分子生物组(PCR)检测程序性能验证标准操作程序课件 doc

标题： 分子生物组检测程序性能验证标准操作程序

Logo/×××××医院检 科验

××× laboratory/lab

文件编号 :HBHTCM/LH-SOP-PCR- ×× 版本号：× 修改号： 0

生效日期：×××× -×× -××发行部门： PCR 组 编制人：×××审核人：××× 批准人：×××页码：第 1页/共 4 页

1 目的

确立分子生物组检测程序性能验证标准操作规程，使检测程序性能证验操作规范化。

2 适用范围

采用基因扩增检验方法测检的所有目。 项

3职任人 或责

3.1组长负责组工作人员本织具体实施，并审核报告； 3.2 3.3

本组工作人员负责对适用范内的检围测程序行验进证操作，并撰写报告； 技术主管负责监督本规程的实施；

3.4质量主管参与对检验程序有效性的评价及指导； 3.5检验科主任责负批准测检程序的施。 实4

内容

定量检测方法和程序的分析性能验证内容至少包括精密度、正确度、线应性、测 量和 /或可报告范围、抗干扰能力等。定性检测项目验证内容至少包括测应定下限、特 异性、准确度（方法学比较或与金标准比较） 4.1

正确度

指该检测程序测定的结果与真实值或参考接近的程度。 值4.1.1验证方法：本采用对组照试验，将床检临委计卫验中心或湖北省临床检 中验

心的能力验证/室间质评的质控品、 或已获认可的验实室的本作为标样品， 所用的检测程序进行定量分析， 对

以

、抗干扰能力等。

分析结果与质控品靶值或比对实验室检测

值进行比较，误差在可接受范围即可接受。

4.1.2样品数量：至少 5 份，包括正常和异常水平或不同常见基因突变型； 4.1.3频率：至少每年 2 次；

4.1.4 判定标准：对于定性试验，阴阳性该应一致；于定量试对有≥ 应，验

结果符合要求，卫床检临委计验中心能力和湖北省临床检验中心证评验价界 限靶值分别为0.4 和 0.5，实结间室验果比合格标对准是偏倚

4.2

特异性

指在可能其它成分（如其他病原体、内源物质等）存在的条件下，采用的方法能 正确测定待测物的特性。对于核酸检测的特异性，主要是指核酸扩增过程中的特 异性。

4.2.1验证方法： 取一份阴性标本， 加入其他常见病原体高浓度核酸样本，进行 10

次独立的检 。测

4.2.2 判断标准：观察并记录检测结果为阴阳性的差异。 4.3

精密度

<±7.5%。

80%的

标题： 分子生物组检测程序性能验证标准操作程序

Logo/×××××医院检 科验

××× laboratory/lab

文件编号 :HBHTCM/LH-SOP-PCR- ×× 版本号：× 修改号： 0

生效日期：×××× -×× -××发行部门： PCR 组 编制人：×××审核人：××× 批准人：×××页码：第 2页/共 4 页

指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得果之间结的接近 程度。一般以偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。 4.3.1验证方法

4.3.1.1 重复精密度 （批内精密度） ：选择具有医学决定水平的高低值标本，

规定的操作方法， 在较短得时间内及定的条件下各作 稳

20 次独立测定。

按

计算其均、标值准差与变异系数。标本可用患者血清或选用质控品进 行，所检测所有数据超出 原因纠正后重新进行试 。验

2SD的数据不能超过2 个，否则应分析失控 （可参照厂家说明书）

4.3.1.2 中间精密度 （批间精密度） ：选择室内控作为质衡量中间精密度的依据。

选取至少 2 个月的质控数据（浓度最好为医学决定水平之内和之外） 计算均、标值准差与变异系数。

4.3.1.3 重复精密度（批内精密度）与中间精密度（批间精密度）

：连续测定

5d，每天一个分析批，每批高低两个浓度水平，每一个浓度水平同一 样品重复定 3 次。如果因为测质量控制程序或操作问题判断一批失 为

控，应剔除数据，并增加执行一个分析批；正常使用每日质控品。计 算批内和批间标准差。

4.3.2 判定标准： 批内精密度 CV%应小于 3/5总允许 （TEa）差误；批精密度 CV% 间

应小于 4/5总允许误差（ TEa）；如果批内精密度、批间精密度小于允许范围 的，验；如果批内精密度、批间过通证精密度大于验证值，精密度验证未通 过，重新证验或与厂家系并取得帮助。 联

4.4检出限

是限度试验的参数，指试样中被物能被检测测出的最低量。定量分析的检出限必 须经过分析适量的在检出限附近的样品或分析按检出限条件配制的样品的方法 。证验行进

4.4.1验证方法：定一份浓选度接近制造商声明的检出限的样本，或采用高值 本样

用阴性血清进行稀释，进行

4.4.2 判断标准：阳性率应≥ 4.5

定量限

指样品中被测物能被定量测定的最低值，其结果应具有一定的准确度和精密度。 定量分析的定量限必须经过分析适量的在定量限附近的样品或分析按定量限条 件配制的样品的方法进行验 。证

4.5.1验证方法：定一份浓选度在线性范围下限左右的样本，或采用高值样本用阴

性血清进行稀释，进行

20 次独立测定。

20 次独立测定。 95%，符合要求。

标题： 分子生物组检测程序性能验证标准操作程序

Logo/×××××医院检 科验

××× laboratory/lab

文件编号 :HBHTCM/LH-SOP-PCR- ×× 版本号：× 修改号： 0

生效日期：×××× -×× -××发行部门： PCR 组 编制人：×××审核人：××× 批准人：×××页码：第 3页/共 4 页

4.5.2 判断标准：分析检测结果的 4.6线性和测量 /可报告范围：

SD值<0.24，符合要求。

线性指在内，测围范测检试结果与被测物浓度呈正比关系的程度。 4.6.1验证方法：取价项评目的高、低值病人标本各一份，

（高值接近线为本标性

。用低值

范围上限或略超过线性上限的本，低值标检测为本标阴性的标本） 高值对本标标本按

1∶ 10的比例进行倍比稀释， 配制成系列浓度梯度的血清，

5 个。每个样本标本重复测定

3 次，记录结果。 最好在一天之

使检出限上的点至少不得少于

所有样品应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定， 内完成。统计数据，剔除离群值，单个离群值可直接由数据组中剔除并进行 重测，全部样本无需重新测定。如发现多个离群值或数据点过于分散，需检 查造成此差的可能原因，对误可能原因进行纠正后，对全部样本进行重新测 定。求出 3 次测定结果的平均值和每一稀释度的预期值。以实为 值均测以预期值为Y，在初步判断无离群值后，使用 归分析。

X，

EXCEL软件进行二元一次的回

4.6.2 判断方法：数据拟合为直线，所有数据几乎均落在一条直线上，相关系数≥

0.95为符合要求。 或可依据制造商声明的标准。 否则，应重新进行线性验 。证

4.7测量 /可报告范围

测量范指能达到一定精密度、准确度和线围性，测试方法适用的高低限浓度或量 的区间。 4.7.1验证方法：同

5.6 中的线性，其线性范围即为测量范。 围

4.7.2 判断方法：当肝炎系列核酸检测线性范围足够宽时，其范围即可成为其临床

可报告范围。 因为当上述验光定量 荧的证

PCR法核酸检测检测试明书 说盒剂

中检测程序的性范围线很宽时，高度已属临浓床高载量患者，符合抗病毒治 ，不必要对标指疗更高的载量进行精确检测；若果低于检结测限，已 床临为

测监效疗效果好的指标较，大量研究表明，此群患者对抗病毒治疗不敏感， 因此对不大，如果的确需要更低更准确的检义意测监效疗测结果，则建议采 用更敏感的检测方法。

4.8

抗干扰能力

血液样本内源产物血红蛋白、胆红素和甘油三酯会对核酸的检测结果产生干扰， 本溶血、黄疸及脂血时标致导检测结果不准确。 4.8.1验证方法：采用回收试验，分在 别

5 个已知分析物浓度的样品中加入不同干

粉或液体干扰物，达到制造商声明的干扰物浓度后进行检测、分析。

4.8.2 判断标准：至少

4 个样品测量结果与分析物预期浓度偏倚

<±7.5%时，说明

标题： 分子生物组检测程序性能验证标准操作程序

Logo/× × × × × 医院检验科

× × × laboratory/lab

文件编号 :HBHTCM/LH-SOP-PCR- × × 生效日期：× × × × 编制人：× × × 批准人：× × ×

-× × -× ×

版本号：× 修改号： 0

发行部门： PCR 组 审核人：× × ×

页码：第 4 页 /共 4 页

干扰物对分析物的检测没有干扰作用。

5

相关文件 5.1 5.2 HBHTCM/LH-CX-24 《量值溯源管理程序》 HBHTCM/LH-CX-28 《检验程序的选择和确认程序》

6

相关的记录表格和报告 6.1

HBHTCM/LH-JL-TY-28-01

/方法的分析性能验证评估报告》

《检测系统

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/xcor.html