实验一

实验一、鸡的免疫接种与采血技术

一、实验目的

1、学会保存、运送和用前检查兽医生物制品的方法； 2、掌握兽医生物制品的种类及免疫接种的方法； 3、熟悉鸡的采血方法。

二、实验准备

1、器材

75%酒精、5%碘酒、来苏儿、新洁尔灭；脱脂棉、纱布、消毒锅、镊子、剪刀、毛剪、金属注射器、玻璃注射器、连续注射器、兽用皮下注射针头、肌肉注射针头、乳头滴管、体温计、气雾免疫发生器、带盖搪瓷盘、桶、脸盆、肥皂、毛巾、工作服、帽、胶靴、登记册或卡等

2、疫苗及稀释液

（1）鸡新城疫疫苗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ等；（2 ）鸡痘疫苗； （3 ）马立克氏疫苗； （4 ）禽霍乱菌苗； （5 ）传染性支气管炎疫苗； （ 6 ）传染性法氏囊病疫苗； （7 ）传染性喉气管炎疫苗； （8 ）减蛋综合征疫苗 3、待接种的动物

禽（鸡、鸭等）、猪、牛、羊或其他动物

三、实验原理

免疫接种（immunization ）是用人工方法将免疫原或免疫效应物质输入到机体内，使机体通过人工自动免疫或人工被动免疫的方法获得防治某种传染病的能力。用于免疫接种的免疫原（即特异性抗原）、免疫效应物质（即特异性抗体）等皆属生物制品。通过接种疫苗，使家

禽免疫系统产生主动免疫，以防制某种特定传染性疾病，保障生产效益。

鸡的主要免疫器官

中枢免疫器官：包括骨髓、胸腺和腔上囊（禽类）。

外周免疫器官：有淋巴结、脾及与黏膜有关的淋巴组织和皮下组织等。

四、实验内容及方法

（一）预防接种前的准备

1．动物免疫接种计划的制订

2．免疫接种前，必须对所使用的生物制剂进行仔细检查。有下列情况之一者不得使用： ①没有瓶签或瓶签模糊不清，没有经过合格检查者；

②过期失效者；

③生物制品的质量与说明书不符的，如色泽、沉淀、制品内有异物、发霉和有异味的； ④瓶塞松动或瓶壁破裂者； ⑤没有按规定方法保存者。

3．免疫接种前，对预接种的动物进行临诊观察，必要时进行体温检查。 4．器械的消毒

5．免疫接种前，对饲养员及相关人员进行免疫接种知识的教育，明确免疫接种的重要性。

（二）疫苗的种类

1、人工主动免疫制剂

（1）灭活疫苗：此种疫苗失去繁殖能力，但保留免疫原性。

（2 ）减毒活疫苗：用人工定向变异方法，或从自然界筛选出毒力减弱或基本无毒的活微生物制成活疫苗或减毒活疫苗。

（3 ）类毒素：细胞外毒素经甲醛处理后失去毒性，仍保留免疫原性，为类毒素。 （4 ）亚单位疫苗（组分疫苗）：除去病原体中无保护免疫作用甚至有害的成分，保留其有效的免疫原成分后，制成的疫苗。

（5 ）基因工程疫苗：是用基因工程方法分离出病原的保护性抗原基因，将其转入原核或真核系统使表达出该病原的保护性抗原，制成疫苗，或者将病原的毒力相关基因删除掉，使成为不带毒力相关基因的基因缺失苗。

（6 ）DNA疫苗：DNA疫苗是将病原或肿瘤整个或部分蛋白抗原的基因克隆在真核表达载体上，直接注入体内，使其抗原在体内表达后激发机体产生免疫反应。

（7 ）合成肽疫苗：仿特异性抗原的某些肽链或蛋白人工合成的抗原，现今还没有实用于人群的疫苗。

2、人工被动免疫制剂

（1）抗毒素 （2 ）抗菌血清和抗病毒血清 （3 ）丙种球蛋白 （4 ）特异性免疫球蛋白 （5 ）免疫核糖核酸 （6 ）转移因子 （7 ）胸腺素 （8 ）干扰素

理想的疫苗：

1、有免疫原性，更具有保护原性 2、保护效果持久 3、免疫应激小

4、易保存，稳定性好 （三）免疫接种的方法

1．皮下注射法 2 ．皮内注射法 3 ．肌肉注射法 4 ．饮水免疫法 5 ．刺种法 6 ．滴鼻、点眼法 7 ．气雾免疫法

1．皮下注射法

（1）注射部位：对马、牛等大动物皮下注射时，一律采用颈侧部位，猪在耳根后方，家禽在颈部或大腿内侧，羊在股内侧、肘后及耳根处，兔在耳后或股内侧。

（2）注射方法：左手拇指与食指捏起皮肤成皱褶，右手持注射针管在皱褶底部稍倾斜快速刺入皮肤与肌肉间，缓缓推药。注射完毕，将针拔出，立即以药棉揉擦，使药液散开。 2 ．皮内注射法

（1）羊痘弱毒疫苗采用皮内注射，注射部位多在尾根或尾下。

（2）注射方法：常规消毒，用左手指捏起皮肤成皱褶，右手持针从皱褶顶部与之呈20～30°角，向下刺入皮肤内，缓慢注入疫苗，也可用左手的拇指与食指捏起皮肤呈皱褶进针。 3 ．肌肉注射法

（1）注射部位：马、牛、猪、羊的肌肉注射一律采用臀部或颈部，禽多在胸部肌肉注射。 （2）注射方法：左手固定注射部位，右手拿注射器，针头垂直刺入肌肉内，然后左手固定注射器，右手将针芯回抽一下，如无回血，将药液慢慢注入。若发现有回血，应变更位置。如动物不安或皮厚不易剌入，可将注射针头取下，右手拇指、食指和中指紧持针尾，对准注射部位迅速刺入肌肉，然后针尾与注射器连接可靠后，注入疫苗。

注意：注射时要将针头留有1/4在皮肤外面，以防折针后不易拔出

4 、饮水免疫法

是将可供口服的疫苗混于水中，动物通过饮水而获得免疫，饮水免疫时，应按动物头数和每头动物平均饮水量，准确计算需用稀释后的疫苗剂量，以保证每一个体都能饮到一定量的疫苗。免疫前应限制饮水，夏季一般2h，冬季一般为4h，保证疫苗稀释后在较短时间内饮完。混有疫苗的饮水要注意温度，一般以不超过室温为宜。

本法具有省时省力的优点，适用于大群动物的免疫。由于动物的饮水量有多有少，饮水免疫时应分两次完成，即连续两天，每天饮1次，这样可缩小个体间饮苗量的差距。 优点：（1）达到快速免疫；

（2）适用于任何年龄的鸡； （3）操作简便，

缺点：免疫持久性差，且个体差异大。每只鸡得到的疫苗量不平均。 5 ．刺种法

在翅下无毛处避开血管，用刺种针或蘸笔尖蘸取疫苗刺入皮下，为可靠起见，最好刺两下。 6 ．滴鼻、点眼法

用乳头管吸取疫苗 （约0.03～0.04ml）滴于鼻孔或眼内、1～2滴 （小鸡1滴，大鸡2滴）。 7 ．气雾免疫法

此法是用压缩空气通过气雾发生器将稀释疫苗喷射出 去，使疫苗形成直径1×10 ～1×10 m的雾化粒子，均匀地浮游在空气之中，通过呼吸道吸入肺内，以达到免疫目的。 （1）室内气雾免疫法 （2）野外气雾免疫法 最常用的疫苗是：ND和IB

（四）生物药品的保存和运送方法 1．生物制品的保存

各种生物制品应严格按照说明书的要求进行保存。不同的生物制品有不同的存放要求。一 般存放在低温、阴暗及干燥的场所。

组织灭活苗和油苗：一般4-7度保存冻干苗：一般-20度保存 2 ．生物制品的运送

要求包装完善，防止碰坏瓶子和散播活的弱毒病原微生物。运送途中避免日光直射和高温，并尽快送到保存地点或预防接种场所。弱毒苗应在低温条件下运送，大量运送应用冷藏车，少量运送可装在装有冰块的广口瓶内，以免降低或丧失疫苗性能。

（五）鸡的常用采血方法

1、剪破鸡冠可采血数滴供作血涂片用。

2、静脉采血：将鸡固定，伸展翅膀，在翅膀内侧选一粗大静脉，小心拔去羽毛，用碘酒和酒精棉球消毒，再用左手食指、拇指压迫静脉心脏端使该血管怒张，针头由翼根部向翅膀方向沿静脉平行刺入血管。采血完毕，用碘酒或酒精棉球压迫针刺处止血。一般可采血2～10mL。

3、心脏采血：将鸡侧位固定，右侧在下，头向左侧固定。找出从胸骨走向肩胛部的皮下大静脉，心脏约在该静脉分支下侧；或由肱骨头、股骨头、胸骨前端三点所形成三角形中心稍偏前方的部位。用酒精棉球消毒后在选定部位垂直进针，如刺入心脏可感到心脏跳动，稍回抽针栓可见回血，否则应将针头稍拔出，再更换一个角度刺入，直至抽出血液。

五、注意事项

1．实验前后均应洗手消毒，实验中不应吸烟和吃食物。

2．接种时严格执行消毒及无菌操作。

3．吸取疫苗时，先除去封口上的火漆或石蜡，用酒精棉球消毒瓶塞。瓶塞上固定一个消毒的针头专供吸取药液，吸液后不拔出，用酒精棉包好，以便再次吸取。给动物注射用过的针头不能吸液，以免污染疫苗。

4．疫苗使用前，必须充分振荡，使其均匀混合后才能使用。免疫血清则不应振荡，沉淀不应吸取，并随吸随注射。需经稀释后才能使用的疫苗，应按说明书的要求进行稀释。已经打开瓶塞或稀释过的疫苗，必须当天用完，未用完的处理后弃去。

5．针筒排气溢出的药液，应吸集于酒精棉球上，并将其收集于专用的瓶内。用过的酒精棉球、碘酊棉球和吸入注射器内未用完的药液都放入专用瓶内，集中烧毁。

六、思考题

1、试述免疫接种在兽医防治上的意义。

2、常用免疫接种方法有几种，叙述各法的优缺点。

3、针对某鸡场的情况，制订一份免疫接种计划。

实验二

病(死)鸡的剖检及实验室检查

一、实验目的

1、正确地掌握病（死）鸡尸体剖检方法。

2、掌握病料取材、抹片的制备、染色及镜检。 3、掌握常见病原菌的分离培养技术。

二、实验原理

随着养禽业的发展，禽病的发生频率和禽病的种类越来越多，近切须要提高禽病的诊断水平，尸体剖检及实验室检查是诊断禽病，指导治疗的非常重要的手段之一。 1、它可以验证临床诊断和治疗的正确性。 2、它可以预防疫病的爆发。 3、它可以指导学术研究和科研工作。

三、实验准备

1、病（死）鸡、解剖器械、消毒用具；

2、接种棒、酒精灯、打火机、显微镜、擦镜纸、镜油、吸水纸、玻片； 3、革兰氏染色试剂、染缸、搁架、洗瓶； 4、培养基等

四、实验方法

一、外部检查

主要检查羽毛、营养状况、鸡冠、皮肤、眼睛、鼻腔、口腔、嗉囊、泄殖腔、腿和关节等情况，顺序如下：

1、羽毛的检查：注意是否粗乱，有无脱落，泄殖腔周围羽毛有无粪便污染等。 2、天然孔的检查：注意口、鼻、眼有无分泌物及数量，视检泄殖腔内黏膜变化及周围羽毛有无粪便污染。 3、皮肤的检查

（1）检查鸡冠、肉髯有无痘疮等变化； （2）观察腹壁及嗉囊表面皮肤颜色； 4、骨骼或肌肉的检查

（1）检查关节的粗细，有无肿胀，足或足底有无出血等； （2）用手触摸胸骨两侧的肌肉丰满度及龙骨，有无变形等；

二、内部检查：如果是活鸡则应扑杀病鸡（采用颅颈部脱位或放血法） 1、体腔剖开：

（1）羽毛浸湿消毒（1分）：由前向后橹干，置解剖盘上。

（2）切开大腿与躯干连接的皮肤，髋关节外展脱位；翅膀平展；背卧位于解剖盘上。 （3）拨检颈部、胸部、腹部的羽毛观察颜色

（4 ）从喙角沿颈下体中线到泄殖腔孔前作一纵切线，向两侧剥开皮肤，观察色泽及丰满度、有无充血或出血等

（5）在后腹部，将腹壁横行切开，两侧分别向前，剪断肋骨、乌喙骨及锁骨，然后握住龙骨突的后缘用力向上前方翻压，并切断周围的软组织，去掉胸骨，暴露体腔。 2、脏器视检：视检胸、腹气囊（共9个）、观察各脏器的颜色，浆膜的状况，体腔有无积液、粘连等。

3、内脏器官摘取：先无菌采取小块肝脏及脾脏组织到无菌平皿中为制作组织涂片备用。摘取方法如下：

（1）体腔器官的采出：先将心脏连同心包一起剪

离后取出,再采出肝脏,将消化道（腺胃、肌胃、肠、胰腺）一同采出,将生殖器官（睾丸、卵巢和输卵管）分别依次采出,用外科刀柄剥离肺脏和肾脏，尽可能不要破碎。

（2）颈部器官采出：用剪刀剪开下颌骨、食道、嗉囊，观察变化。再剪开喉头、气管，检查有无分泌物、充血、出血等，同时视检胸腺颜色、性状等。

（3）脑的采出：先用刀剥离头部皮肤，再剪除颅项骨，露出大脑和小脑，轻轻剥离，大小脑一起采出 （4 ）周围神经的检查：注意大腿内侧，剥离内收肌，找出坐骨神经，对比两侧神经的粗细。如患鸡马立克氏病时，会出现单侧神经肿大。

（5）关节的检查：剪开腿部主要关节，注意有无积液、脓液、沉积物等。

4、脏器检察

（1）检察心脏：检查心冠脂肪有无出血；剪开心包，注意有无积液、粘连，视检心外膜有无出血、渗出物等；剪开心房和心室，检察心内膜有无出血等。

（2）检察肝：注意观察其形态、大小、色泽、质地。表面有无坏死灶、坏死点、出血点、结节，以及切面的性状等。

（3）检察脾：注意观察其形态、大小、色泽、质地，表面及切面的性状等。 4、脏器检察

（4 ）检察肺：注意观察其形态、色泽和质地，有无结节，切开检查有无炎症、坏死灶等。 （5）检察肾：分为3叶，界线不明显，检查其大小、色泽、质地、表面性状等，如有尿酸盐沉着时，可见白色点，肾肿大。

（6）检察脑：注意有无充血、出血及性状。

（7）检察睾丸：注意其大小、表面及切面的状态。

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