一测多评法建立的技术指南

第36卷第6期2011年3月

Vol.36，Issue6March，2011

一测多评法建立的技术指南

王智民

1，3*

333

，钱忠直2，张启伟1，，朱晶晶1，，高慧敏1，，王峥涛4

(1．中国中医科学院中药研究所，北京100700;

2．国家药典委员会，北京100050;3．中药质量控制技术国家工程实验室，北京100700;

4．上海中药标准化研究中心，上海201203)

中药多成分、多功效的作用特点决定着单一成分难以表达中药的质量，多成分同步质量控制模式应运而生，并得到了迅速普及;而现实中的对照品供需矛盾和多指标质控高昂的检测成本反过来又限制了多指标质量控制模式在实际生产、科研、监督中的应用。那么，能否找到一种方法既能实现多成分的质量控制，又能克服对照品紧缺和检测成本高的困难呢?

本着“发挥科研为标准服务，标准为生产实际服务”的指导思想，考虑到中药有效成分多为类群、类群间存在某些内在关系的特性，发挥科研工作者拥有大量单体成分(对照品)的优势，探索同类成分间的相关关系，在严格的方法学和交叉验证的基础上，使未来的质量标准在只测定某个代表性成分(易得、廉价、有效)，同时可计算出其它待测有效成分的含量，使其计算值与实测值符合定量方法学的要求。我们把这种质量控制方法称为“一测componentsbysingle-多评”法(quantitativeanalysisofmulti-2010年版一marker，QAMS)。该方法得到了《中国药典》

部的收录，为进一步规范QAMS的方法学考察、方法学验证等内容，制定本技术指南。1

适用范围

本方法适用于对照品难得或制备成本高或不稳定的情况下同类多成分同时测定。2

原理

在一定的线性范围，成分的量(质量或浓度)与检测器a，b，…，i，…)质量评价时，响应成正比。在多指标(s，以药材(或成药)中某一典型有效成分作内参物(s)，建立内参物…，i，…)间的相对校正因子(RCF，与其它待测成分(a，b，fsa，fsb，fsc，…)，按下式计算:

fsAs/Cs

=

fiAi/Ci

fsi=

(1)

Cs为内参物对照品s式中As为内参物对照品s峰面积，

Ai为某待测成分对照品i峰面积;Ci为某待测成分对浓度，照品i浓度。

在方法学建立时，主要是求出内参物与各待测成分间的RCF，并把它作为一个常数用于含量测定中［药典附录VID。3(3)］

在测定含量时，内参物(s)的浓度可按常规方法进行测…)，定(Cs)(药典附录ⅥD);应用RCF(fsa，fsb，fsc，结合内…，i，…)的浓度，参物(s)实测值Cs，计算待测成分(a，b，见公式2。

Ci=fsi×Cs×

AiAs

(2)

Ci为供试品式中Ai为供试品中待测成分i的峰面积，

As为供试品中内参物s的峰面积，Cs中待测成分i的浓度，

fsi为内参物s对待测成分i的为供试品中内参物s的浓度，校正因子。33.13.1.1

主要内容及技术要求检测指标选择质控指标

原则上应选择药材中药理作用比较明确

的有效成分或与药材临床功效具有相关性的指标性成分;作内参物的对照品(s)应是相对易得者;其他检测指标(a，b，…，i，…)应是不易得到或制备难度大或成本高或不稳定者。3.1.2

待测成分预试验

在3.1中选择的待测成分，有时

可能只是文献数据，能否作为QAMS质控指标，需进行实际验证。因此，在确定了多成分同时测定的色谱条件后，应对收集的样品进行初步分析，重点关注分析条件和各拟测成分峰面积范围等信息。3.1.33.2

待测成分含量样品收集

选择有代表性药材作为研究样本，样本数应满足统计学的相关要求，原则上拟建立质量标准的药材样品不低于40

…，i，…)应有相对待测成分(a，b，

－1

较高的含量，原则上应≥1mg·g。

［稿件编号］20110301003

［“重大新药创制”基金项目］国家科技重大专项(2009ZX09308-003，2009ZX09301-005，2009ZX09052-021);中医药行业科技专业项目(200707009)［通信作者］

*

王智民，研究员，研究方向中药化学与中药质量控

Tel/Fax:(010)84014128，E-mail:zhmn123@制，

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第36卷第6期2011年3月

Vol.36，Issue6March，2011

GAP基地的药材和饮片批。药材应包括主产地、道地产区、样本。3.3

对照品溶液制备

实验中所用的自制对照品需经严格的纯度检查，纯度应大于98%，必要时注明含量，供校正用。

配制内参物对照品溶液:分别取各待测成分对照品(s，a，b，…，i，…)一定量，精密称定，采用适宜的溶剂，制成含适宜浓度的混合溶液，用于RCF的计算。3.43.53.5.1

HPLC分析条件的确定

参照(药典附录ⅥD)的要求，完成色谱条件的优化。方法学考察多成分同时测定

参照药典附录ⅩⅧA的要求完

a，b，…，i，…)为指标，以各待测成分(s，以常规的方法法，

(如外标一点法或两点法)测定它们在药材中的含量。

数据要求:测定样品应≥30批，以尽可能反映各成分的实际分布情况。3.6.2

计算值

对3.6.1项下各样品实测数据，以成分s为参

照物，利用3.5.2项下的RCF值，按照公式2计算，求出其他待b，…，i，…)的含量。测成分(a，3.6.3行性。3.6.4

方法再验证

用所建立的QAMS法进行未测样品的

实际测算，得到待测成分的含量;然后再以多成分同时测定方法进行反证，进一步验证QAMS法的可行性和可重复性。

数据要求:验证样品应≥10批。3.7

制定质量标准时RCF的确定

为了方便标准的使用，应对合乎3.5.2项下的RCF在纳入标准时做出规定:以样品含量的计算值与实测值间相对偏差小于5%为考量尺度，尽可能少地保留RCF的有效数字。3.8

待测成分的色谱峰定位

色谱峰的准确定位是保证QAMS法应用的前提，一般可以采用保留时间差或相对保留值等参数结合色谱图整体特征，以及每个峰的紫外吸收特征来定位其余待测成分(a，b，…，i，…)色谱峰。相对保留值指各待测成分与内参物s间保留时间的比值，计算公式:ras=tRa/tRs;保留时间差指各待测成分与内参物s间保留时间的差值，计算公式:ΔtRas=tRa－tRs。

在3.5.2项下，应分别考察相对保留值或保留时间差2种参数在不同品牌仪器和不同规格色谱柱中的重现性，选取RSD值小的一种参数作为峰定位依据。RSD＜5%时，符合要求;RSD＞5%，应进一步考察或在制订标准时对相应条件进行限定，并列入该品种的标准正文中，或者寻找其他峰定位依据。

对于成分复杂的样品，通过相对保留值或保留时间差等参数不能准确定位时，可选用定性用的对照品或“对照提。取物”

［责任编辑

马超一］

数据比较

对实测值和计算值进行分析比较(如相

t检验、对偏差、准确度等)，以验证QAMS法的合理性和可

成准确度、精密度、专属性、定量限、检测限、线性、范围、耐用性等各项内容的考察，应符合要求。3.5.2考察。

利用对照品溶液和确定的分析条件，建立内参物(s)与…，i，…)之间的RCF(fsa，fsb，fsi，…)。待测成分(a，b，

待测成分RCF耐用性系指在测定条件有小的变动时，RCF对影响的承受程度。为使所建立的各待测成分的RCF能用于常规检验，应对待测成分RCF耐用性进行全面的考察，如果测试条件要求苛刻，则应加以限定。考察内容包括:RCF在各种条件(流动相的组成比例、pH值、柱温、流速及检测波长等的微小改变时和使用不同仪器、不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱、不同实验室、不同操作人员等)的耐用性。对于RCF值影响大的因素应具体分析后加以限定，以确保方法有效。

要求:HPLC色谱仪、常用色谱柱、实验室、操作人均应≥3。若某因素使RCF产生较大偏离时(如小于或大于RCF平均值的5%)，应增加考察数量，经考察仍大于5%，应对该因素进行规定，并列入该品种的标准正文中。

经系统考察后，综合考虑影响RCF的各种影响因素，在RSD小于5%的情况下，取3.5.2项下的平均值作为RCF值;大于5%时，应对RCF影响大的因素进行限定。3.63.6.1

验证实测值

按照3.5.1项下建立的多成分同时测定方

待测成分RCF测定

QAMS法的重点在于测定各待

a，b，…，i，…)间的RCF，测成分(s，并对其耐用性进行系统

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本文来源：https://www.bwwdw.com/article/yse1.html