生物技术题 - 25

名词解释：（每题3分） 1、背景着色 2、一抗和二抗 3、探针

4、免疫组织化学技术

答案：

名词解释：1、是指免疫组化过程中产生的非检测抗原（或抗体）的着色，又称非特异性着色，往往造成假阳性。可干扰显色结果的判断，因此染色时，应尽量减小或消除背景着色。 2、第一抗体，简称一抗（Ab1）：是针对待测抗原的抗体。第二抗体，简称二抗(Ab2)：是用一抗作为抗原免疫另一种动物制备的抗体3、探针是指已知碱基序列的、用标记物标记了的一段核苷酸片断，用来检测组织或细胞内的某一特定DNA片段或RNA片段。

4、是应用抗原、抗体间特异性免疫反应的原理,用标记物标记的已知抗体（或抗原）检测组织细胞内的蛋白质、多肽等相应的抗原（或抗体）的方法。 选择题

[A型题]

一、选择题

（一）A1型题(标准型)

1.免疫组化技术的关键步骤是 A.标本处理

B.抗体的处理与保存 C.免疫染色

D.设立对照试验 E.结果判断

2.免疫组化技术的首要试剂是 A.抗原 B.抗体 C.标记物 D.固定剂 E.洗涤液

3.酶免疫组化技术中，关于标本处理的说法正确的是

A.充分洗后于室温用0.3%H2O2和80%甲醇处理20～30min。 B.充分洗后于室温用0.3%H2O2和80%甲醇处理40～50min。 C.充分洗后于室温用0.5%H2O2和90%甲醇处理20～30min。 D.充分洗后于4℃用0.3%H2O2和80%甲醇处理20～30min。 E.充分洗后于4℃用0.3%H2O2和80%甲醇处理40～50min。 4.PAP法是Sterberger等于哪一年建立的 A.1950 B.1960 C.1970

D.1980 E.1990

5.PAP复合物中的酶是 A.辣根过氧化物酶 B.碱性磷酸酶 C.葡萄糖氧化酶 D.胃蛋白酶 E.胶原酶

6.PAP的特点是几个抗酶抗体和3个过氧化物酶分子组成复合物，结构非常稳定 A.1 B.2 C.3 D.4 E.6

7.双桥PAP法建立于哪一年 A.1955 B.1965 C.1970 D.1975 E.1985

8.PAP法中的“桥”是 A.第一抗体 B. 第二抗体 C. 第三抗体 D.亲和素 E.第四抗体

9.ABC技术由美籍华人Hsu于哪一年建立，已广泛应用于免疫学检测技术 A.1961 B.1975 C.1981 D.1985 E.1990

10.ABC法中的“桥”是指 A.第一抗体 B. 第二抗体 C. 第三抗体 D.亲和素

E.链霉素亲和素

11.LSAB法的操作时间仅为ABC法的多少，具有实用价值。 A.1/2左右 B.1/3左右 C.1/4左右 D.1/5左右 E.1/6左右

12.双标记荧光免疫法中，如用罗丹明标记A抗体，呈什么颜色，用异硫氰酸荧光素标记B抗体，呈什么颜色 A.黄绿色，橘红色 B.橘红色，黄绿色 C.红色，淡黄色 D.淡黄色，红色 E.橙黄色，浅绿色

13. 荧光免疫间接法比直接法荧光增强多少倍，敏感性提高多少倍 A.1～2 B.2～4 C.3～6 D.4～8 E.5～10

14.免疫组化法吸收试验是用过量已知抗原与抗体在多少度以下充分反应，离心后再行免疫组化染色 A.4℃ B.20℃ C.40℃ D.37℃ E.50℃

15.胶体金标记蛋白加稳定剂后，在一定浓度下，4℃可保存多久 A.几天 B.几个星期 C.半个月 D.几个月 E.几年

16. 胶体金标记蛋白时，待标记蛋白的实际用量是在稳定1ml胶体金所需蛋白基础上再增加多少

A. 5～10% B. 10～20% C. 20～30% D. 30～40% E. 40～50%

17.铁蛋白是一种含铁 多少，相对分子量为650～900KD的球形蛋白 A.15% B.20% C.25% D.30% E.35%

18. 铁蛋白含铁核心直径为多少 A.3～4.5nm B.4～7.5nm C.3.5～7nm D.4.5～8nm

E.2～6nm

19. 铁蛋白的中央的含铁核心约含有多少个铁原子 A.100～1000 B. 1000～2000 C. 2000～3000 D. 3000～4000 E. 4000～5000

20.铁蛋白是由几个亚基组成的高电子密度氢氧化铁胶态分子团 A.2 B.3 C.4 D.5 E.6

21.下列哪种方法制备的胶体金是红色 A.白磷 B.维生素C C.乙醇-超声波 D.枸橼酸三钠 E.硼酸钠

22．下列哪种方法制备的胶体金是酒红色 A.白磷 B.维生素C C.乙醇-超声波 D.枸橼酸三钠 E.硼酸钠

23．PAS反应是检测组织内的： A.核酸 B.脂 C.蛋白质 D.多糖 E.抗原

（二）A1型题（否定型）

1.下列技术中不属于免疫细胞组织化学技术 A.酶免疫组织化学技术 B.荧光免疫组织化学技术

C.亲和免疫细胞组织化学技术

D.免疫金（银）细胞染色组织化学技术 E.ELISA

2.组织细胞标本固定的目的，下列说法不正确的是 A.使细胞内蛋白质凝固 B.防止细胞自溶

C.保持细胞固有形态与结构 D.使细胞脱落

E.保存组织细胞的抗原性

3.免疫染色过程中使用蛋白酶消化法，下列说法错误的是 A.暴露抗原

B.增加细胞和组织的通透性

C.利于抗体与抗原最大限度的结合 D.限制抗体与抗原的结合 E.减少非特异性干扰

4.关于石蜡切片，下列说法不正确的是 A.组织块经固定、脱水处理后，浸蜡包埋 B.4℃保存备用

C.切片厚度为2～3um

D.是观察组织细胞结构的理想方法 E.不能长期保存

5.关于冰冻切片，下列说法错误的是 A.取新鲜组织块迅速冷冻（－70℃） B.切成5～10um薄片

C.抗原的保存量不如石蜡切片多 D.制片方法简单

E.低温冰箱保存备用

6.关于活体组织标本，错误的是 A.取材于病变组织

B.取病变组织与正常组织交界处 C.要求大小适中

D.应减少对组织标本的损伤与挤压 E.应取正常组织

7.关于酶免疫组化技术的说法，不正确的是 A.敏感性较荧光标记技术高 B.可用普通光学显微镜观察

C.便于对组织细胞微细结构的分辨 D.染色标本不能长期保存 E.可用电子显微镜观察结果 8.关于PAP的说法错误的是 A.结构稳定

B.不存在游离的免疫球蛋白

C.染色冲洗过程中酶分子不易脱落 D.特异性、敏感性和重复性好

E.敏感性比直接法、间接法高，但比酶桥法低 9.下列哪项不是激光器的特征 A.单色性强 B.波长范围较宽 C.亮度高 D.相干性好 E.方向性强

10.免疫组化技术标本的来源，错误的是

3.答：将荧光素标记的已知抗体（或抗原）与切片（印片）中相应抗原（或抗体）直接发生反应，以检测组织与细胞标本中的靶抗原（或抗体）。

4.免疫电镜技术是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的高分辨力相结合的在亚细胞和超微结构水平上对抗原进行定位分析的一种高度精确、灵敏的技术。

5.答：胶体金颗粒标记蛋白质的原理是金颗粒表面负电荷与蛋白质正电荷之间非共价键的静电引力互相吸引，当达到范登华引力半径范围之内时，蛋白质与金颗粒表面形成牢固结合。

六、论述题

1.答：酶免疫组化技术的原理：

酶免疫组化技术是利用酶标记已知抗体（或抗原），然后与组织标本中相应抗原（或抗体）在一定条件下相互结合形成带酶分子的复合物，酶遇到底物时，能催化底物水解，或氧化或还原，产生有色的不溶性产物，出现显色反应，在显微镜下进行细胞与组织表面或内部某种抗原成分的定位观察分析。

酶免疫组化技术的特点：敏感性较免疫荧光技术更高，可用普通光学显微镜和电子显微镜观察结果，便于对组织细胞微细结构的分辩，染色标本可长期保存。 2.答：免疫标记电镜技术的原理：

免疫标记电镜技术是利用电镜下可见的示踪标记物，如铁蛋白、胶体金等电子致密物质标记特异性抗体（或抗原），使之与组织超薄切片中的相应抗原（或抗体）反应，形成不溶性免疫复合物，用电子显微镜观察可见的标记物，间接证实免疫反应的发生。标记物所在位置即为抗原抗体发生反应的部位。同时，由于电子显微镜的高分辩力，可以对组织细胞进行超微结构水平上的分析。此技术成功的关键是：1）对细胞超微结构的完好保存；2）保持被检细胞或其亚细胞结构的抗原表位，其抗原性不受损伤；3）选择的免疫试剂能顺利穿透组织细胞结构与抗原结合。

论述题

1. 试述组织化学技术的基本原理和与生物化学技术的的基本区别。 2. 试述任意3种酶组织化学技术的反应原理。

3. 试述免疫荧光双标记技术（间接法）的原理和当两种一抗及两种二抗分别混合使用时应注意的问题。

4. 试述免疫组织化学ABC技术中，组织抗原、一抗、二抗和ABC如何依次相互结合的。 5. 试述杂交严格度的定义、影响因素及控制杂交严格度的方法。 6. 试述原位杂交组织化学的原理及在杂交反应过程中注意事项。

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