高效液相色谱在药学中的应用

高效液相色谱在药学中的应用 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪70年代发展起来的一项高效、快速的分离分析技术已被广泛用于各个领域，它是以经典的液相色谱为基础，引入气相色谱的理论与实验方法，将流动相改为高压输送，并采用高效固定相及在线检测等手段，发展而成的分析、分离方法。以其灵敏度高、选择性好，可分析微量组成甚至痕量样品等特点，成为医药分析领域应用最广、发展最快的现代分析技术之一。有的已被列入药典，成为环境污染物检测技术及化工产品质量检验中的标准方法。 与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：①应用了颗粒极细（一般为10μm以下）、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；②采用高压输液泵输送流动相，流速快，一般试样的分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成；③广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了灵敏度。 与气相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：①不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广；②可选用不同性质的各种溶剂作为流动相，而且流动相对分离的选择性有很大作用，因此分离选择性高；③一般在温室条件下进行分离，不需要高柱温。 高效液相色谱的研究应用进展 药物与人类的健康，生活质量的提高关系极大，许多药品由于受到纯度的影响，药效不能充分发挥，甚至产生毒副作用；有时服用前需作各种试验，带来很多麻烦。外消旋体药物是最典型的例子之一。它由左旋与右旋两种光学异构体组成，不同的异构体药理与疗效完全不同。以往由于分离与纯化能力的限制，市场上常以混合物即外消旋体出售。即使有少量的分离后的药物出售，价格也极为昂贵，目前美国FDA（食品和药品管理局）和西方许多国家的有关部门都已作出了禁止外消旋体药物在市场上销售的决定，必须把它分离成单一的左旋或右旋体才能作为产品上市。所以药物产品对分离与纯化技术提出了更高的要求。色谱是目前分离与纯化领域中处理多组分复杂体系的最有效的方法，在各种色谱技术中，HPLC又是分离与纯化药物的最佳选择。高效液相色谱法已广泛应用于各种药物及其制剂的分析测定，尤其在生物样品、中药等复杂体系的成分分离分析中发挥着极其重要的作用。随着与质谱、核磁共振波谱等联用技术的发展，高效液相色谱法的应用将愈加广泛。 1.在鉴别中的应用 在HPLC法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别。如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。头抱拉定、头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液、曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别。 2.在杂质检查中的应用 HPLC分离效能高，灵敏，在药物的杂质检查中应用广泛。主要用于药物中有关物质的检查。“有关物质”是指药物中存在的合成原料、中间体、副产物、降解产物等物质，这些物质的结构和性质与药物相似，含量很低，只有采用色谱的方法才能将其分离并检测。若杂质是已知的，又有杂质的对照品，可用杂质对照品做对照进行检查。若杂质是未知的，可以采用主成分自身对照法或峰面积归一化法进行检查。 3.在检测药物含量上的应用 在药物分析中，高效液相色谱由于其专一性，灵敏度高，快速简便的特点，广泛的应用于药物分析中的定量分析，尤其在干扰因素较多的时候表现出更大的优越性。关日晴采用高效液相色谱法测定盐酸洛美沙星滴眼液中的洛美沙星含量；用C柱为分离柱，0.02tool/nm 酸溶液(用三乙胺调节pH值至2.6)-乙腈(体积比85:15)为流动相，检测波长287nm；洛美沙星进样量在0.48～0.72 g范围内与峰面积线性关系良好(r-0.9998)，平均回收率100.4,重复进样的RSD0.33 (n-6)。张 敏等在用高效液相色谱法测定清热丸中黄芩苷的含量中 此外国内还对喹诺酮类抗菌药n、复方阿莫西林粉中阿莫西林和克拉维酸口 、复方感冒液、芩连口服液中黄芩苷口、氢溴酸右美沙芬片、饲料中氯羟吡啶、注射用硫酸奈替米星、小诺霉素中C2b、保健食品中的西地那非和西力士、植物愈伤组织中的喜树碱及其衍生物、饲料中十三种磺胺类药物等药物的测定进行了研究。在利用高效液相色谱法进行测定与其他技术联用，检测器一般有紫外分光光度计，质谱等。这些精密的检测器决定了分析的灵敏度，对于分析起着重要的重要，是高效液相色谱分析法中重要的组成部分。 4.在药效检测上的应用 高效液相色谱法能同时进行分离和定量测定的优点在治疗药物检测和药物代谢动力学中体现地尤为突出。药物的治疗效果与其及其代谢物在血液中的浓度有关。治疗药物通过一段时间的使用后，在体内还有一定的残留，同样会影响人的某些生理功能，因此进行体内药物残量分析也成为近年来新药效能研究的主要内容。从高效液相色谱法的发展趋势来看，高效液相色谱在仪器、检测器、固定相等方面有了很大的发展，这为高效液相色谱法的广泛应用打下了坚实的基础。每一种分析技术均有其使用范围和方法的局限性，将单一色谱技术联用能获得更大的发展。尤其是色谱一色谱联用、色谱一光谱联用、柱切换技术、高效液相色谱一质谱连用、高效液相色谱，傅立叶变换红外吸收光谱联用等。高效液相色谱与其它先进技术联用，将是高效液相色谱今后的主要发展方向。这里就拿高效液相色谱一质谱连用来说，代谢物鉴定是药物代谢领域的日常工作，而质谱仪是完成该任务的主要工具。将动物试验中的代谢物进行毒性研究，是制药工业中毒理学试验的基础。采用人肝组织，可在药物发现阶段测定人体临床试验产生的代谢物。另外随着现代药物选择性的提高，剂量越来越低，有时血药浓度很低即可产生药效。对碱性药物具有非常高的检测灵敏度，使过去难以实现的痕量分析变得容易。新型离子化方式可能对一些中性化合物进行高灵敏度测定。的高选择性和测试速度，使其在大多数药物的生物样品分析中，取代了其他类型的检测方式。液相色谱串联质谱法具有高度的专属性，对多数药物的检测灵敏度超过其他分析方法，使定量测试速度显著加快，可以对混合物中的微量组分进行结构分析，适应了现代药物研究中高通量的要求。无疑已经成为药物动力学和代谢研究的核心分析技术，其潜力尚待进一步开发。 5.高效液相色谱在药物残留上的应用 由于高效液相色谱能够对含量复杂组分进行定量分析，被广泛使用于药物残留的测定上。周东海等以高效液相色谱法建立了猪、羊、鸡肝组织中西维因残留量的检测方法。采用ODS色谱柱，二极管阵列检测器，甲醇/水(65/35)为流动相，222nm检测波长下进行检测。西维因对照品溶液的最低检测限为0.1mg/I，线性范围为0.1~20mg/I，标准曲线回归方程为：Y--22459，83+454684，31X，线性关系良好(r-0.9999)。样品以乙腈提取，并加入无水硫酸钠和正已烷，过滤后去除杂质，乙腈层在45～50℃下水浴氮气吹干，残渣用甲醇溶解后，进样分析。平均回收率均大于80％，日间和日内变异系数均小于10％。符合药物残留痕量分析要求。林海丹等研究了动物源性食品中甲氧苄胺嘧啶药物残留的提取、净化和高效液相色谱分析条件，建立了高效液相色谱法测定动物性食品中甲氧苄胺嘧啶药物残留的方法，该法检测限0.025mg/kg，回收率为84~98。此外，在人血中药物含量的测定中也有很多的应用。 高效液相色谱法由于分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广、组分易回收、样品处理较简单等优点在确定药方案和治疗剂量，以及药物动力学分析和药效学评价提供了方法的基础，有着广泛的应用前景。

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