组织样本处理

组织样本处理

通常情况下，为了方便研究人员对样本的选择和使用，样本库除对原始样本进行分装保

存外，尚需对样本做进一步的提纯处理，以获得样本的衍生物，供研究者使用。这样既能控制样本的使用量，减少对样本不必要的浪费，又能保证其质量不受影响。可从快速冰冻保存的组织样本中直接提取DNA、RNA和蛋白质；或将OCT包埋组织样本用于制作冰冻组织切片；将福尔马林固定石蜡包埋组织样本用于制作石蜡切片；也可取特定的样本进行细胞培养成为细胞系。

根据处理提纯的样本不同，采取不同的储存方式。如DNA、RNA和蛋白样本可以放在

冻存管中超低温保存，组织切片存放在切片盒中室温下保存，细胞系在液氮中保存。 1. DNA提取

从快速冰冻保存的组织样本、OCT包埋组织的样本、福尔马林固定石蜡包埋组织样本或石蜡切片中均可提取DNA 样本，过程稍有区别，但多采用酚-氯仿法从新鲜或冰冻组织，以及细胞等样本中提取DNA，样本的处理按照标准操作程序进行。用紫外分光光度计法测定DNA的浓度，琼脂糖凝胶电泳检测法检测DNA的纯度。在DNA 保存区储存DNA样本，DNA样本应保存在-80℃冰箱中，并做好标记。 2. RNA提取

RNA很容易被污染和降解。最好是从经过RNA酶抑制剂处理的组织中提取RNA。而且，要严格按照标准操作程序进行。提取所使用的所有器材和试剂应经过高温处理。在实验过程中必须戴手套而且要勤换，避免造成污染。RNA提取完后应进行纯度和浓度的检测，测试其是否均一、是否有效去除了DNA、蛋白质和其他杂质，用紫外分光光度计法测定A260/A280不低于1.7~2的范围。用紫外分光光度计法测定RNA的浓度，RNA提取完后应检测提取RNA的完整性，通过变性琼脂糖电泳进行鉴定，28S（约4.8kb）和18S（约1.9kb）rRNA经EB染色后，两条电泳带的显色强度近似比为2：1。总RNA中mRNA的分离应按照标准操作程序采用纤维素亲和层析法。 3. 蛋白质的提取

蛋白质提取多选用新鲜的组织，如冰冻组织需要是快速冰冻且保存时间不长的样本。根据蛋白质的溶解度、等电点、分子大小、不同pH环境中的带电性质和拥有的特异性配体，选择最合适的方法分离、纯化蛋白质。使用各种方法应根据已制定的标准操作规程进行。

目前，市场上有蛋白抽提试剂盒用于从各种实体组织或细胞中快速提取总蛋白。用裂解

-结合缓冲液匀浆裂解实体组织，或用裂解结合缓冲液振荡重悬培养细胞，然后加入抽提试剂去除非蛋白成分，离心分离即可得到总蛋白。

蛋白质保存要保证蛋白质的稳定性，选取合适的方法，应避光，避免氧化。需要长时间保存的蛋白质应进行真空干燥或冰冻真空干燥，液态形式保存蛋白质能保证其生理活性和结构，但不适合长期保存，可适当加入防腐剂。 4. 制作冰冻（OCT）组织切片

（1） 冰冻切片机只能由经过专业训练的技术人员使用。 （2） 根据需要确定切片厚度，通常切片厚度为4μm。

（3） 用于核酸提取的切片可以再10~20μm，应保证切片厚度的持续稳定。 （4） 切完的组织切片应快速装片，重新冰冻和低温保存，运输过程需要干冰。 （5） 所有的切片应粘贴样本的条形码标签，便于记录和追踪。

（6） 需对切片进行质量评估，保证有完整的组织形态和标志物满足研究的需要。 （7） OCT冷冻组织切片用苏木素-伊红（HE）染色。 5. 制作石蜡组织切片 6. 制备组织芯片

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