糖酵解中间产物的测定

华南农业大学实验报告

专业班次 11农学一班 组别201130010110 题目 糖酵解中间产物的测定 姓 名 梁志雄 日期

【实验原理】

利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷激甘油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸甘油醛使不自发分解。然后用2，4—二硝基苯肼与3-磷酸甘油醛在碱性条件下形成2，4—二硝基苯肼—丙糖的棕色复合物，其棕色程度与3-磷酸甘油醛含量成正比

【实验材料和试剂】

实验仪器：恒温水浴锅、离心机、电子天平 实验用品：试管、移液管、玻璃棒

实验材料与试剂：酵母、10%三氯乙酸、5%葡萄糖、0.75mol/L NaOH、0.002mol/L碘乙酸、2，4-二硝基苯肼溶液、0.56mol/L硫酸肼

【实验步骤】

1、发酵过程观察 取干燥试管3支，编号1~3，分别加入0.2g酵母，再按下表所示加入试剂

37摄氏度保温时用留在试管中的玻璃棒间断搅拌1~2次。

2、终止发酵和补加试剂 37摄氏度保温45min后，按下表所示添加试剂

表二

3、发酵液过滤 上述3支试管分别过滤，取滤液用于显色鉴定

4、显色鉴定 取3支试管，按下表所列顺序加入试剂，观察各管颜色的深浅，记录

【实验记录】 实验记录与上述表格中

【实验结论】 1、

在步骤1中，三氯乙酸是一种蛋白酶的变性剂，可以是酵母中的所有的酶失活，使糖酵解反应无法或只可很小程度上进行。在表一的1号试管中，由于加入了三氯乙酸，使酵母中的酶失活，不能分解葡萄糖，所以不能产生气泡；至于2号试管，由于加入了碘乙酸和硫酸肼，使糖酵解反应过程中的3-磷酸甘油醛累积，但是它门不能使反应完全停留在生成3-磷酸甘油醛这个阶段，碘乙酸和硫酸肼只是起到了延缓的作用，所以还是有部分葡萄糖被酵母菌分解生成CO2和H2O，3号试管中做为空白对照，葡萄糖被酵母菌分解，产生大量CO2和H2O

2、 3、

步骤2中，在表二的2号和3号试管中分别加入三氯乙酸是让两试管中的葡萄糖分解反应终止，加入试剂后立刻用玻璃棒搅拌是因为酶的作用很迅速； 步骤4的表四中，两次加入氢氧化钠主要都是为了使反应环境为碱性，使目的反应可以发生

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