快速检测PRRSV的返转录环介导等温扩增试验(RT-;AMP)方法的建立及评估

由PRRSV引起的PRRS对近年来 越南的经济产生重大损失。环介导等温扩增(LAMP)是一种新的核酸扩增方法,在等 温条件下具有高的特异性,敏感性和快速性。建立RT-LAMP检测PRRSV,这将会成为越南现有条件下一种强有力的分子技术。

快速检测ＰＲＲＳＶ的返转录环介导等

温扩增试验（ＲＴ－；ＡＭＰ）方法的建立及评估

Ｖｏ　Ｋｈａｎｈ　Ｈｕｎｇ

引言

　由ＰＲＲＳＶ引起的ＰＲＲＳ对近年来越南的经济产生重大

损失。环介导等温扩增（ＬＡＭＰ）是一种新的核酸扩增方法，

在等温条件下具有高的特异性，敏感性和快速性。建立

ＲＴ－ＬＡＭＰ检测ＰＲＲＳＶ，这将会成为越南现有条件下一种强

有力的分子技术。

材料与方法

不同的病毒株用于评估检测ＰＲＲＳＶ的ＲＴ－ＬＡＭＰ的特

异性和敏感性。ＰＣＶ２毒株和ＰＲＲＳＶ株来源于越南胡志明

农林大学兽医学院。此外，经ＲＴ－ＰＣＲ和测序分型从Ｉｎｇｅｌｖａｃ

分离的疫苗毒为北美（ＮＡ）型ＰＲＲＳＶ，从Ａｍｅｒｖａｃ分离的

疫苗毒作为欧洲（ＥＵ）型ＰＲＲＳＶ。为了确定ＲＴ－ＬＡＭＰ方法

对ＰＲＲＳＶ的特异性，分别提取ＰＣＶ２、欧洲型ＰＲＲＳＶ、北

美型ＰＲＲＳＶ、不含ＰＲＲＳＶ猪血的ＤＮＡ和ＲＮＡ和蒸馏水

作为模板。在病毒基因组ＯＰＲＦ６区（１４６００－１４７８０）设计引

物。另一方面扩增产物使用ＨａｅⅢ进行酶切，确定方法的

特异性。为了检验该试验的敏感性，不同浓度ＰＲＲＳＶ　ＲＮＡ

模板，从１０８－１００拷贝，用于ＲＴ－ＬＡＭＰ试验。然后电泳，

在ＵＶ光下观察结果或ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ染色后裸眼观察结果。

郝伟伟

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