蛋白质沉淀反应实验
更新时间:2023-09-29 12:12:01 阅读量: 综合文库 文档下载
蛋白质的沉淀反应
一、目的和要求
1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识 2、掌握几种沉淀蛋白质的方法 3、了解蛋白质变性与沉淀的关系 二、沉淀反应 (一)原理
在水溶液中,蛋白质分子的表面上由于有水化层和同性电荷的作用,所以成为稳定的胶体颗粒。但这种稳定的状态是有条件的。在某些理化因素的作用下,蛋白质分子表面带电性质发生变化、脱水甚至变性,则会以固态形式从溶液中析出,这个过程就称为蛋白质的沉淀反应。蛋白质的沉淀反应可分为以下两种类型:
1、可逆沉淀反应
沉淀反应发生后,蛋白质分子内部结构并没有发生大的或者显著变化。在沉淀因素去除后,又可恢复其亲水性,这种沉淀反应就是可逆沉淀反应,也叫做不变性沉淀反应。属于这类沉淀反应的有盐析作用、等电点沉淀以及在低温下短时间的有机溶剂沉淀法等。
2、不可逆沉淀反应
蛋白质在沉淀的同时,其空间结构发生大的改变,许多副键发生断裂,即使除去沉淀因素,蛋白质也不会恢复其亲水性,并丧失生物活性,这种沉淀反应就是不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂、强酸、强碱、加热、强烈震荡、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
(二)盐析 1、材料与试剂
(1)10%的卵清蛋白溶液(要求新鲜配制)、浓蛋白溶液(2)饱和硫酸铵溶液 (3)固体硫酸铵 (4)滤纸、玻棒
2、操作方法
(1)取试管一支,加入浓蛋白溶液2ml,再加等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静置10分钟将出现沉淀。此沉淀物为球蛋白。 (2)取上清液于另一支试管。
(3)向上清液液中加入硫酸铵粉末,边加边用玻棒搅拌,直至粉末不再溶解为止。静置数分钟后,沉淀析出的是清蛋白。
(4)向两支试管中分别加水,观察其沉淀是否溶解。 (三)重金属盐沉淀
重金属离子如Pb2+、Cu2+、Hg2+、Ag2+ 等可与蛋白质分子上的羟基结合生成不溶性金属盐而沉淀:
+NH3PrCOO-OH-PrNH2Ag+COO-PrNH2COOAg
重金属盐类沉淀蛋白质的反应通常很完全,特别是在碱金属盐类存在时。因此,生化分析中,常用重金属盐除去体液中的蛋白质;临床上用蛋白质解除重金属盐引起的食物中毒。
1、材料与试剂
(1)10%的卵清蛋白溶液(2)0.1mol/L氢氧化钠溶液 (3)3%硝酸银溶液 (4)0.1%硫酸铜溶液 (6)试管3支 2、操作方法
(1)取试管2支,分别编号后各加入1ml 10%的卵清蛋白溶液。 (2)各管再加入一滴0.1mol/L氢氧化钠溶液。
(3)向1管加3%硝酸银溶液3~4滴;向2管加0.1%硫酸铜溶液3~4滴。混匀后观察沉淀的生成。
(四)生物碱试剂沉淀反应
生物碱试剂能与蛋白质分子中的氨基结合生成不溶性沉淀,反应如下:
NH+3PrCOO-1、材料与试剂
CCl3COOHPrNH3.OOCCCl3COOH
+(1)10%的卵清蛋白溶液 (2)5%三氯乙酸溶液 2、操作方法
取试管一支,加10%的卵清蛋白溶液20滴后再加入5%三氯乙酸溶液10滴,混匀后观察沉淀的出现。
(五)有机溶剂沉淀反应 1、材料与试剂
(1)10%的卵清蛋白溶液 (2)95%乙醇溶液 2、操作方法
取试管1支,加10%的卵清蛋白溶液10滴后,再加入95%乙醇溶液20滴,边加边混匀。静置片刻后观察结果。
习 题
1、盐析时为什么分别用饱和硫酸铵溶液和硫酸铵粉末? 2、重金属盐沉淀蛋白质注意什么?
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