显微制片技巧

中药显微鉴定知识总结

中药鉴定常用的鉴定方法有：（原植物、动物和矿物）鉴定法、性状鉴定法、显微鉴定法及理化鉴定法等。

显微鉴定法是利用显微技术对中药进行显微分析，以确定其品种和质量的一种鉴定方法。显微鉴定主要包括组织鉴定和粉末鉴定，利用显微镜来观察药材的组织构造、细胞形状及内含物的特征、矿物的光学特性，和用显微化学方法，确定细胞壁及细胞内含物的性质或某些品种有效成分在组织中的分布等，用以鉴别药材的真伪与纯度甚至品质。

（一）显微制片方法

显微鉴定时可根据检品的不同情况制作相应的制片，包括横切片或纵切片、表面制片、粉末制片、解离组织片、花粉粒与孢子制片、磨片制片、含粉末药材的制剂显微纸片等。

制作解离组织片时，解离液选择原则为：如样品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，可用氢氧化钾法；如果样品坚硬，木化组织较多或集成较大群束，可用硝铬酸法或氯酸钾法。 （二）植物细胞壁和内含物的鉴别 （1）细胞壁性质的鉴别：

①木质化细胞壁加间苯三酚试液显红色或紫红色。 ②木栓化或角质化细胞壁加苏丹Ш显橘红色至红色。 ③纤堆素细胞壁加氯化锌碘试液显蓝色或紫色。 ④硅质化细胞壁加硫酸无变化。 （2）细胞内含物性质的鉴别： ①淀粉拉加碘试液显蓝色或紫色。

②糊粉粒加碘试液显棕色或黄棕色。加硝酸汞试液显砖红色。 ③脂肪油、挥发油或树脂加苏丹Ш试液显橘红色、红色或紫红色。 ④菊糖加10%α-萘酚乙醇溶液，再加硫酸显紫红色并很快溶解。 ⑤黏液加钌红试液显红色。

⑥草酸钙结晶加稀醋酸不溶解，加稀盐酸溶解而无气泡发生。加硫酸逐渐溶解，析出结晶。

⑦碳酸钙结晶（钟乳体）加稀盐酸溶解，同时有气泡发生。 ⑧硅质加硫酸不溶解。

（四）显微临时制片常用封藏试液

显微鉴定所用试剂包括水、稀甘油、甘油醋酸试液及水合氯醛试液。

（五）扫描电子显微镜和偏光显微镜的应用

扫描电镜已广泛应用于生物样品表面及其断面立体形貌的观察。偏光显微镜主要用于观察和分析矿物类中药的光学性质。

（六）1、细胞壁性质的鉴别：木质化细胞壁：间苯三酚，显红色或紫红色;木栓化(角质化)细胞壁：苏丹Ⅲ号，加热后显红色;纤维素细胞壁：氯化锌碘试液，显蓝色或紫色;硅质化细胞壁：硫酸无变化 2、 细胞内含物的鉴定 淀粉粒：加碘试液，蓝色或紫色。用甘油醋酸处理后，未糊化的淀粉粒有偏光，糊化的无偏光。 糊粉粒：加碘显棕色，加硝酸汞，显砖红色。 脂肪油：加苏丹Ⅲ号，显橘红色、红色或紫色。加90%乙醇脂肪油不溶解，挥发油溶解。 菊糖：加10%а-萘酚乙醇液，再加硫酸，现紫红色并很快溶解。 粘液：加钌红试液，显红色。 草酸钙结晶：1、加稀醋酸不溶解，加盐酸溶解。2、加硫酸，逐渐溶解，然后又析出针状结晶。 碳酸钙结晶：加稀盐酸溶解并有气泡产生。 硅质块： 加硫酸不溶解

(七)显微临时制片常用的封藏液 水、稀甘油：用来观察淀粉粒、油滴、树脂等细胞内含物及细胞壁的颜色 甘油醋酸试液：常用封藏剂，使淀粉粒不膨胀变性，特别适于观察淀粉粒和显微测量。

水合氯醛试液：常用的透化剂。方便观察细胞的形状和组织构造以及细胞内含有的各种晶体 八、粉末制片法 1．粉末的制备

取样品粉碎，粉碎后的粉末过50~60目筛，成药则应过100目筛，置清洁的瓶中备用。制备粉末时应注意不得有其它的杂物混入 2．制片方法 依据须要不同，可作成临时或永久制片。 （1）临时制片：作临时观察用，随用随作，通常仅能保留1~2周。直接封片法 不经任何处理，直接用于封藏液装片后即可视察。常用的封躲液

（1） 如下几种：

a． 水：常用蒸馏水。用于观察淀粉粒等多糖类物质，但易引起淀粉粒膨胀变形，欲测定粉粒大小时不宜用水作封藏剂。

b．稀甘油：用于观察糊粉粒、淀粉粒及其它多糖类物质，为显微制片中最常用的封藏剂。经水合氯醛透化的加稀甘油一滴，还可防止水合氯醛结晶的析出。配制时应注意冬气象温低，粘度小，装片时易产赌气泡，可适当配浓一点，而夏天则相反，可配稀一点。 c． 50%甘油酒精：适用范畴同上，透明度较上者强。

d．甘油醋酸液：专用于观察淀粉粒的形态，是目前观察淀粉粒最幻想的封藏剂，可使淀粉粒坚持本来的状况而不膨胀变形，便于测定其大小。

e． 乙醇：主要用于观察菊糖及橙皮柑结晶。因乙醇易挥发，故装片后应立即观察，放置稍久则乙醇挥发产生大批汽泡。 f． 水合氯醛：一般作为透明剂，在观察菊糖时，用其作为封藏液，不加热，装片后立即观察，往往能得到比乙醇装片更为幻想的后果。方法：取干净载玻片，滴加封藏剂1～2滴，用解剖针或火柴杆挑取粉末少许与封藏剂混匀，然后用镊子夹住盖玻片的边沿中部或用食指及拇指拿住盖玻片的边沿，将其一侧边缘压在封藏液旁的载玻片上，慢慢放下至程度地位，用滤纸屑干净载片即可。

装片过程中应注意封藏液要适量，若不足则不能充斥盖片；过多则溢出盖片，使盖玻片浮动，并易将封藏液溢到盖玻片上面。盖玻片上面应干燥，不得将封藏液溢到上面，否则会污染物镜，并下降盖玻片的透明度，若已弄到盖片上面，则只能洗后重新装片，不得擦后委曲观察。

若封藏液不足未充斥盖片，可在盖片一侧边沿的载片上滴加少量的封藏液；若封藏液过多溢出盖片或引起盖片浮动，则用小滤纸条从一侧面汲取过多的封藏液，使盖片紧贴载片，不再浮动。

在盖片进程中，常因不熟练或不注意而在电影中留下气泡，可用解剖针将盖玻片一侧挑起，再轻轻放下，以除往气泡。另外，有的封液黏度较大（如甘油），不易渗透到细胞组织中，常在厚壁细胞腔中

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