酶标仪测蛋白浓度

蛋白浓度测定

蛋白质的定量分析是生物化学和其它生命学科最常涉及的分析内容，是临床上诊断疾病及检查康复情况的重要指标，也是许多生物制品，药物、食品质量检测的重要指标。在生化实验中，对样品中的蛋白质进行准确可靠的定量分析，则是经常进行的一项非常重要的工作。

蛋白质是一种十分重要的生物大分子：它的种类很多，结构不均一，分子量又相差很大，功能各异，这样就给建立一个理想而又通用的蛋白质定量分析的方法代来了许多具体的困难。目前测定蛋白质含量的方法有很多种，下面列出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋白质测定方法： 物理性质：紫外分光光度法

化学性质：凯氏定氮法、双缩脲法、Lowry 法，BCA法，胶体金法 染色性质：考马氏亮蓝染色法、银染法 其他性质：荧光法

蛋白质测定的方法很多，但每种方法都有其特点和局限性，因而需要在了解各种方法的基础上根据不同情况选用恰当的方法，以满足不同的要求。例如凯氏定氮法结果最精确，但操作复杂，用于大批量样品的测试则不太合格；双缩脲法操作简单，线性关系好，但灵敏度差，样品需要量大，测量范围窄，因此在科研上的应用受到限制；而酚试剂法弥补了它的缺点，因而在科研中被广泛采用，但是它的干扰因素多；考马氏亮兰染色法因其灵敏而又

分光光度法介绍

分光光度法是利用溶液中特定溶质的光吸收测定其浓度的方法，其基本原理是根据Lambert和Beer定律。 一 Lambert定律

当一束平行单色光垂直照射于一均匀物质溶液时，溶液将吸收一部分光能，使光的强度减弱。若溶液的浓度不变，则在溶液中的光程越长，光线强度的减弱也越显著。 设：入射光强度为I0，透射光强度为I，L代表光在溶液中的光程。 I0

lg =K1L I

K1是常数，受光线波长，溶液性质，溶液浓度影响。 二 Beer定律

当一束光通过一溶液时，光能被溶液介质吸收一部分，若光程不变，则溶液的浓度越大，光吸收越强，透射光强度的减弱也越显著，光线减弱的比例与溶液浓度呈正比。 I0

lg =K2C I

K2为吸收系数，是常数。溶液对光吸收的强弱与溶液浓度C成正比。 三 Lambert-Beer定律 将以上两个定律合并： Io

lg =KCL I

IoI

令A=lg T= 则A=KCL=-lgT

IIoT为透光度，A为吸光度，K为消光系数

四 待测样品浓度的计算 A标=KC标L A样=KC样L 由于是同一物质及相同的光程，则：

A样/A标=KC样L/KC标L=C样/C标 即：C样=（A样/A标）*

浅谈多功能酶标仪选择的要素 近年来，随着多功能酶标仪在国内各高校实验室逐渐推广开来，多功能酶标仪品牌和型号也逐渐多了起来，乱花渐欲迷人眼。除了三大传统优势品牌PE、MD和TECAN，还出现了众多后来者插足此市场，如收购了芬兰雷勃的Thermo、从发光起家的Berthold、针对药筛领域的BMG以及新兴的BioTek等品牌。各品牌都有各自的一个甚至多个系列产品线，特性各不相同，选购时各种技术参数、技术指标令人眼花缭乱。

本文尝试从用户实际使用的角度，探讨应该如何看待花样繁多的参数特性，希望能帮助大家找到真正合适自己的多功能酶标仪。

1.滤片Vs光栅

多功能酶标仪的分类方法众多，但最简单的莫过于用他们的滤光方式来作分界线。 一般来说，酶标仪可以分为滤光片型和光栅型两大类。当然也有一些型号，例如Synergy4和EnVision等在一台机器里面同时装上了滤光片和光栅。但是滤片和光栅并不能同时完成同一个检测，还是想用光栅的时候用光栅，该用滤片的时候用滤片；还有一些实验非用其中一个不可，另一模块实现不了的。所以这类仪器本质上还只是把滤片和光栅放在了一起，并没有使两者糅合而产生新的技术突破。

总体来说，滤片技术由于发展已久，配合二向色镜

酶标仪是什么？

用来做酶联免疫反应的专用仪器。 本质上是一台光电比色计。

按照用途可以分为光吸收酶标仪和多功能酶标仪。

光吸收酶标仪，只有光吸收模块，所以只能做光吸收实验，核酸蛋白定量，酶学分析，ELISA，细胞分析。

主要型号：F50，SUNRISE。区别，通道数不同。F50为8通道，SUNRISE为12通道，包括一个参比通道。光源不同，F50为LED冷光源，SUNRISE为卤素灯热光源。波长范围不同，F50为400～750，SUNRISE为340～750，并且，可配温控模块。

另外，SUNRISE12个通道，检测更快。有1个参比通道，可以开机可以自动校准波长。可配温控模块，温控还是比较好的。不用配电脑，集成有触控面板，内置Windows ce的系统。

F50体积小巧，检测准确，免费升级，免维护，不用换灯，卤素灯最多2年就需要更换，不用预热，使用方便。

两款都是经典的光吸收酶标仪。相当的皮实，耐用，而且也够准确。

多功能酶标仪

除了光吸收模块，还有温控，气体模块，进样器，荧光模块，发光模块，震荡模块。

所以，波长范围200~1000全波长。还会看到一个参数：OD范围：0～4。 在酶标仪上，测量光吸收量用OD表示样品的吸光度。典型应用，核

碧云天 BCA蛋白浓度测定试剂盒

BCA蛋白浓度测定试剂盒 产品编号 产品名称 包装

蛋白浓度测定试剂盒次

产品简介：

¾

¾

¾

¾ BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而 成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。 灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。 在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的

Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。不适用BCA法时建议试用碧云天生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(P0006)。

BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质的详细的兼容性，请参见碧云天如下网页:

/Compatibility Chart For B

山西培森生物制品有限公司

酶标仪验证方案

（安装确认IQ、运行确认OQ、性能确认PQ）

设备名称：酶标仪 设备型号：MB-580 设备编号：XXXX

文件编码：

文件名称：酶标仪验证方案 目 录 1. 概述 2. 验证目的 3. 职责 4. 验证实施 5. 验证结果及其审批 6. 再验证 1、 设备概述： 用于质量控制部蛋白浓度检测。

2、 验证目的： 确认MB-580酶标仪酶标仪能正常运行，各项性能指标符合设计及检验要求。

3、职责 3.1验证小组 3.1.1负责验证方案的批准。

3.1.2负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。

3.1.3负责验证数据及结果的审核。 3.1.4负责验证报告的审批。 3.1.5负责发放验证证书。 3.1.6负责验证周期的确认。

欢迎共阅

3.2质量保证部

3.2.1负责审阅验证方案和报告。

3.2.2验证的结果评价。 3.2.3验证文件、供应商的确认。

3.2.4现场监督保证整个验证过程按照验证计划进行。

3.2.5负责验证文件管理。

3.3设备部

3.3.1负责验证方案制订。 3.3.2 在公用系统、空调设备维修和仪器仪表校正等各项工作中提供及时可靠的支持和服务。 3.4质量控制部

使用image j 软件对SDS-PAGE进行灰度分析,定量蛋白质的浓度。

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大豆、蛋白、浓缩蛋白、分离蛋白、注射蛋白、乳品蛋白、肽、乳清蛋白

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20 0 5年 8月

中国粮油学报J u a fteChn s ee l a d Oi scain o m lo iee C ras n l Aso it h s o

Vo . 0, 1 2 No. 4 Aug 2 05 .0

第 2卷第 4 0期

醇浓度对醇法大豆浓缩蛋白浸提液中溶出蛋白的影响石彦国杨泽慧孙冰玉 (哈尔滨商业大学食品工程学院哈尔滨， 107 ) 506(中国检验认证集团山东有限公司青岛 2 60 ), 602摘要利用不同浓度乙醇对低变性脱脂大豆粕进行醇法浸提，制取大豆浓缩蛋白。对浸提液采用 S S D—

PG A E电泳法测定蛋白质分子量，并对蛋白质溶出率进行测定，索不同醇浓度对浸提液中蛋白溶出率及分探关键词大豆浓缩蛋白乙醇浸提液 S S—P G D A E电泳溶出率

子量的影响，醇法制取大豆浓缩蛋白浸提液再加工、收蛋白提供了一定的理论基础。为回

O前言 大豆浓缩蛋白 ( P )大豆蛋白加工业中的一 SC是

加工及回收一定分子量蛋白质具有十分重要意义。

种新兴产品，广泛应用于婴幼儿食品、焙烤食品、 肉制品、乳制品

蛋白质含量测定方法的比较及肽含量的测定

（一） 蛋白质测定方法的比较（原理、优缺点）

蛋白质含量测定法，目前包括定氮法、双缩脲法、福林酚法（Lowry法）和紫外吸收法、考马斯亮蓝法。其中考马斯亮蓝和福林酚法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10~20倍，比双缩脲法灵敏100倍以上。定氮法较复杂，但准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。在选择方法时应该考虑：（1）实验测定要求的灵敏度和精确度；（2）蛋白质的性质；（3）溶液中存在的干扰物质；（4）测定花费时间。蛋白质含量测定法，目前包括定氮法、双缩脲法、福林酚法（Lowry法）和紫外吸收法、考马斯亮蓝法。其中考马斯亮蓝和福林酚法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10~20倍，比双缩脲法灵敏100倍以上。定氮法较复杂，但准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。在选择方法时应该考虑：（1）实验测定要求的灵敏度和精确度；（2）蛋白质的性质；（3）溶液中存在的干扰物质；（4）测定花费时间。 1 微量凯氏定氮法（GB 5009.5-2010）

1.1原理 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根

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酶标仪验证方案

（安装确认IQ、运行确认OQ、性能确认PQ）

设备名称：酶标仪 设备型号：MB-580 设备编号：XXXX

文件编码：

文件名称：酶标仪验证方案 目 录 1. 概述 2. 验证目的 3. 职责 4. 验证实施 5. 验证结果及其审批 6. 再验证 1、 设备概述： 用于质量控制部蛋白浓度检测。

2、 验证目的： 确认MB-580酶标仪酶标仪能正常运行，各项性能指标符合设计及检验要求。

3、职责 3.1验证小组 3.1.1负责验证方案的批准。

3.1.2负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。

3.1.3负责验证数据及结果的审核。 3.1.4负责验证报告的审批。 3.1.5负责发放验证证书。 3.1.6负责验证周期的确认。

欢迎共阅

3.2质量保证部

3.2.1负责审阅验证方案和报告。

3.2.2验证的结果评价。 3.2.3验证文件、供应商的确认。

3.2.4现场监督保证整个验证过程按照验证计划进行。

3.2.5负责验证文件管理。

3.3设备部

3.3.1负责验证方案制订。 3.3.2 在公用系统、空调设备维修和仪器仪表校正等各项工作中提供及时可靠的支持和服务。 3.4质量控制部