抗氧化酶活性测定方法分光光度计

分光光度计考试题

答卷人： 评分： 一、判断题（每题一分）

1. 在一定的光强照射下，光电流与射入的光量近似成正比。( )

2. 在分光光度计中，用光电管代替硒光电池可以提高测量的准确度。( )

3. 单光束紫外-可见分光光度计是根据物质的分子对紫外、可见区辐射(光)产生的吸收光谱和Lambert-Beer定律测量物质的性质和含量的分析仪器。 ( ) 4. 单光束紫外-可见分光光度计的检定周期一般为半年。 ( ) 5. 单光束紫外-可见分光光度计的仪器类别分为A类和B类。（ ）

6. 检定紫外-可见分光光度计所使用的光谱中性滤光片的标称值为10%、20%、30%(或40%)。（ ） 7. 仪器无需预热就能检定。（ ）

8. 单光束紫外-可见分光光度计检定规程规定，仪器透射比重复性应不大于相应投射比准确度绝对值的2倍。（ ）

9. 适用于可见光区的光源，常用的有钨灯和普通灯。 ( )

10．杂散光的存在，会使测量结果吸光度值增加，透射比值减小。 ( )

叶绿体的提取

一、试剂配置

1、PBS提取液：每L水依次加入MES(195.2×0.05=9.76g)、山梨糖醇(0.33×182.2=60.126g)、NaCl（0.010×58.5=0.585g）、MgCl（0.002×95=0.19g）、EDTA（292.25×0.002=0.5845g）、KH2PO（0.0005=0.1g）；4200×使用时加入ASA-Na（198.1×0.002=0.3962g）; 2、悬浮液：将PBS提取液中的MES换为238.3×0.05=11.915g的HEPES（238.3×0.05=11.915g）； 3、80%Percol：80ml原液+20ml水；40%Percol：40ml原液+60ml水；

实际配制：

PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),

悬浮液100ml（3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml）;

80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml.（3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml）

二、提取步骤

1、10g鲜样加20ml提取PBS（50mM MES PH6.1，含0.33M山梨糖醇，10

分光光度计的使用方法

1、使用方法

1.接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热10分钟。

2.将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时，需选用较高档）

3.根据所需波长转动波长选择钮。

4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。

5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向t=0处。

6.盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的t=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。

7.比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。

2、注意事项

①空白溶液与供试品溶液必须澄清，不得有浑浊。如有浑浊，应预先过滤，并弃去初滤液。 ②在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸收度最大的波长作为测定波长。 ③一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。

④由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。

⑤在测定时或

分光光度计的使用方法

1、使用方法

1.接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热10分钟。

2.将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时，需选用较高档）

3.根据所需波长转动波长选择钮。

4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。

5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向t=0处。

6.盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的t=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。

7.比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。

2、注意事项

①空白溶液与供试品溶液必须澄清，不得有浑浊。如有浑浊，应预先过滤，并弃去初滤液。 ②在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸收度最大的波长作为测定波长。 ③一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。

④由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。

⑤在测定时或

1. 2. 3.

4.

建议: 在每次测量完毕后，用蒸馏水清洁样品平台，这样可以保证下一次测量的准确性。 每次测量的样品量建议不少于2微升

Nanodrop分光光度计操作说明

双击电脑屏幕上的Nanodrop图标,启动软件.

选择所需的测量模式,屏幕上会弹出初始化仪器的提示.往仪器的加样孔中加入2微升的蒸馏水,合上上盖使形成液柱,然后点击确定以开始初始化,可以听见电磁阀开合的声音.

五六秒后屏幕上的提示信息消失,表示初始化完成.用擦镜纸将蒸馏水擦干净,加入2-3微升的Buffer,合上上盖并点击Blank.

Blank完成后,用擦镜纸将Buffer擦干净即可以开始上样,点击Measure开始测量.

图一 图二

图三 图四

5. 测量完成后,点击Show Report查看结果,选择Save进行保存. 6. 保存的数据对应地保存在C:\\Nanodrop Data文件夹.

注: 具体的实验方法如BCA,Bradford等以及标准曲线的建立请参阅生物学资料和说明书

名词介

.

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法

一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）

1、试剂的配制

（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：

A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；

B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。

分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。加入10gPVP（聚乙烯吡咯烷酮）

参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。

（2）130mmol/L甲硫氨酸溶液：取1.399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。网上说定容到100ML我也不懂。拜托

（3）100μmol/L EDTA-Na2溶液：取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml；

（4）100μM核黄素溶液：取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100ml，避光保存，随用随配

一、 原子荧光分光光度计 技术参数 1、工作条件要求 1.1电源: 220V，50Hz 1.2温度: 15～35℃ 1.3相对湿度: 10-75% 2、技术能力要求

2.1用途：用于食品卫生检验、环境样品检验、城市给排水检测、农产品检验、地质冶金检验、化妆品检验、土壤肥料饲料检验等样品中As、Sb、Bi、Hg、Se、Te、Sn、Ge、Pb、Zn、Cd元素的痕量分析。 2.2分析方法：非色散光学系统,进行两道元素同时测量

*2.2.1氢化物发生进样方式：双注射泵联合进样，蠕动泵主动排废

2.2.2检测能力：适用于As、Hg、Se、Pb、Ge、Sn、Te、Bi、Sb、Cd、Zn等十一种元素的痕量测定

2.2.3检测限(D.L.)：As、Pb、Se、Bi、Sn、Sb、Te、Hg≤0.01μg/L； Hg（冷原子测汞）、Cd≤0.001μg/L； Ge≤0.05μg/L;Zn≤1.0μg/L *2.2.4相对标准偏差（RSD)：≤0.8% 2.2.5线性范围：≥三个数量级

*2.3光学光源系统：双光束、实时监控，脉冲恒流或集束脉冲供电，无色散光学系统，自识空心阴极灯

2.4气路设计（气路控制模块）： 2.4.1控制方式：质量流量控制器（MFC）

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法

一、 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法） 1、试剂的配制

（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：

A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g； B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。 分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。加入10gPVP（聚乙烯吡咯烷酮）

参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。

（2）130mmol/L甲硫氨酸溶液：取1.399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。网上说定容到100ML我也不懂。拜托

（3）100μmol/L EDTA-Na2溶液：取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml； （4）100μM核黄素溶液：取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100m

1.吸光度测量步骤：

（1） 按动“功能”键，切换到透过率测量模式。 （2） 调整测试波长。

（3） 置入遮光体，按下“0%T”键调零。 （4） 按动“功能”键，切换到吸光度测量模式。

（5） 置入参比样品，按下“100%T”键调百。此时仪器显示“.000” （6） 置入测试样品，读取测试数据。

（7） 测量值超过1.999时，显示“1–––”,即超出显示范围。 （8） 测量值低于-1.999时，显示“1–––”,即超出显示范围。

2.调零（0%T）步骤：

将遮光体置入样品架，并拉动样品架拉杆使其进入光路。然后按下仪器的“0%T”按钮，便可完成调零。 *注意事项：

a. 调零时光路内必须置入挡零块，否则无法正常完成调零，显示“E1”。 b. 调零时不要打开样品室盖。

c. 调零在透过率模式下显示“00.0”，在吸光度模式下显示“1–––”,即超出显示范围。

3.调百（100%T）步骤：

将空白样品置入样品架，并拉动样品架拉杆使其进入光路。然后按下仪器上的“100%T”，此时屏幕显示“BL”便可以完成调百。 *注意事项：

a. 调百时不要打开样品室盖。

b. 调百时不能把挡零块置入光路，否则无法调百，显示“E2”。

c. 调100%在

实训实验任务名：

课程分析仪器结构及维护

情境三紫外-可见分光光度计

课时：4地点：实C403

目录

介绍 (2)

目的 (2)

预习参考资料 (2)

课1.

分光光度计原理 (5)

分光光度计结构 (5)

课2.

分光光度计检定(测试)的主要项目对分析结果的影响 (5)

课3.

与分光光度计正确使用和维护有关的几个注意事项 (2)

课4.

分光光度计操作中容易出现的几个典型故障及其排除方法 (7)

课2.

练习1-1 (8)

介绍

在完成这一个单元的学习之后，学员将能理解紫外可见分光光度计的结构及常见故障排除。同时具备必要的维护和更换相应部件的技能

目的

1.了解紫外可见分光光度计的理论和操作

2.了解一个典型的分光光度计的结构和常见故障排除

3.掌握成功维修常见故障的技术

技能要求

1.熟悉紫外-可见分光光度计的基本结构及各主要部件的作用；

2．掌握紫外-可见分光光度计一般操作程序和具体操作要求；

3．掌握紫外-可见分光光度计的安装要求和维护保养知识；

讲师的任务:

1.描述721分光光度计结构

2.描述721分光光度计常见故障

预习参考资料

课1.理论和操作

分光光度计的基本工作原理是基于物质对光

(对光的波长)的吸收具有选择性，不同的物质都有各

自的吸收光带，所以，当光色散后的光谱通过某一

溶液时，其中某些