粪大肠菌群被认为是受粪便污染的最实用的。

答：总大肠菌群；总大肠菌群；代表性；指示菌。

3.检测粪大肠菌群时作发酵试验用的培养基，是由、、

、等配制而成的，调节pH为，应在

灭菌。

答：蛋白胨；牛肉浸膏；乳糖；氯化钠；7.2-7.4；115℃；20min。

4.农田灌溉水质标准(GB5084—92)中，根据农作物的需求状况，将灌溉水质按灌溉作物分为三类：水作、旱作和蔬菜。其生物指标粪大肠菌群标准值定为

。

答：≤10000个/L。

5.为了区别存在于中的大肠菌群和存在于的大肠菌群,可将培养_ __ _____，在此种条件下仍能_____ 并使____________ _，则称为粪大肠菌群。

答：自然环境；温血动物肠道内；温度提高到44℃；生长；发酵乳糖产酸产气。

6.进行复

实验四 食品中大肠菌群的测定

一、实验目的 掌握大肠菌群的原理及其检验方法，以判 别食品的卫生质量 了解MPN测定法在食品卫生检验中的意义

二、实验原理 大肠菌群是指一群在一定培养条件下可发酵 乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴

性无芽孢杆菌。 该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指

标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。

最近似数测定法(MPN)是指对未知样品做连

续的10倍稀释，选择3个连续的10倍稀释液，每种稀释液接种3管装有培养基的试管中培养，根

据LST初发酵试验以及BGLB发酵证实实验，证实大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告 每g(mL)样品中大肠菌群的最可能数。 食品中大肠菌群数以每g(mL)样品中大肠菌群 的最可能数来表示，即为大肠菌群MPN值。

三、实验器材(一)培养基 月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤(LST)培养基

煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)培养基(二)实验材料 市售饮料 (三)其他 三角瓶，试管，培养皿，移液管

(四)仪器超净工作台，电子天平，高压蒸汽灭菌锅

四、实验准备(一)配制培养基和试剂(以中央台为单位)

1、配制生理盐水：1000mLNaCl 8.5g 水 1000mL

分装： 3个三角瓶(含玻珠)

开封县疾病预防控制中心大肠菌群快速纸片法原始记录

共 页 第 页

受 检 单 位 ?供样单位?

检 测 环 境 温度（T）： ℃ ；相对湿度（RH）： % 接 样 日 期 检 测 地 点 —— 检 测 依 据

检测起止日期

年 月 日

年 月 日～ 月 日

□《食（饮）具消毒卫生标准》GB14934-94

□《食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定》GB4789.3-2008

检 测 仪 器 □电热恒温培养箱（型号：DNP-9272）36±1℃ 编号□04-15 □04-24 □05-11 培 养 基 □LST肉汤ML □BGLB肉汤ML □其他 培 养 条 件 培养温度 ℃，培养时间 h

纸片颜色及结果 样品编号及样品名称 均匀紫色 （未检出） 黄色背景上有红点或片状红晕（检出） 异常显色反应（可疑） 可疑结果确证 （发酵法） ?样品编号1? ?样品名称1? ?样品编号

开封县疾病预防控制中心大肠菌群快速纸片法原始记录

共 页 第 页

受 检 单 位 ?供样单位?

检 测 环 境 温度（T）： ℃ ；相对湿度（RH）： % 接 样 日 期 检 测 地 点 —— 检 测 依 据

检测起止日期

年 月 日

年 月 日～ 月 日

□《食（饮）具消毒卫生标准》GB14934-94

□《食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定》GB4789.3-2008

检 测 仪 器 □电热恒温培养箱（型号：DNP-9272）36±1℃ 编号□04-15 □04-24 □05-11 培 养 基 □LST肉汤ML □BGLB肉汤ML □其他 培 养 条 件 培养温度 ℃，培养时间 h

纸片颜色及结果 样品编号及样品名称 均匀紫色 （未检出） 黄色背景上有红点或片状红晕（检出） 异常显色反应（可疑） 可疑结果确证 （发酵法） ?样品编号1? ?样品名称1? ?样品编号

大肠菌群最大可能数（MPN）检索表

MPNb 1ml（g）×3 0.1ml（g）×3 0.01ml（g）×3 ﹝100ml（g试样） 阳性管数a 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 0 0 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 <30 30 60 90 30 60 90 120 60 90 120 160 90 130 160 190 40 70 110 150 70 110 150 190 110 150 200 240 160 200 240 290 90 140 200 <5 10 10 30 30 95%可信限 上限 下限 <5 90 <5 130 200 210 230 360 360 10 30 360 370 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 0 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 260 150 200 270 340 210 280 350 420 290 360 440 530 230 390 640 950 430 750 1200 1600 930 1500 2100 2900 2400 4600 11000 ≥24000 30 70 40 100 40 70 150 70 140 300 150 300 350 360 710 1500 440 890 470 1500 1200 1300 3800 2100 2300 3800 3800 4400 4700 13000 24000 48000 a 本表采用三稀释度[1ml（g）、0.1 ml（g）和0.01 ml（g）]，每稀释度3管。 b 表内所列检样量如改用1 ml（g）、1 ml（g）和0.1 ml（g）时，表内MNP数字应相应降低10倍；如改用0.1 ml（g）、0.01 ml（g）和0.001 ml（g）时，则表内MNP数字应相应提高10倍，其余可类推。

PH

参考方法：城污水处理厂污泥检验方法 CJ/T 221-2005 4 PH的测定 电极法 一、原理

PH由测量电池的电动势而得。以玻璃电极为指示电极，饱和甘汞电极组成电池。在25℃条件下，溶液中每变化1个PH单位，电位差改变为59.16mV，据此在仪器行直接以PH的读数表示。温度差异在仪器上没有补偿装置。

用无CO2水浸泡污泥样品，最终使污泥中的[H+]完全转化至水中，达到凝固平衡后，测定此时的PH值。

二、样品制备

对于脱水后的污泥样品称取5.00g置于150ml具塞磨口锥形瓶中，加入50mlCO2水浸泡，密封。置于复式振荡器上，于室温下振摇4h后，离心5min，取上清液作为待测液。

对于含水率大于99%的污泥，可直接将玻璃电极插入测定，但侧低昂数值至少要保持恒定30s。

对于不溶解粘稠状的污泥，则将样品进行离心5min后，收取足够量上清液于量筒中，作为待测液。 三、测试程序 1、样品测定

用PH酸度计测定经处理后的样品待测液的PH值，记录结果。 2、结果表示

PH值一般保留一位小数。 四、精密度和准确度

经过7个实验室，对13个样不同浓度污泥样品PH值进行测定，实验室内相对标准偏差为0.07%～0.

大肠艾希氏菌的鉴定

[资料介绍]

随着季节的转暖，人们身边的细菌和病毒又开始活跃起来，各家医院和新闻媒体相继报导了多起春季由于饮食造成的腹泻，人们的饮食卫生问题又再次被提上了议程。本人对全市的几家冻禽供应商进行了抽样检测，用血清学诊断及生化鉴定方法对产肠毒素大肠艾希氏菌进行分离和鉴定，其结果可以说明当今冻离类产品中所存在的问题。

[目录]

[1]GB/T4789-2003 中华人民共和国国家标准 食品微生物学检验

[2]韩秀兰,柳连顺,杜敏,等.致泻性大肠埃希菌病原学分布研究[J].中国医学检验杂志,2001,2(4):258～261.

[3]杨胜彬,胡昌军,米庆秀等.一起肠产毒性大肠埃希菌O6:LT致婴幼儿腹泻爆发的调查[J].中华流行病学杂志,2004,25(11):977.

Abstract: along with the season warms up, the microbe round the people becomes activity, some hospitals and media of news reported much diarrhea cost of food at the same time,

三级学科 微生物学及检验 项目编号码_______________

项目——导师制实验报告

实验名称: 肠道菌群分离培养、鉴定及药敏分析 学生姓名: 曾正勇 年 级: 2013医检1班 专 业: 医学检验学 指导教师: 王健 教授 实验日期: 2015年11月4日

安徽理工大学医学院 二O一五 年 十一 月

一、实验概述

细菌:广义的细菌即为原核生物。是指一大类细胞核无核膜包裹，只存在称作拟核区（nuclear region)（或拟核）的裸露DNA的原始单细胞生物，包括真细菌（eubacteria）和古生菌（archaea）两大类群。人们通常所说的即为狭义的细菌，狭义的细菌为原核微生物的一类，是一类形状细短，结构简单，多以二分裂方