尿毒症患者肠道菌群变化的研究 - 图文

?１７２??临床研究?尿毒症患者肠道菌群变化的研究王尊松崔美玉【摘要】唐利军李文斌魏勇贾晓妍孔祥雷许冬梅目的研究尿毒症患者肠道菌群变化的特点及其与炎性状态的关系。方法选择尿毒症非透析患者和透析患者各６０例分为非透析组和透析组，另选择３０例健康查体志愿者作为对照组，用实时荧光定量ＰＣＲ（ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ）检测粪便长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、大肠杆菌的表达，细菌浓度以每克粪便中该菌种基因拷贝数的对数表示，免疫散射比浊法测量患者超敏ｃ反应蛋白（ｈｓ—ＣＲＰ）。结果与对照组相比，尿毒症透析组和非透析组粪便长双歧杆菌（８．１６±０．５６和８．２５＿＋０．５１比８．９４±０．５２，均Ｐ＜０．０１）和嗜酸乳杆菌（７．２２±０．６２和７．４２＿＋０．５９比８．１１＋０．６１，均Ｐ＜Ｏ．０１）浓度均明显降低。透析组略低于非透析组，但差异无统计学意义。与对照组相比，尿毒症透析组和非透析组粪便大肠杆菌（９．４０±０．５７和９．４７±０．５０比９．１１±０．５４，均Ｐ＜０．０５）和粪肠球菌（８．０７±０．５７和８．０６＿＋０．５５比７．７５±０．５５，均Ｐ＜０．０５）浓度均明显升高。透析组与非透析组差异无统计学意义。以患者ｈｓ—ＣＲＰ为因变量Ｙ，４种肠道菌群浓度为自变量ｘ，做逐步回归分析，选人方程的有嗜酸乳杆菌和粪肠球菌，回归方程为：Ｙ。。。＝５７．９７—９．９１Ｘ嗜艘乳杆菌＋２．２６Ｘ粪肠球菌。结论尿毒症透析组和非透析组粪便长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌浓度均明显降低，粪便大肠杆菌和粪肠球菌浓度均明显升高；嗜酸乳杆菌浓度降低及粪肠球菌浓度增加均可能加重尿毒症患者微炎性反应。【关键词】尿毒症；肠杆菌科；聚合酶链反应ＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｆｌｏｒａｉｎｕｒｅｍｉｃｐａｆｉｅｎｔｓＷｅｎｂｉｎ，ＷｅｉＹｏｎｇ，ＪｉａＷａｎｇＺｕｎｓｏｎｇ，ＣｕｉＭｅｉｙｕ，死昭Ｌｉｊｕｎ，ＬｉＸｉａｏｙａｎ，‰增Ｘｉａｎｇｌｅｉ，ＸｕＤｏｎｇｍｅｉ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，ＱｉａｎｆｏｓｈａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＳｈａｎｄｏｎｇＪｉｎａｎ２５００１４．Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＸｕＤｏｎｇｍｅｉ，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｄｏｎｇｍｅｉ６３＠１６３．ｃｏｍ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｆｌｏｒａｉｎｕｒｅｍｉｃｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．ＭｅｔｈｏｄｓＳｉｘｔｙｕｒｅｍｉｃｐａｔｉｅｎｔｓａｓｗｉｔｈｏｕｔｈｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓ，ｓｉｘｔｙｒｅｃｒｕｉｔｅｄｉｎｔｈｉｓｃｏｌｉｕｒｅｍｉｃｐａｔｉｅｎｔｓｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇｈｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓ，ａｎｄｔｈｉｒｔｙｈｅａｌｔｈｙｓｔｕｄｙ．ＩｎｔｅｓｔｉｎａｌｆｌｏｒａｐｅｏｐｌｅｃｏｎｔｒｏｌｗｅｒｅｉｎｃｌｕｄｉｎｇＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｏｎｇｕｍ，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ，ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａａｎｄＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓｗｅｒｅｅｘａｍｅｄｂｙＲｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ．Ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｅａｃｈｂａｃｔｅｒｉｕｍｗａｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｅｌｇ（ｃｏｐｙｌｇｒａｍｆｅｃｅｓ）．ＳｅｒｕｍＲｅｓｕｌｔｓｌｏｗｅｒａｎｄＴｈｅｉｎｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅＣ—ｒｅａｃｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｈｓ—ＣＲＰ）ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｌｏｎｇｕｍａｎｄＬａｅｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｎｏｎ－ｎｅｐｈｅｌｏｍｅｔｒｙ．ｗａｓｏｆＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓｈｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓ０．０１１．Ｔｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓｇｒｏｕｐ（８．１６±０．５６ａｎｄ７．２２±０．６２）ａｎｄｇｒｏｕｐ（８．２５＿＋０．５１７．４２＿＋０．５９）ｔｈａｎｉｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（８．９４＿＋０．５２ａｎｄ８．１１±０．６１，ａｌｌＰ＜ｈｉｇｈｅｒｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓａｎｄａｎｄＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓｔｈａｎｔｈｏｓｅｇｒｏｕｐ（８．０７＿＋０．５７ｃｏｎｔｒｏｌｔｈｅ９．４０±０．５７）ａｎｄａｎｄｎｏｎ－ｈｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓｇｒｏｕｐ（８．０６±０．５５ｗｅｒｅａｎｄｎｏ９．４７±０．５０）ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｏｆｉｎｇｒｏｕｐｆ７．７５±０．５５９．１１±０．５４，ａｌｌＰ＜０．０１）．Ｔｈｅｒｅａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｌｅｖｅｌｓｏｆｔｈｅｓｅｂａｃｔｅｒｉａｂｅｔｗｅｅｎｎｏｎ—ｈｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓｄｉａｌｙｓｉｓｇｒｏｕｐ．ＳｔｅｐｗｉｓｅｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓａｎｄＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓｗｅｒｅｉｎｔｉｍａｔｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｈｓ—ＣＲＰ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｅｑｕａｔｉｏｎｗａｓ：Ｙｂ．ｃＲＰ＝５７．９７—９．９１ＸＬ＝。。ｂａ。Ⅲ…。．ｄｏｐｈｉｈ＋２．２６ＸＥ……。ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１—７０９７．２０１４．０３．００３基金项目：山东省自然科学基金（ＺＲ２０１０ＨＬ０１２）作者单位：２５００１４济南，山东省千佛山医院肾内科通信作者：许冬梅，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｄｏｎｇｍｅｉ６３＠１６３．ｃｏｍ万方数据ｆ。。。Ｉ。ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＴｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｏｎｇｕｍａｎｄＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓｄｅｃｒｅａｓｅａｎｄＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉａｎｄＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａ｜ｉｓｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｕｒｅｍｉｃｐａｔｉｅｎｔｓ．ＴｈｅｄｅｃｒｅａｓｅｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｏｆＥｎｔｅｒｏｃｏｃｅｕｓｆａｅｃａｌｉｓｍａｙａｇｇｒａｖａｔｅｔｈｅｍｉｅｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｕｒｅｍｉｃｐａｔｉｅｎｔｓ．ｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｕｒｅｍｉａ；Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ；Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ胃肠道是人体最大的细菌储存库，肠内微生美国ＡＢＩｐｒｉｓｍ７５００）、电泳仪（ＢＬ３一ＤＹＹ．６Ｃ，北京物数量达１０”，种类超过１０００种，这些微生物对维持细菌和宿主间的相互作用十分重要｛－Ｉ，并且对人体的免疫系统至关重要皿－。尿毒症患者存在不同程度的慢性微炎性状态和营养不良一Ｉ，微炎性状态与尿毒症患者诸多并发症密切相关１４＋５－，其形成与肾功能衰竭本身、血液透析技术、内毒素血症、肠道菌群易位、营养不良等诸多因素有关陋。８，，但具体机制尚不十分清楚。近年来研究发现肠道大量共生微生物的变化与很多疾病密切相关ｐ，，但到目前为止，肠道菌群在慢性肾脏病发生、发展中的作用尚不清楚。尿毒症患者肠道微生态有什么变化？肠道菌群的变化对尿毒症患者微炎性状态有何影响？目前这方面的研究较少。我们用实时荧光定量ＰＣＲ技术检测肠道菌群，以期发现尿毒症患者肠道菌群变化的规律及其与炎性状态的关系。对象和方法一、研究对象２００９年６月至２０１２年１２月期间在本院肾内科住院的尿毒症病人及门诊的尿毒症病人。人组标准：血液透析患者，年龄１８岁以上；维持性血液透析３个月以上，且近１月来病情稳定；近１月每次血液透析治疗时间、透析器、透析液、透析模式无调整。尿毒症未透析患者：年龄１８岁以上；临床确诊（病史、血肌酐、肾脏Ｂ超、化验检查等）为慢性肾脏病，根据Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ．Ｇａｕｈ公式计算内生肌酐清除率＜１０ｍｌｌｍｉｎ。排除标准：人组前４周内出现临床感染（呼吸道、消化道、泌尿生殖系统等）、肝脏疾病、活动性自身免疫性疾病、恶性肿瘤、右心功能衰竭、三尖瓣功能不全、３个月内应用抗生素或免疫抑制剂，腹泻或便秘。所有受试对象在进入实验前均签署知情同意书，并经医院伦理委员会批准。二、实验方法１．主要仪器和试剂：实时荧光定量ＰＣＲ仪（万方数据中西科技）、超净工作台（美国ＴｈｅｒｍｏＦｏｒｍａ）、凝胶成像系统（美国ＦｌｕｏｒＣｈｅｍＥ，ＦＥ０３００）、酶标仪（Ａｎｔｈｏｓｚｅｎｉｔｈ３４０ｒｔ，美国奥斯邦）；试剂：标准菌株长双歧杆菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｏｎｇｕｍ，１．２１８６）、嗜酸乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ，１．１８７８）、粪肠球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ，１．１０１）、大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，１．８３０）均购自中国科学院微生物研究所菌种保藏中心（冻干粉型），大便总ＤＮＡ抽提试剂盒ＱＩＡａｍｐＤＮＡＳｔｏｏｌＭｉｎｉＫｉｔ（德国Ｑｉａｇｅｎｅ），ＳＹＢＲＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑ（ＰｅｒｆｅｃｔＲｅａｌＴｉｍｅ）试剂盒（大连宝生物工程），普通琼脂糖凝胶ＤＮＡ回收试剂盒（ＤＰ２０９．离心柱型）：ＴＩＡＮｇｅｌＭｉｄｉＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＫｉｔ（北京天根生化科技）。参照文献报道［１０１设计和合成细菌种属特异性引物。根据双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、大肠杆菌１６ＳｒＤＮＡ基因序列设计菌属特异性ＰＣＲ引物，并在ＢＬＡＳＴ基因数据库内比对引物序列的特异性。引物序列由北京六合华大基因科技股份有限公司，引物序列见表１。表１１６ＳｒＤＮＡ基因ＰＣＲ扩增引物序列警兰攀板及扩增片段引物序列（５，，３，）长度（ｂｐ）…～‘双歧杆菌属（２４３）Ｆ：５＂－ＴＣＧＣＧＴＣ（Ｃ／Ｔ）ＧＧＴＧＴＧＡＡＡＧ一３’Ｒ：５＂－ＣＣＡＣＡＴＣＣＡＧＣ（刖Ｇ）ＴＣＣＡＣ一３’嗜酸乳杆菌（３４１）Ｆ：５＂－ＡＧＣＡＧＴＡＧＧＧＡＡＴｃ７Ｉ．Ｉ’ｃｃＡ．３’Ｒ：５＂－ＣＡＣＣＧＣＴＡＣＡＣＡＴＧＧＡＧ一３粪肠球菌（１４４）Ｆ：５＂－ＣＣｃＴｒＡ７Ｉ’ｒＧＴｒＡＧＴＴＧＣＣＡＴｃＡ７ＩＴｒ一３’Ｒ：５＂－ＡＣＴＣＧＴＩ＂ＧＴＡＣＴＴＣＣＣＡＴＴＧＴ一３’大肠杆菌（３４０）Ｆ：５＂－ＧｒＩＴＩ．ＡＡＴＡＣＣ盯ｒＧＣＴＣＡ７ＩＴＩ＇ＧＡ一３Ｒ：５，＿ＡＣＣＡＧＧＧＴＡＴＣ＇ＩＦＡＡＴＣＣＴＧＴＦ一３２．标本收集及保存：血液透析患者于每周首次透析当日空腹抽血，尿毒症未透析患者及健康对照组于实验当日空腹，抽取静脉血行全血细胞计数、血清胱抑素Ｃ（ＣｙｓＣ）、白蛋白、超敏Ｃ反应蛋白（ｈｓ—ＣＲＰ）检测。取清晨第一次新鲜粪便，盛?１７４?于干净、密闭的粪便收集器内，迅速置于一８０。Ｃ冰箱保存备用。３．粪便细菌ＤＮＡ提取：称取２００ｍｇ粪便（不足２００ｍｇ者记录具体重量），用ＱＩＡａｍｐＤＮＡＳｔｏｏｌＭｉｎｉＫｉｔ抽提试剂盒提取粪便细菌基因组ＤＮＡ，按照操作说明书进行。４．标准菌株ＤＮＡ提取：取长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、大肠杆菌、粪肠球菌冻干粉５０ｍｇ，加入２００ＩｘｌＰＢＳ溶解后，用ＱＩＡａｍｐＤＮＡＳｔｏｏｌＭｉｎｉＫｉｔ试剂盒抽提标准菌株ＤＮＡ。５．常规ＰＣＲ反应及ＤＮＡ切胶回收：用４种标准菌株ＤＮＡ和１名健康对照者的粪便ＤＮＡ进行常规ＰＣＲ反应，ＰＣＲ反应条件：９４℃预变性３ｍｉｎ；９４℃变性３０ｓ、退火（长双歧杆菌５８℃，嗜酸乳杆菌５８℃，大肠杆菌６０℃，粪肠球菌６１℃）３０Ｓ、７２℃延伸１ｍｉｎ，共３５个循环；７２℃复性５ｍｉｎ。扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳，紫外线照射成像，将ＰＣＲ产物切胶、回收。６．实时荧光定量ＰＣＲ（ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ）反应：将上述经切胶、回收后所得的ＤＮＡ片段作为实时荧光定量ＰＣＲ的标准品，用紫外分光光度计测得标本吸光度（Ａ猢），计算出标准菌株模板的浓度。计算ｌ¨ｌ溶液中所含有的ＤＮＡ的拷贝数，使用以下公式：洲Ａ拷贝数＝锱怒等根据上述公式，得到１ｉｘＬ溶液中所含各菌株基因拷贝数，长双歧杆菌３．７５×１０加，嗜酸乳杆菌１．６０×１０”，大肠杆菌１．１３ｘ１０１０，粪肠球菌５．９５×１０１０。７．标准曲线的制作：将各标准品做１０倍系列稀释，得到１０８、１０７、１０６、１０５、１０４、１０３、１０２作为标准品，进行ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩ为荧光染料的实时定量ＰＣＲ反应。（１）ＰＣＲ反应条件：９５℃预变性２ｍｉｎ；随后９５。Ｃ变性１５Ｓ，退火温度（双歧杆菌５８。Ｃ，乳酸杆菌５８℃，大肠杆菌６０℃，肠球菌６１℃）２０Ｓ，６８℃延伸３０ｓ，Ｔ２０Ｃ（双歧杆菌８５℃，乳酸杆菌８３．５。Ｃ，大肠杆菌８５．５℃，肠球菌８２．５０Ｃ）保持１５Ｓ读取定量荧光数据，共４０个循环；循环结束时通过对ＰＣＲ产物进行熔解温度曲线分析来决定产物的特异性信号。（２）各模板不同拷贝数的对数值为横坐标，以ＰＣＲ反应过程中出现荧光信号的初始循环数（Ｃｔ）为纵坐标作出标准曲线；（３）在标准曲线上得到截距（ｂ），斜率（ｋ）及相关性。（４）利用万方数据回归方程式：ｌｏｇＣｏ＝（Ｃｎ．ｂ）／ｋ，将所得各标本的初始循环数代人公式，即得到对应的ＤＮＡ模板数。根据读取的荧光数据，由系统软件ｉＣｙｅｌｅｒＯｐｔｉｃａｌｓｙｓｔｅｍＩｎｔｅｒｆａｃｅｓｏｆｔｗａｒｅ（ｖ２．０，Ｂｉｏ—Ｒａｄ）自动分析Ｃｔ值。８．待测粪便样品１６ＳｒＤＮＡ的定量分析：每次荧光定量反应均以标准菌种１６ＳｒＲＮＡ的ＤＮＡ构建标准曲线，获取样本中不同菌种的１６ＳｒＲＮＡ基因拷贝数。待测粪便样品中４种细菌的１６ＳｒＤＮＡ荧光定量ＰＣＲ反应体系和反应条件与标准曲线制备时相同。反应结束后通过对ＰＣＲ产物进行熔解温度曲线分析，决定产物的特异性。四、统计学分析所有统计学处理采用ＳＰＳＳ１６．０软件完成。计量资料以孑±ｓ表示，采用单因素方差分析，组间比较用ＬＳＤ法，回归分析采用多元线性逐步回归分析。Ｐ＜Ｏ．０５表示差异有统计学意义。结果一、一般资料根据前述标准，共人组患者１２０例，其中男性６８例，女性５２例，年龄５７．１±１６．８岁。健康对照组为来我院查体中心查体的健康人群，共３０例，男１７例，女１３例，年龄５６．２＿＋１５．７岁。非透析组、透析组和健康对照组人群在性别、年龄构成上相匹配。非透析组和透析组血红蛋白浓度差异有统计学意义，血Ａｌｂ、ＣｙｓＣ和ｈｓ．ＣＲＰ的差异无统计学意义。研究对象基本特征见表２。二、各菌株标准曲线与回归方程以吸光度Ａ值为纵坐标（Ｙ），相应的菌株标准品基因拷贝数为横坐标（ｘ），做得相应的标准曲线，经直线回归后得回归方程，四种细菌的回归方程为：乳酸杆菌：Ｙ一０．４７１８Ｘ＋１６．９８７Ｒ２＝０．９２１６长双歧杆菌：Ｙ一０．４２０８Ｘ＋１３．５５３Ｒ２＝０．９７９４粪肠球菌：Ｙ一０．３９０４Ｘ＋１２．２８９Ｒ２＝０．９５３４大肠杆菌：Ｙ＝一０．４８０１Ｘ＋１５．３３８Ｒ２＝Ｏ．９２１７根据回归方程及相应标本的吸光度值，计算各待ｉ贝０品的菌株基因拷贝数。最后将每克粪便所含的１６ＳｒＲＮＡ基因拷贝数作对数转换用于统计学分析。?１７５?表２研究对象基本特征导形成的肠粘膜生物屏障，是肠道粘膜屏障的重要组成部分，是人体内重要的微生态平衡系统，在人体的健康及疾病的发生发展中发挥重要作用。肠道菌群众多，双歧杆菌是肠道主要优势菌群之一，它和嗜酸乳杆菌都具有重要生理功能，对宿主健康发挥重要作用。大肠杆菌和粪肠球菌也是肠道内数量较多的菌群，具有生理作用和致病作用两方面，是重要的条件致病菌。这四种菌群在机体生理、病理状态下发挥重要作用，在粪便中含量相对稳定，所以本研究以这四种菌群为代表研究肠道菌群。我们研究发现，无论透析组还是非透析组尿毒症患者，粪便长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌浓度明显降低，大肠杆菌和粪肠球菌浓度均明显升高，注：Ｈｂ：血红蛋白；Ａｌｂ：白蛋白；ＣｙｓＣ：胱抑素Ｃ；与对照组比较，ａＰ＜０．０１；与非透析组比较，ｂｐ＜０．０５这种变化的具体机制尚不十分明确，可能的机制有【ｌ。”】：（１）肠道ｐＨ值：尿毒症时血液中尿素浓度明显升高，弥散到肠腔后经过细菌水解产生氨，肠道中氨浓度增加使粪便ｐＨ值升高，最终使肠道需氧菌大量繁殖；（２）尿毒症时，肠上皮细胞结构受到破坏，小肠绒毛缩短，益生菌与肠上皮细胞的粘附能力减弱，随粪便排出增加，导致肠道内益生菌数量减少；（３）尿毒症肠腔内含氮物质增多也可以引起菌群失调。尿毒症时肠腔内尿素氮、肌酐浓度明显升高，并且大多数患者存在程度不同的肠蠕动减慢、消化吸收功能降低，导致蛋白质、氨基酸在肠腔内潴留，细菌酶促作用有了充足的底物，刺激大肠杆菌大量增殖；（４）肠壁瘀血、水肿，使肠壁局部抵抗力下降，肠道菌群异位。双歧杆菌对维持肠粘膜微生态屏障的完整性、改善尿毒症症状十分重要，可以通过酵解碳水化合物产生乙酸和乳酸抑制肠内腐败菌生长。研究发现，服用长双歧杆菌可以显著降低透析前的血清同型半胱氨酸、三酰甘油和硫酸吗ｌ哚浓度，从而改善患者症状，降低尿毒症相关并发症ｎ４１。三、健康对照组和尿毒症组粪便菌群浓度的变化健康对照组、非透析组、透析组３组粪便各菌群浓度见表３。与对照组相比，尿毒症透析组和非透析组粪便长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌浓度均明显降低（均Ｐ＜Ｏ．０１），透析组略低于非透析组，但差异无统计学意义。与对照组相比，尿毒症透析组和非透析组粪便大肠杆菌和粪肠球菌浓度均明显升高（均Ｐ＜０．０５），透析组与非透析组无差异。四、尿毒症患者肠道菌群与微炎性状态的关系以ｈｓ—ＣＲＰ为因变量Ｙ，检测的４种肠道菌群为自变量ｘ，做逐步回归分析，选人方程的有嗜酸乳杆菌和粪肠球菌（Ｐ＜０．０５），回归方程为：Ｙｈ。．ｃＲＰ＝５７．９７－９．９１Ｘ嗜酸乳杆菌＋２．２６Ｘ粪肠球菌讨论肠道菌群参与了许多尿毒症毒素的产生，如硫酸吲哚和Ｐ．甲酚，而Ｐ一甲酚与透析患者的死亡率密切相关”５１，硫酸吲哚酚可以加速慢性肾脏病由肠道内益生菌（双歧杆菌、乳酸杆菌等）主表３健康对照组、非透析组、透析组各菌群浓度表［１９（拷贝数／克粪便），ｉ±ｓ］注：与对照组比较，ａｐ＜ｏ．０１，ｂＰ＜０．０５万方数据?１７６?圭垡竖膣痘苤志２Ｑ！垒生３目筮３Ｑ鲞筮３翅ｇｈ遮Ｊ奠￡Ｐｈ塑！，丛塑出２Ｑ！生ＹＱ！：３Ｑ，奠Ｑ：３的进展ｕ６１。大肠杆菌分解色氨酸产生吲哚，吸收入血后在肝脏合成硫酸吲哚酚，硫酸吲哚酚是促进慢性肾脏病进展的重要物质。双歧杆菌不能激活色氨酸酶，不产生吲哚，因此Ｅｌ服双歧杆菌可以降低血清中硫酸吲哚酚浓度，减少尿毒症毒素的产生，从而延缓慢性肾脏病进展”４Ｉ。慢性肾脏病患者存在微炎性状态，有研究发现肠道细菌移位可诱发微炎性反应”“。本研究发现，尿毒症患者肠道菌群明显紊乱，表现为益生菌减少，致病菌增加。肠道菌群的这种变化对患者微炎性状态有什么影响？经过逐步回归分析，我们发现尿毒症患者炎性反应与嗜酸乳杆菌存在负相关关系，与粪肠球菌存在正相关关系，反映益生菌嗜酸乳杆菌对炎性反应有抑制效应，而粪肠球菌对炎性反应有增强效应。本研究发现炎性状态与长双歧杆菌和大肠杆菌的关系无明显统计学意义，出现这种状况的原因可能有：（１）影响炎性反应的因素众多，这两种细菌在其中的作用较小；（２）本研究样本量相对较小，尚不能排除其他因素的干扰；（３）肠道菌群是一个复杂的微生态，单纯以此四种细菌为代表不能完全反应患者体内的真实情况。下一步我们将扩大样本量，应用宏基因组测序构建尿毒症患者肠道菌群基因文库，研究其与尿毒症炎性等相关危险因素的关系。目前有关尿毒症患者肠道内微生态平衡与患者预后关系的研究尚不多，需要更多的基础和临床研究探索肠道菌群的意义，需要更多的随机对照研究以证实维持和修复肠道菌群对改善慢性肾脏病患者预后的意义。参考文献ＢｏｓｓｃｈｅｒＤ，ＢｒｅｙｎａｅｒｔＡ，ＰｉｅｔｅｒｓＬ，ｅｔａ１．Ｆｏｏｄ—ｂａｓｅｄｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｔｏｍｏｄｕｌａｔｅｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｂｉｏｔａａｎｄｔｈｅｉｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄｈｅａｌｔｈｅｆｆｅｃｔｓ［Ｊ］．ＪＰｈｙｓｉｏｌＰｈａｒｍａｃｏｌ，２００９，Ｓｕｐｐｌ６：５—１１．［２］ＨｏｏｐｅｒＬＶ．Ｄｏｓｙｍｂｉｏｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｓｕｂｖｅｒｔｈｏｓｔｉｍｍｕｎｉｔｙ？［Ｊ］．ＮａｔＲｅｖＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００９，７：３６７—３７４．【３］３ＫａｙｓｅｎＧＡ．Ｔｈｅｍｉｃｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｓｔａｔｅｉｎｕｒｅｍｉａ：ｃａｕｓｅｓａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ［Ｊ］．ＪＡｍＳｏｃＮｅｐｈｒｏｌ，２００１，１２：１５４９—１５５７万方数据［４】ＭｉｙａｍｏｔｏＴ，ＣａｒｒｅｒｏＪＪ，ＳｔｅｎｖｉｎｋｅｌＰ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｓａｒｉｓｋｆａｃｔｏｒａｎｄｔａｒｇｅｔｆｏｒｔｈｅｒａｐｙｉｎｃｈｒｏｎｉｃｋｉｄｎｅｙｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＣｕｒｒＯｐｉｎＮｅｐｈｒｏｌＨｙｐｅｒｔｅｎｓ，２０１１，２０：６６２—６６８．［５】ＴｓａｏＹＴ，ＨｓｕＹＪ，ＣｈｕＮＦ，ｅｔａ１．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆｐｌａｓｍａａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎａｎｄｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｒｉｓｋｐｒｏｆｉｌｅｓｉｎｎｏｎｄｉａｂｅｔｉｃｕｒｅｍｉｃｐａｔｉｅｎｔｓｏｎｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｄｉａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＪＮｅｐｈｒｏｌ，２００８，２１：７４４—７５２．【６】ＢｕｒａｎａｋａｒｌＣ，ＴｒｉｓｉｒｉｒｏｊＭ，ＰｏｎｄｅｅｎａｎａＳ，ｅｔａ１．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｂｅｔｗｅｅｎｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｍａｒｋｅｒｓａｎｄｒｅｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｉｎｒｅｎａｌａｚｏｔｅｍｉｃｄｏｇｓ［Ｊ］．ＲｅｓＶｅｔＳｃｉ，２００９，８６：３０９．３１３．ＭａｓｓｙＺＡ，ＳｔｅｎｖｉｎｋｅｌＰ，ＤｍｅｋｅＴＢ．Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｉｎｃｈｒｏｎｉｃｋｉｄｎｅｙｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＳｅｍｉｎＤｉａｌ，２００９，２２：４０５—４０８．ＳｕｚｕｋｉＹ，Ｒｕｉｚ—ＯｒｔｅｇａＭ，ＬｏｒｅｎｚｏＯ，ｅｔａ１．ＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＩＩ［Ｊ］．ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ，２００３，３５：８８１—９００．ＭｕｓｓｏＧ，ＧａｍｂｉｎｏＲ，ＣａｓｓａｄｅｒＭ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎｇｕｔｍｉｃｒｏｂｉｏｔａａｎｄｈｏｓｔｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｐｒｅｄｉｓｐｏｓｉｎｇｔｏｏｂｅｓｉｔｙａｎｄｄｉａｂｅｔｅｓ［Ｊ］．ＡｎｎｕＲｅｖＭｅｄ，２０１１，６２：３６１—３８０．［１０】ＲｉｎｔｔｉｌｌｉＴ，ＫａｓｓｉｎｅｎＡ，ＭａｌｉｎｅｎＥ，ｅｔａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｎｅｘｔｅｎｓｉｖｅｓｅｔｏｆ１６ＳｒＤＮＡ—ｔａｒｇｅｔｅｄｐｒｉｍｅｒｓｆｏｒｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｉｃａｎｄｉｎｄｉｇｅｎｏｕｓｂａｃｔｅｒｉａｉｎｆａｅｃａｌｓａｍｐｌｅｓｂｙｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ［Ｊ］．ＪＡｐｐｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００４，９７：ｌ１６６—１１７７．ＭａｓｕｄａＴＡ，ＩｓｏＹ，ＦｕｎａｈａｓｈｉＳ，ｅｔａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｌｏｗｅｒｂｏｗｅｌｐｅｒｆｏｒａｔｉｏｎｗｉｔｈｃｈｒｏｎｉｃｒｅｎａｌｆａｉｌｕｒｅ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００８，５５：１６４０—１６４４．［１２】张盼，魏萌，蒋红利，等．尿毒症大鼠肠道细菌移位诱发微炎性反应［Ｊ］中华肾脏病杂志，２０１３，２９：６１ｌ一６１５．［１３］魏萌，蒋红利，王志刚，等．尿毒症大鼠肠道菌群失调及其与微炎症状态的相关性［Ｊ］．西安交通大学学报（医学版），２０１３，３４：３４１—３４５．【１４］ＭａｒｔｉｎｓＦＳ，ＳｉｌｖａＡＡ，ＶｉｅｉｒａＡＴ，ｅｔａ１．ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｎｉｍａｌｉｓ，Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｃａｓｅｉａｎｄＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｂｏｕｌａｒｄｉｉｐｒｏｂｉｏｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ［Ｊ］．ＡｒｃｈＭｉｃｒｏｂｉｏｌ。２００９。１９１：６２３—６３０．［１５］ＧｏｔｏＳ，ＹｏｓｈｉｙａＫ，ＫｉｔａＴ，ｅｔａ１．Ｕｒｅｍｉｃｔｏｘｉｎｓａｎｄｏｒａｌａｄｓｏｒｂｅｎｔｓ［Ｊ］．ＴｈｅｒＡｐｈｅｒＤｉａｌ，２０１１，１５：１３２—１３４．【１６】ＫｏｔａｎｋｏＰ，ＣａｒｔｅｒＭ，ＬｅｖｉｎＮＷ．Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｂａｃｔｅｒｉａｌｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ一一ａｐｏｔｅｎｔｉａｌｓｏｕｒｃｅｏｆｃｈｒｏｎｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃｈｒｏｎｉｃｋｉｄｎｅｙｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＮｅｐｈｒｏｌＤｉａｌＴｒａｎｓｐｌａｎｔ，２００６，２１：２０５７—２０６０（收稿日期：２０１３—１０—１８）（本文编辑：王欣）尿毒症患者肠道菌群变化的研究

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：

王尊松， 崔美玉， 唐利军， 李文斌， 魏勇， 贾晓妍， 孔祥雷， 许冬梅山东省千佛山医院肾内科,济南,250014中华肾脏病杂志

Chinese Journal of Nephrology2014,30(3)1次

参考文献(16条)

1.Bosscher D;Breynaert A;Pieters L Food-based strategies to modulate the composition of the intestinal microbiotaand their associated health effects 2009(Suppl 6)

2.Hooper LV Do symbiotic bacteria subvert host immunity 2009

3.Kaysen GA The microinflammatory state in uremia:causes and potential consequences 2001

4.Miyamoto T;Carrero JJ;Stenvinkel P Inflammation as a risk factor and target for therapy in chronic kidney disease 2011

5.Tsao YT;Hsu YJ;Chu NF Association of plasma adiponectin and cardiovascular risk profiles in nondiabetic uremicpatients on peritoneal dialysis 2008

6.Buranakarl C;Trisiriroj M;Pondeenana S Relationships between oxidative stress markers and red blood cellcharacteristics in renal azotemic dogs 2009

7.Massy ZA;Stenvinkel P;Drueke TB The role of oxidative stress in chronic kidney disease 20098.Suzuki Y;Ruiz-Ortega M;Lorenzo O Inflammation and angiotensin II 2003

9.Musso G;Gambino R;Cassader M Interactions between gut microbiota and host metabolism predisposing to obesity anddiabetes 2011

10.Rinttil(a) T;Kassinen A;Malinen E Development of an extensive set of 16S rDNA targeted primers forquantification of pathogenic and indigenous bacteria in faecal samples by real-time PCR 2004

11.Masuda TA;Iso Y;Funahashi S Clinical characteristics of lower bowel perforation with chronic renal failure 200812.张盼,魏萌,蒋红利,任怡,史珂慧,王斐倩 尿毒症大鼠肠道细菌移位诱发微炎性反应[期刊论文]-中华肾脏病杂志 2013(8)13.魏萌,蒋红利,王志刚,王旭珍,王萌 尿毒症大鼠肠道菌群失调及其与微炎症状态的相关性[期刊论文]-西安交通大学学报（医学版） 2013(3)

14.Martins FS;Silva AA;Vieira AT Comparative study of Bifidobacterium animalis,Escherichia coli,Lactobacillus caseiand Saccharomyces boulardii probiotic properties 2009

15.Goto S;Yoshiya K;Kita T Uremic toxins and oral adsorbents 2011

16.Kotanko P;Carter M;Levin NW Intestinal bacterial microflora--a potential source of chronic inflammation inpatients with chronic kidney disease 2006

引证文献(1条)1.金晓倩 维持性血液透析终末期肾病患者肠道优势菌群多样性变化研究[期刊论文]-中国微生态学杂志 2015(05)

引用本文格式：王尊松.崔美玉.唐利军.李文斌.魏勇.贾晓妍.孔祥雷.许冬梅 尿毒症患者肠道菌群变化的研究[期刊论文]-中华肾脏病杂志 2014(3)

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