柱式质粒DNA小量抽提试剂盒

质粒抽提试剂盒基本原理

碱裂解法从大肠杆菌中制备质粒，是每个分子生物学实验室都要用到的常规技术，但是大家对碱法抽提质粒的原理知之甚少。

一、碱法抽提质粒用到的三种溶液及硅酸纤维膜（超滤柱）

溶液I：50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0； 溶液II：0.2 N NaOH / 1% SDS；

溶液III：3 M 醋酸钾/ 2 M 醋酸/75%酒精。

二、溶液I中各成分的作用 葡萄糖是使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底

部，因此有些试剂厂商的溶液I没有葡萄糖成分；EDTA是Ca和Mg等二价金属离子的螯合剂，其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性。

2+

2+

三、溶液II中各成分的作用 NaOH主要是为了溶解细胞，释放DNA，因为在强碱性

的情况下，细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的变化；但NaOH易和空气中的CO2发生反应，形成碳酸钠，降低了NaOH的碱性，所以必须用新鲜的NaOH。SDS与NaOH联用，其目的是为了增强NaOH的强碱性，同时SDS能很好地结合蛋白，产生沉淀。这一步要记住两点：第一，时间不能过长，因为在这样的

质粒抽提试剂盒基本原理

碱裂解法从大肠杆菌中制备质粒，是每个分子生物学实验室都要用到的常规技术，但是大家对碱法抽提质粒的原理知之甚少。

一、碱法抽提质粒用到的三种溶液及硅酸纤维膜（超滤柱）

溶液I：50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0； 溶液II：0.2 N NaOH / 1% SDS；

溶液III：3 M 醋酸钾/ 2 M 醋酸/75%酒精。

二、溶液I中各成分的作用 葡萄糖是使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底

部，因此有些试剂厂商的溶液I没有葡萄糖成分；EDTA是Ca和Mg等二价金属离子的螯合剂，其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性。

2+

2+

三、溶液II中各成分的作用 NaOH主要是为了溶解细胞，释放DNA，因为在强碱性

的情况下，细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的变化；但NaOH易和空气中的CO2发生反应，形成碳酸钠，降低了NaOH的碱性，所以必须用新鲜的NaOH。SDS与NaOH联用，其目的是为了增强NaOH的强碱性，同时SDS能很好地结合蛋白，产生沉淀。这一步要记住两点：第一，时间不能过长，因为在这样的

一、试剂盒打开后需要准备的工作

1、Proteinase K（蛋白酶K）的溶解

①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解

②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100ul～200ul

③将分装好的Proteinase K放入-20℃冰箱中保存，使用期限为12个月 2、组织抑制剂（Inhibitor Removal buffer）的调配

加入20ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩 3、洗液（wash buffer）的调配

加入80ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩

二、组织DNA提取（试剂盒）

1、组织样品处理与消化

①将采集来的样品剪碎（≤0.1cm）洗净保存液。

②加入组织破解液Tissue-lysis 200ul 蛋白酶K 40ul然后放入55℃水浴锅内3

个小时使其充分消化。

2、DNA提取

①在消化好的组织样品中加入结合液binding buffer 200ul 然后放入70°水浴

锅中10分钟。

②再加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。 ③倒掉底液，加500ul组织抑制剂Inhibitor

产品简介

本试剂盒对传统的碱裂解法进行了优化，可以在8 min内获得高质量质粒DNA。优化的裂解液可以使得离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA。以下操作步骤适用于提取1-4 ml过夜培养的大肠杆菌，质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。

使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

提取得率

质粒类型 菌液量 得率 质粒

pBR322, pACYC及其衍生载体

低拷贝 1-4 ml 3-10 μg pSC101及其衍生载体，

SuperCos, pWE15 高拷贝

1-4 ml

6-24 μg

pTZ, pUC, pBS, pGM-T

注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1． 溶液P1在使用前先加入RNase A和TIANRed（将试剂盒中提供的RNase A和TIANRed全

部加入），混匀，置于2-8℃保存。

2． 使用前请先检查溶液P2和P5是否出现浑浊，如有混浊现象，可在

实验一 质粒DNA的小量制备

（碱裂解法）

一、

实验原理

所有分离质粒DNA的方法都含有以下3个步骤：

①细菌培养物的生长；②细菌的收获和裂解；③质粒DNA的提取与纯化。

本实验以碱性SDS快速法小量制备pUC质粒。碱裂解法对于以前应用的所有大肠杆菌均卓有成效。该方法的特点是：加溶菌酶可破坏菌体细胞（小量制备可省略不用溶菌酶），去污剂SDS可使细胞裂解，并使蛋白质变性，在碱性条件下，破坏碱基配对，可使宿主的线状染色体DNA变性，但闭环质粒DNA链由于处于拓扑缠绕状态而彼此不分开。当条件恢复正常时（加入酸性试剂中和），质粒DNA链迅速得到准确配置，重新形成完全天然的超螺旋分子。细菌染色体DNA缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀下来而质粒DNA则留在上清液中，乙醇沉淀后可得到质粒DNA。如需进一步纯化，可应用聚乙二醇沉淀或氯化铯一溴化乙锭梯度平衡法。

环状双链的质粒DNA分子具有三种不同的构型：当其两条多核苷酸链均保持着完整的环行结构时，称之为共价闭合环状DNA（cccDNA），这样的DNA通常呈现超螺旋SC构型；如果两条多核苷酸中只有一条保持着完整的环形结构，另一条出现有一至数个缺口时，称之为开环DNA（ocDNA），

实验一 质粒DNA的小量制备

（碱裂解法）

一、

实验原理

所有分离质粒DNA的方法都含有以下3个步骤：

①细菌培养物的生长；②细菌的收获和裂解；③质粒DNA的提取与纯化。

本实验以碱性SDS快速法小量制备pUC质粒。碱裂解法对于以前应用的所有大肠杆菌均卓有成效。该方法的特点是：加溶菌酶可破坏菌体细胞（小量制备可省略不用溶菌酶），去污剂SDS可使细胞裂解，并使蛋白质变性，在碱性条件下，破坏碱基配对，可使宿主的线状染色体DNA变性，但闭环质粒DNA链由于处于拓扑缠绕状态而彼此不分开。当条件恢复正常时（加入酸性试剂中和），质粒DNA链迅速得到准确配置，重新形成完全天然的超螺旋分子。细菌染色体DNA缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀下来而质粒DNA则留在上清液中，乙醇沉淀后可得到质粒DNA。如需进一步纯化，可应用聚乙二醇沉淀或氯化铯一溴化乙锭梯度平衡法。

环状双链的质粒DNA分子具有三种不同的构型：当其两条多核苷酸链均保持着完整的环行结构时，称之为共价闭合环状DNA（cccDNA），这样的DNA通常呈现超螺旋SC构型；如果两条多核苷酸中只有一条保持着完整的环形结构，另一条出现有一至数个缺口时，称之为开环DNA（ocDNA），

微生物检测试剂盒

核

酸 产品编

项目

种号 类

产品名称

方 法

规 格 价 格

SA-6131 沙门氏菌(Spp)核酸检测试剂盒

沙门氏菌 DNA

SA-6132 沙门氏菌(Spp)核酸检测试剂盒 副溶血性弧菌(VP)核酸检测试剂

SA-7051

副溶血性盒

DNA

弧菌 副溶血性弧菌(VP)核酸检测试剂

SA-7052

盒 SA-7061 霍乱弧菌(VC)核酸检测试剂盒

霍乱弧菌 DNA

SA-7062 霍乱弧菌(VC)核酸检测试剂盒 大肠杆菌(O157:H7)核酸检测试剂

SA-7071

盒

大肠杆菌 DNA

大肠杆菌(O157:H7)核酸检测试剂

SA-7072

盒

单增李斯特菌(LM)核酸检测试剂

SA-7081

单增李斯盒

DNA

特菌 单增李斯特菌(LM)核酸检测试剂

SA-7082

盒

金黄色葡萄球菌(MRSA)核酸检测

SA-7091

金黄色葡试剂盒

DNA

萄球菌 金黄色葡萄球菌(MRSA)核酸检测

SA-7092

试剂盒

口腔变形链球菌(SM)核酸检测试

SA-7111

口腔变形剂盒

DNA

链球菌 口腔变形链球菌(SM)核酸检测试

SA-7112

剂盒

幽门螺旋杆菌(HP)核酸检测试剂

SA-7121

幽门螺旋盒

DNA

杆菌 幽

质粒提取实验步骤

摇菌：（先倒入锥形瓶再消毒）

1 将配好的LB培养液高温消毒后，放入40C冰箱，冷却；

2 在酒精灯旁操作，向锥形瓶中加入100mlLB，加入150ul氨苄（看抗性）； 3 再向锥形瓶中挑入少量菌（液体：60~80ul；固体：绿豆大小）； 4 放入摇床，摇一夜。

LB培养液的配方

1）胰化蛋白胨（） 10g/L(tryptone) 2）酵母提取物 5g/L（yeast extract） 3）Nacl 10g/L

4）去离子水（双蒸水）950ml 终体积为1000ml 5）配好后，需高温消毒（纱布或报纸包）

质粒提取：QIAGEN plasmid Midi kit（25）试剂盒

准备2个50mlEP管，提2个质粒一共要6个50mlEP管。 使用前注意事项：

1）P1在使用前要加入RNAase，终浓度为100ug/ml，P1一直放40C。 2）事先溶解P2（天冷时P2会出现沉淀，应放37 0C水浴溶解）。 3）预冷至P1、P3（P2作用为裂解细胞）至4 0C。

4）提质粒前一天消毒50ml，20ml管子及2mlEP管及LB，干燥待用。

5）摇菌和保菌都要开酒精灯，尽量保持

产品详细说明书

小鼠IL-2定量分析酶联免疫检测试剂盒

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-2浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整,如有疑问请与北京博凌科为生物科技有限公司联系，我们将提供力所能及的帮助。

如您有其它需求，请登录北京博凌科为生物科技有限公司网站或致电本公司。

IL-2简介：

IL-2是一种主要由T淋巴细胞产生的多效性的细胞因子，成熟的鼠IL-2是149个氨基酸的糖蛋白，由169个氨基酸的前体蛋白通过剪切而成为成熟的蛋白。

IL-2在抗体刺激引起的不同反应阶段的T细胞，自然杀伤细胞和B细胞的细胞增殖方面起重要的作用，此外，IL-2还可调节γ干扰素、主要组织相容性抗原的表达，刺激活化的B细胞的增殖和分化，提高自然杀伤细胞的活性和抑制粒细胞/巨噬细胞的的增殖。IL-2还可诱导少胶突细胞的增殖和分化。

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IL-2的浓度。小鼠IL-2捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的小鼠IL-2会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IL-2抗体后，抗小鼠IL-2抗体与小鼠IL-2接合，形成夹心的免

?

咽拭子DNA快速提取试剂盒使用说明书?

预期用途?

本试剂盒可用于提取咽拭子样本中人上皮细胞、细菌和真菌的DNA。本试剂盒提供的裂解液能快速有效裂解细胞，裂解产物能够直接用于PCR扩增，并且灵敏度高，特异性强，省去了繁琐的核酸提取与纯化步骤，实现快速PCR检测。对于病原微生物检测，流行病学调查、菌群调查及其它一些以口腔微生物为样本的核酸检测都非常适用。?

?

组成成分?

咽拭子DNA快速提取试剂盒?

货号?MKNJGNSWDL007?

规格?25?tests?FastLyse?L1?

5?ml?

?

储存条件?

‐20?C储存。?

?

样本要求?

用专用采样拭子，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将拭子放采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥。?

*以上标本可立即用于测试，也可放置在‐20℃条件下长期保存。?

?

操作步骤?

1. 待检拭子样本直接置于200?μl?FastLyse?L1中，充分搅拌洗脱拭子上的样本，在管壁挤压数次后弃拭子；?

仅供试用?

2. 吹打混匀，95?℃孵育5?min；?

3. 孵育后的样本12,?000?rpm离心2~3?min，上清可直接用于PCR扩增，上清如不立即使用，需置于‐20℃长期保存。?

*推荐使用咽拭