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玉林师范学院本科生毕业论文

酸奶保藏的微生物变化趋势

Microbiological changes in the yogurt preservation

院 系 专 业 学 生 班 级 姓 名 学 号

指导教师单位 指导教师姓名 指导教师职称

化学与生物系 生物技术 生技06班 彭盛刚 200606403129

化学与生物系

林谦 讲师(博士)

酸奶保藏的微生物变化趋势

生技06班 彭盛刚 指导教师 林谦

摘要

酸奶深受广大消费者的欢迎。但酸奶的保藏需要非常的小心,市场上的酸奶变质问题时有发生,就是对酸奶的保藏工作做得不到位引起的。本文通过对市场上销售的酸奶产品保藏过程中菌相分布进行研究,探讨酸奶制品保藏期间微生物学变化趋势,为酸奶制品的质量控制提供理论依据。研究采用平皿菌落计数法对伊利和蒙牛两种酸奶制品在保质期内乳酸菌、霉菌及酵母菌的数量测定,判断酸奶的品质情况。研究结果如下:酸奶保藏过程中微生物的变化趋势表明:蒙牛酸奶中的乳酸菌数从第一天的1.13×108cfu/mL下降到6.95×106cfu/mL;伊利酸奶中的乳酸菌数从第一天的1.06×108cfu/mL下降到4.9 ×106cfu/mL即蒙牛和伊利酸奶的乳酸菌数从出厂到保质期结束过程中,总体数量呈下降趋势,即出厂的时间越长,酸奶中所含的乳酸菌数越少。酸奶中的霉菌结果为:蒙牛从开始的2.7×104cfu/mL增加到3.2×105cfu/mL,伊利从开始的5.3×105cfu/mL增加到1.02×106cfu/mL;酸奶中的酵母菌结果为:蒙牛从开始的3.25×104cfu/mL增加到1.0×106cfu/mL,伊利从开始的5.0×104cfu/mL增加到1.2×106cfu/mL。即霉菌和酵母菌的数量总体呈上升趋势,即出厂时间越长,酸奶中所含的霉菌和酵母菌数越多。

关键词:酸奶,保藏,乳酸菌,霉菌,酵母菌

Microbiological changes in the yogurt preservation

Biotechnology Class 06 Peng Sheng-gang

Supervisor Lin-qian

Abstract

Yogurt is popular by a lot of consumers .However, conserve yogurt should be careful. Transformation problems on the market are always happen, because conserve work still not attract their attention. This thesis analyzes mushroom distributing during conserve on sell in the market, discuss the tendency of microbiology transformation to the yogurt during the period of conserve, provided the theory evidence for control the quality of yogurt products. In order to judge the quality of yogurt, Plate Colony Count can be used to set out the number of Yili and Mengniu, including lactic acid bacteria, moldand yeast. Yili and Mengniu are two kinds of yogurt products. The result of study as follow: The microbial change tendency during the yogurt conserving shows that: the number of lactic acid bacteria in Mengniu reduce from 1.13×108 cfu/mL at the first day to 6.95×106 cfu/mL. And the number of lactic acid bacteria in Yili from 1.06×108cfu/mL to 4.9 ×106 cfu/mL. It means that the number of lactic acid bacteria in Mengniu and YiLi are always reducing from the beginning of produce to the end of guarantee period. It means that the long time it finished product from the factory, the less number of lactic acid bacteria is. The number of mold show that Mengniu from the beginning of 2.7×104cfu/mL increase to 3.2×105cfu/mL and Yili from 5.3×105cfu/mL rise to 1.02×106cfu/mL.The result of the yeast in the yogurt show that Mengniu increase from 3.25×104cfu/mL to 1.0×106cfu/mL and YiLi from 5.0×104cfu/mL rise to 1.2×106cfu/mL. To sum up, the number of mold and yeast rise collectivity. It is say that the long time it finished product from the factory, the more mold and yeast include in the yogurt.

Key words:Yogurt, Preserve, Lactic acid bacteria, Mold,Yeast

目录

1 前言 ................................................................................................................................... 1

1.1酸奶及其作用 .......................................................................................................... 1 1.2乳酸菌(益生菌)种类及其生理功能 .................................................................. 2

1.2.1乳酸菌(益生菌)的主要生理功能介绍 .................................................... 2 1.3主要乳酸菌的性质和作用 ...................................................................................... 3 1.4霉菌和酵母菌对酸奶的影响 .................................................................................. 5 1.5本研究的目的和意义 .............................................................................................. 5 2材料和方法 ........................................................................................................................ 7

2.1材料 .......................................................................................................................... 7 2.2仪器 .......................................................................................................................... 7 2.3实验方法 .................................................................................................................. 7 3结果与分析 ........................................................................................................................ 9

3.1 酸奶在保藏过程中乳酸菌的变化情况 ................................................................. 9 3.2酸奶在保藏过程中霉菌的变化情况 .................................................................... 10 3.3酸奶在保藏过程中酵母菌的变化情况 ................................................................ 11 4讨论与结论 ...................................................................................................................... 14

4.1讨论 ........................................................................................................................ 14 4.2结论 ........................................................................................................................ 15 致谢 ..................................................................................................................................... 16 参考文献 ............................................................................................................................. 17

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1 前言

1.1酸奶及其作用

酸奶通常是以新鲜的牛奶作为为原料,加入适量蔗糖,选择保加利亚乳酸杆菌和嗜热链球菌作为发酵剂再进行同型乳酸发酵得到的活性乳酸菌饮品。凝固型酸牛奶成品中乳酸菌的含量可达到106-9个/mL,由于它营养丰富 ,深受广大消费者的欢迎[1]。

酸奶是人们司空见惯的东西,无论是小卖部或者超市里面都可以见到它熟悉的身影。酸奶的种类多种多样,满足了人们各种口味,这让酸奶风靡全球,成为人们特别喜爱的饮料之一。酸奶的定义更是多种多样,而联合国粮农组织和世界卫生组织对酸奶的定义是:以鲜牛奶为原料,然后接入纯培养的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌作为发酵剂,并保温一定时间,因产生乳酸而使酪蛋白凝结的成品,称为酸奶。它含有丰富的蛋白质,由于发酵后的蛋白质很容易被人体消化,故是适合儿童和老年人的优良食品,尤其是其中的钙最容易被人体吸收,经常饮用有增进人体健康的作用[2,3]。酸奶作为中国营养学会所推荐的健康食品,随着生活质量的提高,近年来越来越受到人们的喜爱,其需求量呈逐年上升的趋势。由于酸奶的加工工艺简单、设备投资少又见效快,生产酸奶的厂家像雨后春笋迅速增多,但由于一些生产厂家缺乏经验所生产的酸奶没有按照严格规定的条件操作,致使生产的酸奶卫生质量,营养质量较差,而酸奶引起的食物中毒现象也时有发生[4]。

大多数人只知道酸奶作为饮料酸酸的甜甜的,喝起来口感很好味道很香,而对于酸奶的真正作用是知之甚少的。酸奶(酸牛奶 重量:100g)的营养成分主要有:热量410千焦;蛋白质2.8g;脂肪3.0g;碳水化合物14.8g;钠80mg;非脂乳固体≥7.3g;乳含量≥90%,同时还含有维生素A,E,C、钾、钙、磷、镁、锌、铁等,这让酸奶很大程度上满足了人体对一些元素的需求,不但保留了牛奶的所有优点,而且还更上一层楼,使酸奶成为了人们生活中名副其实的保健品。酸奶中含有大量活力较强的乳酸菌,乳酸菌是人体有益菌,它产生的乳酸不但可以抑制一些腐生菌、病原菌和有害菌的生长繁殖,起到预防感染的作用,而且还能促进食物消化吸收和预防便秘的发生,达到维持口腔、肠道等的微生物平衡的作用[5]。此外,酸奶还能降低血清胆固醇水平,预防由冠状动脉硬化而引起的心脏病,提高人体免疫力,从而增强对癌症的抵抗能力[6]。

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2材料和方法

2.1材料

伊利浓味酸牛奶原味(净含量100g/杯):佛山伊利乳业有限责任公司生产,保质期28天;蒙牛酸牛奶原味(净含量100g/杯):蒙牛乳业(北京)责任有限公司生产,保质期21天。

MRS培养基:葡萄糖2%,酵母粉0.5%,蛋白胨1%,牛肉膏1%,七水硫酸镁0.02%,硫酸锰5.6mg/L,乙酸钠0.5%,柠檬酸二铵0.2%,琼脂2%。

马铃薯 - 葡萄糖琼脂培养基:马铃薯(去皮切块)300g,葡萄糖20g,琼脂20g,加蒸馏水至1000mL。

查氏培养基:硝酸钠 2.0g,磷酸氢二钾1.0g,氯化钾0.5g,硫酸镁 0.5g,硫酸铁0.01g,蔗糖30.0g,琼脂20.0g,加蒸馏水至 1000mL。 2.2仪器

电子天平;隔水式电热恒温培养箱:上海跃进医疗器械厂;电热恒温培养箱:上海跃进医疗器械厂;WD900G 型微波炉:佛山市顺德区格兰仕微波炉电器有限公司;不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器(YXQ-LS-18SL):上海博讯实业有限公司医疗设备厂;烘箱;电子万用炉:天津市斯特仪器有限公司;SW-CJ-2FD洁净工作台:苏州安泰空气技术有限公司;培养皿;试管;烧杯;三角瓶(250mL,300mL,500mL);量筒;酒精灯;玻棒,涂布棒等。 2.3实验方法

1.对需要用到的平皿93个、试管14根、涂布棒2个、一盒移液枪枪头进行灭菌(其中平皿在前一天用烘箱160℃灭菌3个小时左右,灭好后放到超净工作台中待用;试管、涂布棒、枪头用高压蒸汽灭菌即可)

2.配三种培养基各400mL,并进行高压蒸汽灭菌30min后取出待温度适合就进行倒平板,其中三种培养基各倒31个。待培养基在平板中冷却凝固就可为下一步涂平板了做准备了(此过程要一直在超净工作台中进行)。

3.平板中的培养基冷却凝固后就可以用灭菌容器从市场上买回来的酸奶(注:从市场上买回来的同一生产日期的伊利和蒙牛各三杯并放入冰箱中保藏供整个实验用,一次

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实验各一杯)中称取样品25mL,放入装有225mL蒸馏水的三角瓶中,充分震荡,将处理后的样品依次进行10倍稀释至10- 7。取 10-3、10-4、10-5、10-6、10-7四个梯度用移液枪各以0.2mL加入平板中进行涂平板,每个梯度涂三个平板并做一个对照( 即三种培养基在同一样品中都涂这五个梯度,一共是伊利和蒙牛两种样品,故一共是93个平板)。

4.MRS培养基培养的乳酸菌需放入厌氧培养箱中(35-37℃ )培养 2d,马铃薯-葡萄糖和查氏培养基需放入培养箱中(25-28℃ )培养5d,计数。(整个过程在分第1天,第7天,第14天分别重复做一次进行结果记录。)

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3结果与分析

3.1 酸奶在保藏过程中乳酸菌的变化情况

将酸奶样品稀释液0.2mL涂布于MRS培养基上,放入培养箱中(37℃)48h,进行菌落计数,结果见图3.1。

酸奶在储藏过程中乳酸菌的变化情况乳酸菌数×106cfu/mL1201008060402000113106蒙牛×106伊利×10623.512.7510储藏时间/天6.954.915

图3.1 酸奶在保藏过程中乳酸菌的变化情况

Fig.3.1 Yogurt is in the condition preserving middle lactobacillus of process change. 由图3.1可知,蒙牛和伊利酸奶中乳酸菌的数量随时间的增加变得越来越少,蒙牛酸奶中的乳酸菌数从第一天的1.13×108cfu/mL下降到6.95×106 cfu/mL;伊利酸奶中的乳酸菌数从第一天的1.06×108cfu/mL下降到4.9 ×106 cfu/mL。根据新的酸奶国家标准(GB2746-1999)[19]中规定产品中的乳酸菌数不得低于1.1×106cfu/mL,符合国家标准。

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图3.2 酸奶中乳酸菌在培养两天后的菌落情况

Fig.3.2 After two days cultivated the situation of bacterial flora in the lactobacillus of yogurt.

图3.2中左边这张为乳酸菌菌落平板,培养基上的圆形小白点即为乳酸菌菌落;右边这张为MRS培养基对照平板,上面什么也没有,即没有受到污染。 3.2酸奶在保藏过程中霉菌的变化情况

将酸奶样品稀释液0.2mL涂布于马铃薯 -葡萄糖琼脂培养基上,放入恒温培养箱中(25—28℃)培养5d ,进行菌落计数,结果见图3.3。

酸奶在保藏过程中霉菌的变化情况120霉菌数*104/(cfu/mL)1008060402000510储藏时间/天15

蒙牛×104伊利×104图3.3 酸奶在保藏过程中霉菌的变化情况

Fig.3.3 Yogurt is in the condition preserving change of middle mould of process.

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由图3.3可知,不管是蒙牛还是伊利,酸奶中霉菌的数量随着时间的增加而变得越来越多,蒙牛从开始的2.7×104cfu/mL增加到3.2×105cfu/mL;伊利从开始的5.3×105cfu/mL增加到1.02×106cfu/mL。由此可见蒙牛开始变化不显著,后来变化显著,而伊利变化显著,这可能是伊利的出厂日期比蒙牛早几天的缘故。

图3.4 酸奶中霉菌在培养5天后的菌落情况

Fig.3.4 After five days cultivated the situation of bacterial flora in the mildew of yogurt.

图3.4中左边这张为霉菌菌落平板,其中的白色菌落为霉菌菌落,时间久后会变成蓝黑色;右边的为马铃薯培养基对照平板,两个气泡是涂平板过程中弄成的气泡,除此无其他东西,即没受污染。

3.3酸奶在保藏过程中酵母菌的变化情况

将酸奶样品稀释液0.2mL涂布于查氏培养基上,放入恒温培养箱中(28℃)培养5d ,进行菌落计数,结果见图3.5。

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酸奶在保藏过程中酵母菌的变化情况酵母菌数×104/(cfu/mL)14012010080604020005储藏时间

蒙牛×104伊利×1041015图3.5 酸奶在保藏过程中酵母菌的变化情况

Fig3.5 Yogurt is in the condition preserving change of middle saccharomycetes of process.

由表3.5可知,酸奶在保藏过程中酵母菌的变化为:的蒙牛从开始的3.25×104cfu/mL增加到1.0×106cfu/mL,伊利从开始的5.0×104cfu/mL增加到1.2×106cfu/mL,即不管是蒙牛还是伊利,酸奶中酵母菌的数量随着时间的增加而变得越来越多,并且变化明显。

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图3.6 酸奶中酵母菌在培养5天后的菌落情况

Fig.3.6 After five days cultivated the situation of bacterial flora in the microzyme of yogurt.

图3.6中左边这张为酵母菌菌落平板,其中的黄色菌落即为酵母菌菌落;右边这张为查氏培养基对照平板,上面什么也没有,即没有受到污染。

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4讨论与结论

4.1讨论

首先明确下变质的定义:食品变质,一般是指食品在一定的环境因素下,因微生物的作用使食品失去原有的营养价值、组织性状以及色、香、味,转变成为不符合卫生要求的食品。实验过程中:蒙牛和伊利酸奶的乳酸菌数从出厂到保质期结束过程中,总体数量呈下降趋势,即出厂的时间越长,酸奶中所含的乳酸菌数越少;霉菌和酵母菌的数量总体呈上升趋势,即出厂时间越长,酸奶中所含的霉菌和酵母菌数越多。一般情况下刚刚出厂的产品中就含有霉菌和酵母菌,随着时间的延长,菌数逐渐增加,冷藏条件下,变化不明显;当贮藏条件发生变化,尤其是温度升高时,这些霉菌和酵母菌会迅速生长。夏季酸奶常出现的胀袋现象,就是因为酵母在生长过程中产生二氧化碳所致。酸奶在放置过程中,污染的酵母菌如红酵母、圆酵母和杆状球拟酵母都能引起酸奶鼓盖[20]。这说明市售的酸奶潜在一些质量问题,酸奶保质期的限制因素主要是酵母菌和霉菌。另外,酸奶制品的pH为3.8-4.2,大多数微生物是很难生长繁殖,只有霉菌和酵母菌能生长,因为这两类微生物 pH 生长范围在3.8-6.0 之间。所以,酸奶制品中,霉菌和酵母容易生长繁殖,引起酸奶变质[21]。因为霉菌、酵母中那些能在酸奶贮存温度(<10℃)下生存且能发酵乳糖,利用乳酸、柠檬酸的菌种就能在酸乳中生长繁殖,使酸奶细菌总数超标,出现胀瓶、长霉等现象,从而严重影响了酸奶的货架寿命。霉菌、酵母不耐热,一般的杀菌条件已足够将其致死。由此得出:它们能生存于酸奶中的主要原因是二次污染。为了尽量避免这样的事情发生,我建议生产厂家用下面的两中方法进行管理:

第一,完善酸奶卫生标准:很多发达国家都对霉菌、酵母菌有严格的限量标准,而我国到目前还没有。但是在国家没有标准的时候各生产厂家可以制定合适标准的限量标准,建议生产厂家考虑此行。

第二,生产厂家认真贯彻执行GMP:重点注意原料乳杀菌后的各个工序,加强环境及个人卫生,防止生产设备、包装容器等污染,定期对灌装设备、包装容器进行杀菌,在灌装及包装室内安装空气过滤机、空气层流设备等装置清除霉菌、酵母菌的污染源[22]。

从外在现象中,当酸奶放与室温下没几天就马上会有怪味、酸味、刺鼻味,而放与冰箱中的,当到第14天做实验时也明显闻到上述气味,但是乳酸菌含量并未低于国家标准。分析酸奶无芳香味的原因:1.主要由于菌种选择及操作工艺不当引起。正常酸

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乳生产应保证两种以上的菌混合使用并选择适宜的比例,任何一方占优势都会导致产香不足,风味变坏。高温短时发酵和固体含量不足也是造成芳香味不足的因素。2.原料乳本身有怪味,因为原料乳中的乳脂肪吸附异味能力非常强,当挤奶场地不卫生,或者放置的时间过长,就很容易产生异味,另外掺假也是使原料乳产生异味的主要原因。开始发酵产生的香气可适当掩盖原料的异味,但当异味严重时就会反过来掩盖香气使酸奶产生异味。3.发酵剂或生产过程受到杂菌污染。当发酵剂受到乳酸菌野生株或在生产中受到大肠菌群、酵母、霉菌等杂菌污染,都会使酸奶产生异味。4.酸奶贮藏时间过长,会产生苦味。5.消毒不当。原料乳经过长时间杀菌就会有强烈的蒸煮味,做出的酸奶不仅口味不好,甚至颜色也不正常[23]。从此我们可以看出其中的异味是霉菌和酵母菌或外部污染所致,因为我们在实验过程中,从测得的数据可以看出:霉菌、酵母菌随着保藏时间的增加而越来越多,所以酸奶变没变质不能仅仅靠乳酸菌的含量衡量,还应该看其霉菌、酵母菌及其风味如何而定。 4.2结论

①实验采用的伊利浓味酸牛奶原味和蒙牛酸牛奶原味样品中的乳酸菌数在保质期内随着时间的增加呈下降趋势,但不低于国家的1.1×106cfu/mL标准;②霉菌和酵母菌的数量总体呈上升趋势,虽然在酸奶的保质期内但也能使得酸奶的口味越来越坏,特别是第14天后明显口味不佳且有异味。从第一天实验,可以得出: ③出厂的酸奶本身就含有除乳酸菌外的霉菌和酵母菌。虽然这个做实验的第一天不是酸奶的出场日期,但是从比较大菌落的数目可以推测酸奶在出厂的时候本身就带有霉菌和酵母菌了,而不是后天感染的。因为出厂后酸奶都是密封保存的基本上不会在运输过程中感染,而霉菌和酵母菌的菌落数量又大。④酸奶变不变质要从乳酸菌、霉菌和酵母菌的数量综合评定,不能光靠乳酸菌的含量是不是符合国家标准而定。⑤酸奶是一种不耐贮的乳制品,室温下保鲜期通常是2天,0-4℃冷藏时为7-14天。故喝酸奶最好喝保质期内前14天的,14天后的酸奶变得有异味,口感不好,不适合喝。

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致谢

四年的学习生活即将结束,回首往事,难以忘怀在这四年的学习和生活中给予我关怀和支持的老师和同学们。

首先我要感谢我的指导老师----林谦老师,自从我因为个人兴趣选择本主题开始,林老师给予了很大的理解和支持,特别是论文的立题选材以及实验过程做了必不可少的指导,林老师以渊博的学识和孜孜不倦的教导为本文的顺利完成提供了富有成效的保证。不管是什么时间,哪怕是午休时间,林老师都会接我电话、回短信以及发邮件督促、指导我的论文写作,其严谨和负责,让一度偷懒懈怠的我倍为感动,也深感惭愧。

“师者,传到授业解惑也。”从林老师身上我深刻领略到这句话的内涵,特别是在我实验的时候遇到挫折和失败时,林老师总是以师者的智慧、长辈的宽容、朋友的坦诚,给我难能可贵的指点和帮助,常常让我有“山重水复疑无路,柳暗花明又一村”的感悟。为遇到这样的导师而感到万分庆幸。

其次我要感谢吴弦华老师以及玉林师范学院化生系的所有老师,感谢他们给了我丰富而充实的大学生活。还要感谢我的室友、同学以及帮助我做实验的师弟师妹。

最后,我必须要感谢我的家人。感谢我的父母含辛茹苦、无怨无悔地把我抚养、栽培到现在,家人永远是我的依托,也是鞭策我不断前进的力量。

时间如白马过隙,更如流水,时刻不停的冲刷着我们的记忆,但是有些记忆不会被冲刷,反而会随着冲刷的流水变得越来越清晰,像酒,越来越醇,越来越值得回忆,因为它们早已深深刻在了我们心里的最深处。四年的大学生活即将画上句号,收拾行囊、开始新征途的日子悄然逼近,回头看看走过的路,无限感慨,挥挥手,却依然不想说再见!

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本文来源:https://www.bwwdw.com/article/z76h.html

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