HPLC法测定银杏叶提取物中总黄酮醇苷的含量

HPLC法测定银杏含量

第30卷　第2期2009年4月

首都师范大学学报(自然科学版)JournalofCapitalNormalUniversity

(NaturalScienceEdition)　No.2Apr.,2009

HPLC法测定银杏叶提取物中总黄酮醇苷的含量

余启荣　晏利芝　谭湘湘

1

2

2

(11北京创立科创医药技术开发有限公司,北京　100029;21首都师范大学分析测试中心,北京　100048)

摘要

目的::用HPLC酮醇苷进行含量测定研究.色谱柱采用DiamonsilC18(200),-0(52∶48)为流动相,检测波长为360nm;流速为110mL/:0(r=019998,n=5),山柰素在01117～01585(8,),010408～01204μg线性关系良好(r=019999,n

=5);槲皮素、(n=5)分别为99196%、99124%、100146%.结论:本方法操作简便,重

现性好,专属性强,.

关键词:银杏叶提取物,总黄酮苷,高效液相色谱法.

中图分类号:O65717

银杏叶提取物(EGB)为银杏科植物银杏(GinkgobilobaL1)的干燥叶经加工制成的提取物,银杏叶提取物中主要活性成分为黄酮类和萜类内酯.现代药理表明其具有拮抗血小板活化因子、抗脑缺血缺氧、降血脂、消除自由基,松弛支气管平滑肌、抗炎及增强神经系统活性等作用,对冠心病、高血压、瘀血阻络引起的胸痹、心痛、中风、半身不遂、舌强语蹇;老年性痴呆等与心脑血管循环有关的疾病有显著的

[2～4]

预防和治疗效果,因此具有较高的开发研究价

[3]

值.本研究参照中国药典方法,建立了HPLC法测定银杏叶提取物中总黄酮醇苷含量的方法.

[1]

1　实验部分

111　仪器和试药

Waters

717

plus

Autosampler;Waters

600

controller;WatersIn2LineDegasserAF;Waters2996photodiodeArrayDetecter;Empower数据工作站;KQ2500DB型数控超声波清洗器(40kHz,500W);电子天平(Sartorius).

)为市银杏叶提取物(EGB2Ⅰ、EGB2Ⅱ、EGB2Ⅲ

售药材提取物.

槲皮素对照品(批号:008129905),山柰酚对照

收稿日期:2008202228

品(批号:0086429901)和异鼠李素对照品(批号:086029601)均购自中国药品生物制品检定所.甲醇(DikmaPure,DimAUSA);甲醇、磷酸、盐酸均为分析纯;水为超纯水.112　色谱条件

色谱柱采用DiamonsilC18(200×416mm5μm),以甲醇-014%磷酸溶液(52∶48)为流动相;检测波长为360nm;流速110mL/min;进样量10μL;理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500.11

3　溶液的制备11311　对照品溶液的制备

分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素对照品2190mg、1195mg、0168mg,加甲醇溶解定容在50mL量瓶中,摇匀,即得.11312　供试品溶液的制备

精密称取银杏叶提取物50mg,置100mL平底烧瓶中,加甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)混合溶液25mL,置水浴上加热回流60min,迅速冷却至室温,转移至50mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0145μm)滤过,取续滤液,即得.

2　结果和讨论

211　系统适应性试验

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HPLC法测定银杏含量

第2期余启荣等:HPLC法测定银杏叶提取物中总黄酮醇苷的含量

在上述色谱条件下,分别精密量取对照品溶液、供试品溶液,注入液相色谱仪,结果对照品3种黄酮苷元均能良好分离,银杏提取物中杂质与待测成分

亦能良好分离,理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500(色谱图见图1)

.

-　2-　3-异鼠李素

1　总黄酮醇苷对照品(A)和银杏叶提取物(B)的HPLC图谱

212　线性关系的考察

精密吸取上述对照品混合溶液3、6、9、12、15μL,注入液相色谱仪,进行HPLC测定,以对照品质

量为横坐标,峰面积为纵坐标作线性回归,回归方程及相关系数见表1.

表1　三种总黄酮醇苷的回归方程与线性范围

黄酮醇苷槲皮素山柰素异鼠李素

回归方程

相关系数

(r)

皮素、山柰素及异鼠李素峰面积RSD分别为0165%、0174%、0183%.215　重复性试验精密称取EGB2Ⅰ样品5份,平行制备5份供试品溶液,进行测定,计算得槲皮素、山柰素及异鼠李素的平均含量分别为5151%、3139%、0193%,RSD分别为0188%、0191%、1113%,结果表明,本方法重复性良好.216　回收率试验

线性范围μΠg

0.174～0.8700.117～0.585

Y=1972612182X-81261610.9998Y=2334046.90X-4930.690.9998

Y=1828170.96X-2001.510.99990.0408～0.204

213　稳定性试验

称取EGB2Ⅰ,按供试品溶液制备方法制备溶液后,分别在0,1,3,5,8,24h进行HPLC测定,计算得

槲皮素、山柰素及异鼠李素峰面积的RSD分别为0181%、0195%、1153%,结果表明供试品溶液在24h内稳定.214　精密度试验

取对照品溶液,连续进样6次,测定,计算得槲

采用加样回收试验,精密称取已知含量EGB2Ⅰ

样品5份,每份约25mg,精密称定,置于100mL量瓶中,加入对照品溶液(取槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素对照品7150mg、4175mg、1125mg,加甲醇溶解定容在25mL量瓶中)510mL,按供试品溶

L,注入液相色谱液制备方法制备后,精密吸取10μ

仪,测定,计算回收率及RSD(n=5),结果见表2.结果表明,槲皮素、山柰素及异鼠李素的平均回收率分别为99196%、99125%、100146%.

表2　样品的加标回收率试验

黄酮醇苷槲皮素山柰素

样品量

m0Πmg

加标量

mAΠmg

测定值

mF

Πmg

回收率

RΠ%

RSD

srΠ%

1.377,1.384,1.426,1.378,1.4030.847,0.852,0.877,0.848,0.863

1.5000.9500.250

2.876,2.862,2.940,2.878,2.9111.796,1.795,1.811,1.798,1.8010.482,0.484,0.492,0.482,0.491

99.91,98.50,100.92,99.97,100.4999.91,99.32,98.27,100.03,98.7199.84,100.32,100.64,99.92,101.56

0.910.760.69

异鼠柰素0.232,0.234,0.241,0.233,0.237

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HPLC法测定银杏含量

首都师范大学学报(自然科学版)2009年

217　提取物的含量测定

取EGB2Ⅰ、EGB2Ⅱ、EGB2Ⅲ三批样品,每批2份,每份约50mg,按供试品溶液的制备方法制备溶液后,进行HPLC测定,记录峰面积积分值,用标准曲线分别计算槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量,以下式换算成总黄酮醇苷的含量.

总黄酮醇苷含量=(槲皮素含量+山柰素含量+异鼠李素含量)×2151　　经计算EGB2Ⅰ、EGB2Ⅱ、EGB2Ⅲ三批样品中总黄酮醇苷含量分别为24193%、25111%、25129%.

法中,影响因素较多,本实验通过对反应方式、回流

时间、冷却时间等进行了考察,结果表明用甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)混合溶液,置水浴上加热回流60分钟,迅速冷却至室温,总黄酮醇苷提取的效率高.

2)流动相曾采用甲醇-014%磷酸溶液的比例为45∶55、52∶48、55∶45,当甲醇-014%磷酸溶液比例为45∶55时,3种黄酮苷元分离效果好,但是分析时间太长;比例为55∶45时,主峰与杂质峰未完全分离;比例为52∶48时分离效果好,杂质峰无干扰,且分析时间适中,故选用流动相比例为52∶48.通过稳定性及回收率试验,,重现性好,.献

3　讨　论

1)[1]　吴宗群,李广平,冷爱晶.银杏叶提取物的药理作用研究[J].中国药师,2006,9(12):1150-1152.[2]　李典鹏,方宏.高效液相色谱法测定银杏叶提取物中黄酮苷含量[J].广西植1996,16(3):292-294.[3]　中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].2005,281-282.

[4]　祝连彩,王伯初,刘火安,等.高效液相色谱法测定银杏叶提取物中黄酮含量[J].重庆大学学报(自然科学版),2006,

29(1):117-119.

HPLCDeterminationofTotalFlavonoidsinthe

GinkgoBilobaExtract

YuQirong　YanLizhi　TanXiangxiang

1

2

2

(1BeijingSupertrackMedicalTechnologyDevelopLtd.,Beijing　100029;2AnalysisandTestingCenter,CapitalNormalUniversity,Beijing　100048)

Abstract

Objective:ToestablishanHPLCmethodfordeterminationofflavonesintheGinkgoBilobaextract.Method:The

chromatographiccolumnwasDiamonsilC18(200×416mm,5μm),Themobilephaseconsistedof015%phosphatebufferΠmethanol(48∶52),theflowratewas110mLΠmin,UVdetectionwavelengthwas360nm.Results:Accordingtotheselectedchromatographicconditions,thelinearrangesofquercetin,kaempferideandisorhamnetinwere01174～01

870

μg,01117～01585μgand010408～01204μg,respectively.Theaveragerecoveriesofthesethreecompoundswere99196%,99124%and100146%,respectively.Conclusion:Themethodwassimple,accurate,specificandwouldbeusedforthequalitycontrolofquercetin,kaempferolandisorhamnetinintheGinkgoBilobaExtract.

Keywords:GinkgoBilobaExtract,Totalflavonoids,HPLC.

),汉族,男,甘肃通渭人,助理工程师,从事天然药物的分离及药物分析研究.作者简介　余启荣,(1979—

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本文来源：https://www.bwwdw.com/article/zi64.html