Agilent+1260+高效液相色谱仪使用维护保养操作规则

高效液相色谱仪使用维护保养操作规则

优胜美特制药有限公司&浙江巨泰药业有限公司

一、目的

制定Agilent 1260型高效液相色谱仪操作维护规程，使操作维护规范化，保证检测结果准确可靠。 二、适用范围

本规程适用于Agilent 1260型高效液相色谱仪的操作维护。 三、职责

QC对本规程的实施负责，项目主管、研发总监对本规程实施进行监督。

高效液相色谱仪使用维护保养操作规则

四、程序内容 4.1仪器配置

本仪器由梯度泵，自动进样器，柱温箱，VWD检测器或DAD检测器和操作软件工作站组成。

4.2操作前的准备

4.2.1流动相的制备 用色谱纯的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水为新鲜制备的重蒸馏水。对规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节，配制好的流动相应通过0.45μm以下的滤膜滤过，用前脱气，应配制足量的流动相。

4.2.2 供试溶液的配制 供试品用规定溶剂配成供试溶液。定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45μm以下的滤膜滤过，必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。

4.2.3 检查上次使用记录和仪器状态，检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的pH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。 4.3仪器的操作 4.3.1 接通电源，打开计算机及工作站其他各部件开关，约30秒后，各部件进入待机状态，指示灯为橘黄色，启动完成。

4.3.2用鼠标双击企业仪器启动程序界面上的Agilent1260仪器图标进入Agilent1260 LC在线色谱工作站，该页面主要由以下几个部分组成：

4.3.2.1最上方为命令栏，依次为文件,控制,方法，分析，序列，数据等；

4.3.2.2命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、新建方法序列、单个样品分析、调用文件、保存文件等；

4.3.2.3左部有五栏从上到下依次为方法，序列，报告，控制，视图五栏。

4.3.2.3.1用鼠标单击【方法】栏进入仪器方法界面，有仪器设置、积分事件、前处理、手动积分修正、平铺显示等。下面介绍以上部分方法的功能。

4.3.2.3.1.1仪器设置：控制运行样品时各部分组件满足的要求，如柱式加热炉的温度.梯度泵的流速，溶剂比例，停止时间，压力限值。检测器的检测波长。自动进样器的进样量。辅助图谱的记录等。

4.3.2.3.1.2积分事件：用于样品的积分，有很多参数控制样品的积分，如阈值、最小面积、宽度、积分关闭等。

4.3.2.3.1.3用鼠标单击【序列】栏进入序列编辑界面。

4.3.2.3.1.4用鼠标单击【报告】栏进入建立报告界面，有归一化，面积百分比，内标法，外标法等报告格式。

4.3.2.3.1.5用鼠标单击【控制】栏进入仪器控制界面，有仪器设置，运行队列，仪器状态三项。下面介绍以上三项的控制功能。

4.3.2.3.1.5.1仪器设置：控制运行样品时各部分组件满足的要求，如柱式加热炉的温度.梯度泵的流速，溶剂比例，停止时间，压力限值。检测器的检测波长。自动进样器的进样量。辅助图谱的记录等。

4.3.2.3.1.5.2运行队列：控制样品运行的顺序。也是提交单针和序列的界面，下面介绍提交样品运行的方法。在运行队列界面上单击鼠标右键出现单次运行/单次分析，序列运行/序列分析等栏，提交单次运行需单击右键后停留在单次运行项后单击鼠标左键，出现单次运

高效液相色谱仪使用维护保养操作规则

行对话框，出现以下几栏，样品ID（样品名称），方法，数据路径，数据文件（数据名称），样品瓶等，单击方法图标，调用已保存在系统内运行样品的方法（即以上介绍的仪器设置），单击数据路径图标将数据保存在你可找到的文件夹内，将数据文件命名，设置好分析对应进样盘的样品瓶后，即可以提交即将要分析的样品了，优先提交即走完当前样品后第一针 4.3.2.3.1.5.3仪器状态：体现仪器运行/预运行/空闲时的状态。单击仪器状态一栏，从左至右依次是自动进样器→梯度泵→

柱温箱→检测器的状态，橘黄色为未就绪状态，绿色为空闲状态，粉色为进样状态，蓝色为运行状态，红色为出错状态。

4.3.2.3.1.5.3.1自动进样器：是系统提交的提取规定位置的样品瓶的执行者，也是吸取样品瓶中定量的样品的操作者。

4.3.2.3.1.5.3.2梯度泵：体现流动相的流动速度和整个系统的压力，A

、B两相的比例。 4.3.2.3.1.5.3.3柱温箱：体现色谱柱所在柱温箱的温度。 4.3.2.3.1.5.3.4检测器：体现样品运行时的检测波长。

4.3.2.3.1.6用鼠标单击【视图】栏出现数据显示，数据，平铺显示三项。

4.3.2.3.1.6.1数据显示下有显示所有数据，平铺数据，重叠数据，在线信号等。 显示所有数据：即打开运行样品时所有记录运行状态的数据图谱。 平铺数据：即将所有运行状态图谱平铺。 重叠数据：即将所有运行状态图谱重叠。

4.3.2.3.1.6.2数据下有手动积分修正，基线检查状态。 4.3.2.3.1.6.3平铺显示下有样品录入。

4.3.2.3.1.7视图下还有一栏：即控制左部五栏的出现和隐藏。

4.3.2.3.1.8最下面一栏为手动积分修正一栏，出现很多操作图标，如积分关闭、分割峰、定义单峰、手动峰等。

4.4色谱条件的设定及数据采集操作过程

4.4.1

按钮，还可以点击每一模块图标中的控制来开或关。把泵上的Purge阀逆时针松开，调流速为3.0ml/min,启动泵，系统开始排气泡，直到管线内（由容器瓶到泵出口）无气泡为止，切换通道继续Purge，直到所用流动相通道中无气泡为止，调流速为1.0ml/min，再把Purge阀顺时针旋紧。

4.4.2流动相设置：单击泵左面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入阻止分析和关泵的流动相体积底限，单击确定。 4.4.3进样及方法的设定:

4.4.3.1

4.4.3.2 柱温箱参数设定：在温度下面的方框内输入温度，选中“与泵和进样器一致”使柱温箱温度一致，单击确定进入下一画面。 4.4.3.3泵参数设定：在流速处输入流量，在溶剂 B处输入另一溶剂体积百分比(A=100-B)，也可插入一行时间表编辑梯度，在“最大压力限度”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子，单击确定进入下一画面。

4.4.3.4 VWD检测器参数的设定

在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm，在“峰宽（响应时间）”下方点击

高效液相色谱仪使用维护保养操作规则

下拉成三角框，选择合适的响应时间，如〉0.1min（2秒响应时间）。点击确定进入下一画面。

4.4.3.5自动进样器参数设定：在进样量输入进样量，选择洗针进样,

输入洗针瓶位置，单击确定进入下一画面。

4.4.3.6 DAD检测器参数的设定

参数设定 检测波长：一般选择最大吸收处的波长，最多可同时检测8个波长。样品带宽：一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无

吸收或低吸收区域。参比带宽：至少要与样品信号的带宽相等，通常情况下用100nm作为缺省值。可以根据所需保存光谱图的张数最多同时设定5个通道采集信号，无需采集光谱时应将“存储”设在“

无”，若做峰纯度检测或优化求知的样品检测条件，建议选择“全部”。峰宽（响应时间）：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。狭缝：窄时，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。根据检测波长选择氘灯或钨灯。 4.4.3.7

单击“方法”菜单，选中“方法另存为”，输入一方法名。如“test”，单击确定。 4.4.3.8

信号移到右边的框中，点击确定。（如同时检测两个信号，则重复1、2

4.4.3.9

品信息：样品总体名称，数据路径中为将数据保存在规定文件夹中，在样品名称项中输入样品名称，未知样品运行次数项中输入样品瓶数，在每次运行重复次数输入进样针数，单击确定进入下一对话框，在样品瓶项中输入第一个样品瓶的位置，在样品架上放入样品瓶，在进样量选项中选择使用方法，然后单击确定。出现一个有样品瓶数的序列，将每一个样品名称都区别开来，以防保存数据时将相同名称的数据覆盖掉，将序列保存在规定文件夹

中，在运行队列中进行提交。

4.4.3.10 等仪器ready。

4.4.4采样进程中可进行的操作

4.4.4.1当出峰时间超过设定的分析停止时间时，可以点击右下部的工作参数“停止时间”

进行适当的调整，可使主峰出完并与使杂质峰出完。 4.4.4.2中止采集 4.6图谱数据的处理

4.4.5

4.4.6进行修改积分参数后在命令栏内选择分析。

4.4.7可将谱图设置在任何量程区域内，也可以将谱图调节成任何颜色，在数据结果中单击鼠标右键选择报告属性将需要的积分参数选入，如理论塔板数，分离度等。在报告结果中就会出现应保存的结果。

高效液相色谱仪使用维护保养操作规则

4.4.8打印报告：

4.5关机操作

4.5.1清洗柱和流路：反相色谱系统先用10%甲醇水以1ml/min冲洗20min以上（如流动相中没有盐可直接用甲醇冲洗）再用甲醇冲洗15min。如果流动相中有盐先用10%乙腈水以1.0ml/min冲洗60min以上，再用乙腈冲洗20min,甲醇冲洗20min。 4.5.2清洗完成后，先将流速降到0，先关闭工作站，再依次关闭仪器 各部件开关，断开电源。 4.5.3填写仪器使用记录。 4.6 注意事项：

4.6.1流动相必须用色谱纯的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45μm或更细的膜过滤)。

4.6.2 流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 4.6.3 不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

4.6.4 长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)

，因为纯水易长霉。

4.6.5 每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。 4.6.6 C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。

4.6.7 堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查

并清洗。清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；③用10％稀硝酸清洗。4.6.8 气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 4.6.9 要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。

4.6.10更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

4.6.11 无论是否使用缓冲盐，都要配制90%水+10%选择定期清洗（包括周期和持续时间）或单次清洗，点击确定，注意溶剂不能干涸。

4.6.12 泵头不可用超声清洗（可用乙醇、水清洗）、宝石杆不可超声，石英窗可用超声清洗。

4.6.13溶剂过滤头不可超声清洗，可用35%硝酸浸泡1小时后再用溶剂清洗。

4.6.14开机脱气前需观察真空脱气机状态，直至状态灯熄灭，说明可以正常工作，方可脱气。设定脱气流速不得过5ml/min！

4.6.15缓冲盐严禁在流路中静置过夜，用过后需先用水冲洗，再用甲醇充满流路，防止长菌。

4.7 仪器维护

4.7.1及时做好仪器卫生清洁工作：外部清洁每周至少一次，内部每月至少一次。 4.7.2 10%甲醇水的更换：夏天使用周期不得过3天，冬天不得超过一个星期。 4.7.3检查吸滤头、在线过滤器、单相阀是否有堵塞并及时解决，每月至少一次。

高效液相色谱仪使用维护保养操作规则

4.7.4检查整个管路是否存在漏液、老化、松动等现象并及时解决，每月至少一次。 4.7.5仪器发生故障时应及时向管理员汇报，并及时处理。不能处理时应及早报修。 4.7.6未经允许不得擅自拆卸仪器。

4.7.7及时填写仪器使用及维护保养记录。

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/ybki.html