循环肿瘤细胞检测及临床应用的研究进展
更新时间:2023-05-11 05:55:01 阅读量: 实用文档 文档下载
研究发现,实体瘤患者外周血中存在循环肿瘤细胞。循环肿瘤细胞的检测有助于发现早期肿瘤患者的微转移,重新确定临床分期,监测患者术后肿瘤是否复发与转移,评估预后,选择个体化的治疗策略。由于存在循环肿瘤细胞检测方法、原发肿瘤细胞的不连续脱落、基因组的不稳定性及无效转移等诸多问题,循环肿瘤细胞检测的生物学意义和临床意义仍存在很大争议。本文综述了对实体瘤患者循
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肿瘤 20 0 8年 5月第 2 8卷第 5期
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循环肿瘤细胞检测及临床应用的研究进展黄同海‘王正‘李富荣,,(暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院 1胸外科;. . 2临床医学研究中心,深圳 582 ) 10 0[摘要]研究发现, 实体瘤患者外周血中存在循环肿瘤细胞。循环肿瘤细胞的检测有助干发现早期肿瘤患者的微转移.重新确定临床分期,监测患者术后肿瘤是否复发与转移,评估预后,选择个体化的治疗策略。由于存在循环肿瘤细胞检测方法、原发肿瘤细胞的不连续脱落、因组的不稳定性及无效转移等诸多问题,环肿瘤细胞检测的生物学意义和临床意义仍存在很基循
大争议。本文综述了对实体瘤患者循环肿瘤细胞检测的方法和结果,并探讨当前肿瘤研究领域面临的问题和潜在的进展。 [关键词]肿瘤循环细胞; 肿瘤转移;诊断技术和方法[中图分类号] R 33; 70 4 7 -7 R 3 .3[文献标志码] A [文章编号] 10 -4 12 0 )50 5 -3 0 07 3 (0 8 0 -4 0012 P R方法 . C P R方法是检测 C C C T s最普遍的一种方
肿瘤转移是一个涉及多步骤多因素的复杂过程。肿瘤
细胞的脱落、侵袭并进入血液循环是实现肿瘤转移的最初阶段,为最终形成肿瘤转移灶提供了可能。深入研究循环肿并瘤细胞 (i ua n m rcl,C C )助于对肿瘤转移机 c c ligt o e s T s有 r t u l
法。该方法通过设计获得与目的基因特异性互补的寡核苷酸引物而具有较高的特异性。应用 P R方法可在 l~l C 0 0个正常细胞中检测出 1个肿瘤细胞,当于 1~1 L血中相 0m可发现 1个肿瘤细胞,光学显微镜检测 ( 0与 1~1个正常 0细胞中发现 1肿瘤细胞 )个和免疫组织化学方法 ( 0 1一l 0个正常细胞中发现 1个肿瘤细胞 )比具有更高的敏感 相性。然而,由于该方法的高度敏感性,易产生假阳
性的极结果。这是因为外周血白细胞的非法转录、脉穿刺时血标 静本的污染及假基因的干扰等造成,随着实时定量 P R技 但 C
制的了解,为抗转移治疗提供依据。随着检测技术的不断改进,研究者们对 C C T s的生物学特性的认识得到不断更新和完善。这可能为肿瘤患者的预后评估、抗肿瘤药物的开发和肿瘤的个体化治疗提供强有力的工具。 C C是指自发或因诊疗操作进入外周血循环的肿瘤细 Ts胞。由于宿主的免疫识别和机械杀伤作用以及肿瘤细胞自 身因素,进入循环的肿瘤细胞很大一部分发生凋亡,能形不成转移灶,这种现象称之为“效转移”。只有极少数具无 有高度转移潜能的肿瘤细胞在循环系统中存活下来,相互聚集形成微小癌栓,并在一定条件下发展为转移灶。因此,在外周血中检测到肿瘤细胞预示着有可能发生肿瘤转移。 1 C C T s的检测方法 1 1细胞计数法细胞计数法是最早应用于检测外周血 . C C的方法并且是当前鉴定骨髓中微转移的标准方法。细 Ts
术的出现,精确定量靶序列成为可能。使以 D A作为 P R的模板, N C其优势是它的稳定性和肿瘤
细胞异常转录的独立性。但是它的缺点是敏感性低,且不并能鉴别目的基因 D A来源于活细胞还是死细胞。 N
以 mR A作为模板进行 R .C N TP R也是 C C检测最常用 Ts的一种方法。首先将 m N R A反转录为 c N随后用特异性 D A,
的引物扩增获得目的基因。引物设计时可以跨越 2个不同的外显子,避免整个基因组的扩增,利于消除假阳性结为有
果。R—C T P R的优点是可以检测原代活细胞,点是在某个缺特定肿瘤细胞内一个基因 m N R A的拷贝数量在细胞周期中是不断变化的,且存在去分化的现象,可能影响标准并这 P R的阳性率和实时定量 P R检测的标志物水平,而较 C C从难区别肿瘤细胞数量与 m N R A表达水平之间的变化。然而用多位点 P R分别检测来自不同基因家族的 mR A标志物 C N即可解决这个问题 。
胞计数法的优点是,可在形态学上鉴别恶性表型并在单个细胞水平上进一步检测特定分子,但标准的光学显微镜和免疫细胞化学法存在敏感性低
、检测繁琐、时、费易误诊等缺点。 随着细胞自动成像和细胞富集方法等的产生,重新激起了研究者对应用细胞计数法检测 C C T s的兴趣 J。数字显微镜能自动扫描以核特征和细胞表面特征为基础的血标本,而操作者只需确定分选的细胞即可。新近应用的上皮肿瘤细胞容量分离法(sl i ys eo p hl lu o es S T) i a o b i f i ei m rcl,IE, o tn z et at l
13细胞富集方法 .一
密度梯度离心法是目前实验室常用的
不仅能计数肿瘤细胞,而且能进行免疫形态学和分子特征的分析 J C。F M广泛应用于血液领域,不仅能鉴定特定标本中细胞抗原性和形态学特征,还能使富集的目的细胞维持细胞形态并保持细胞活力,进一步扩大在体外的功能研究。【基金项目】国家科技攻关计划项目( 编号:0 3 A 1A 3 20 B 30 2 )【作者简介】黄同海( 92 )男( 18一,汉族 )硕士,,住院医师C r s o d n et: N h n ( or p n e c WA G Z e g王 e o正)E— i: a g n O 0@ 1 3 c r mal W n z _ 5 3 6 .o n
种收集肿瘤细胞的方法,但该方法缺乏特异性,因而易导性细胞富集法则具有较高的特异性和富集效率。其基本原理即采用均匀、形具有超顺磁性及保护壳的纳米微粒制备球成免疫磁珠,使之成为既能被磁铁所吸引,又能结合抗体的载体。磁珠上的抗体与含有特异性抗原物质的细胞结合后, 则形成细胞抗原.抗体 .磁珠免疫复合物,在磁力作用下发生力学移动,使复合物与其他物质分离,达到分离特异性细胞的目的。目前商业化的磁珠包括阳性分选磁珠和阴性分选
致缺乏相应密度的肿瘤细胞丢失。新近发展起来的免疫磁
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