结核杆菌_TB_PCR荧光诊断试剂盒的临床应用

结核杆菌_TB_PCR荧光诊断试剂盒的临床应用

江西医学检验!"""年#月第$%卷第&期

$&?

结核杆菌!"#$%&’荧光诊断试剂盒的临床应用

雷建平

熊国亮

目的

周平桢

蔡建荣

钭芳芳

宋小莲

以双盲法对$$?

(摘要)

比。结果

探讨半定量*+,-./荧光探针诊断试剂盒的临床应用价值。方法

例结核病和?#例非结核病人的痰标本进行厚涂片抗酸染色检查、结核菌培养、荧光探针*+,-./检查对

三种方法检测的敏感性分别为&!A!H、荧光探针*+,-./法的敏感性显著高于培?#A$H、=$A&H，

半定量*+,

。特异性分别为#&A!H、差异无显著性。结论养法和涂片法（!I"A"$和!I"A"?）#$A?H、#>A#H，

-./荧光探针诊断试剂盒可应用于临床结核杆菌检测。

(关键词)

中图分类号

结核分枝杆菌聚合酶链反应

文献标识码*

荧光探针

文章编号$""%,""!&K!"""L"&,"$&?,"&

/>>(A(!)/&=%A#$J$

!"#$#%&"&’’"#%&(#)$)*+!,(-%.$#/0-1#(.2-$-34&56-7*")05)(&22-5’5)8-*)57-(-%(#$249%)8&%(-5#04(08-5%0"):#:"#$%$&’($’)*+$,’)-.,/$&’)*01,.!$’)21#’*#3&/4!./5,’&678,9($3&/,:%$&’);$(6,<$’=#,:>&’=1&’)??@@@A

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

;B-91)57:=[\R9YNRP6:4O1POY6:RO39848-93\16:N86RQN47:6NRP497K-./LF39O:9PNVV6:2:9Y6

国内开展的*+,-./技术方法较多，但多为定性检查方法，谭耀驹等开展的0123456789:,-./方法;$<可进行定量分析，但国外进口设备和试剂太昂贵，因此我们探讨使用国产设备和半定量荧光探针诊断试剂盒的可能性。结果报告如下。

材料和方法

!细菌学检查：所有患者的痰标本按《结核病

诊断细菌学检查规程》进行痰厚涂片抗酸染色和结核菌培养，痰培养标本均在使用抗结核药之前留取。

&用于扩增标本的储存：痰标本液化后按每

管$13分装，,!"@保存。

>

双盲法：临床科室实验前整理好患者临床

资料和涂片抗酸染色结果等，并送结核菌培养（两个月左右取得结果），但临床科室的送检单上不写诊断。检验科整理登记患者姓名、年龄、性别、住院号、-./检测结果。临床科室作出诊断时不知道

$标本来源：共选择我院住院病人标本$=>

份，经临床诊断为结核病患者标本$!"份（其中?例经分枝杆菌菌型鉴定最后确定为非结核分枝杆菌病，实际确诊的结核病人$$?例），非结核病患者标本?>份（加上?例非结核分枝杆菌病患者标本共?#份）。于$###年%月至!"""年$月完成了全部标本的收集、抗酸杆菌涂片、荧光探针-./检查和结核菌培养接种，!"""年>月完成结核菌培养鉴定结果分析。

作者单位’&&"""(

南昌)江西省肺科医院

-./结果，检验科登记-./结果时不知道临床诊

断。

?荧光探针-./实验方法

?A$仪器：+BC/0D型DE0扩增仪、FG##"荧

结核杆菌_TB_PCR荧光诊断试剂盒的临床应用

8<F 光检测仪等。

!"#$%&"’()*#+,-".,(/0(1+(23444.56789:6;<

在临床诊断的结核患者组834份（实际结核病

C;3C;<

试剂：由上海复星实业股份有限公司提实验方法：按试剂盒说明书进行操作。

结

果

88C例，其中C例最后经菌型鉴定确定为非结核分

枝杆菌病），涂片和培养阳性的标本<F份（实际结核病<3例），本试剂盒阳性结果为<3份，阳性率为（实际为844O）；涂片阳性培养阴性的标本F99;HO

份，本试剂盒阳性结果为C份，阳性率为9<;<O；涂片阴性培养阳性的标本<I份（实际结核病<F例），本试剂盒阳性结果为<F份，阳性率HI;<O（实际为；涂片和培养均为阴性的标本J8份，本试剂844O）

盒阳性结果为H份，阳性率33O。表明细菌学检查为阴性的结核病患者的标本中，本试剂盒仍能检测到结核杆菌，本试剂盒有较好的敏感性。在临床诊断的非结核患者CJ份标本中，本试剂盒阳性结果为<份，表明本试剂盒在非结核病人组中有一定的检出率，可能的原因（8）本试剂盒检测结果为假阳性；（3）其他方法检测敏感性不高，出现结核病漏诊，本试剂盒检测灵敏度高，因此检测结果为阳性。必须进行复查以求得正确结果。

供，批号HH4C8J，有效期F个月。性，否则为阴性。

8本试剂盒在不同患者标本中的G:A检出

表#

组别

率（表8）。

不同标本中的NEG:A检出率

标本数

NEG:A阳性数

NEG:A阳性率

@OB

临床诊断结核组

涂阳培阳涂阳培阴涂阴培阳涂阴培阴菌阳总例数临床诊断非结核组

涂阳涂阴834<FF<IJ8IHCJ4CJ93<3C<FHI<<4<F9;<99;H9<;<HI;<33;4H3;JC;F4C;F

注：菌阳总例数K涂阳培阳例数D涂片或培养有8项阳性的总例数。其中<F份涂阳培阳标本中有J例经菌型鉴定为非结核分枝杆菌，

<I例涂阴培阳标本中有8例经菌型鉴定为非结核分枝杆菌。IH例菌阳标本中共有C例为非结核分枝杆菌（占F;<O）。

表"

标本号

临床诊断肺癌

肺脓疡

慢性阻塞性肺病

3对非结核患者组中=>?阳性结果标本的重

对=>?初检结果为阳性的非结核患者

复性检测

非结核组中=>?结果不符合标本的重复性检测结果涂片与培养

初检结果

重复结果8

重复结果3

判断

83F8C98F3MMMDDDDDDDDMDDM

组标本进行重复性检测。结果如下（表3）。

结果表明，必=>?检测也受较多因素的影响，须严格控制实验条件，才能有较满意的结果；该<例病人中其中有3例有既往结核病治愈史，以后是否发生结核病复发，尚有待随访观察。

J本试剂盒检测结果和涂片、培养法结果比

较见表J。

在结核组中，三种方法检测的阳性率分别为涂（<IL88C）、培养法CH;8O（F9L88C）、片法<3;3O=>?荧光法I8;<O（93L88C），本法的敏感性显著高于培养法和涂片法，经!3检验，差异有"R4;4C和"R4;48，显著性。特异性分别为涂片法H<;3O（CCLCH），培养法H8;FO（CJLCH），（CFLCH），差异=>?荧光法HJ;HO无显著性。表明=>?荧光法比涂片法和培养法对结核杆菌的检测敏原性更好并保持了特异性，有助于提高临床诊断的可靠性。

讨

论

<本试剂盒的敏感性、特异性和符合率（表<）

本试剂盒检测的敏感性为I8;<O（93L88C），特异性为HJ;HO（CFLCH），符合率为IH;<OP（93DCF）L8IJQ。

表!

本试剂盒检测的敏感性、特异性和符合率

=>?结果

组别

阳性

结核组非结核组合计

阴性

合计

8

88C@ADEBCH@>DGB8IJ@ADED>DGB

上海复星公司研究生产的NEM=>?荧光诊断试

93@AB<@>B9C@AD>B<<@EBCF@GB9H@EDGB

剂盒采用最新发展来的N#S1#$荧光探针技术，该探针用两个不同的荧光基团修饰，一个为发射荧光基团，一个为淬灭荧光基团。在=>?反应启动前，探针和靶G:A结合，此时发射荧光基团不发出荧光；

注：敏感性KA（；特异性KG（；符合率K（ADG）（LADE）L>DG）LADED>DG）

结核杆菌_TB_PCR荧光诊断试剂盒的临床应用

江西医学检验!"""年#月第$%卷第&期

$&(

表"

涂片法

组

别

标本数

阳性

结核组非结核组

阴性

本试剂盒检测结果和涂片、培养法结果比较

培养法

*:F荧光法

阳性率

阳性

阴性

阳性率

阳性率阳性阴性

$$B

B#&(@(%BB&!H!NGH%NG%B@(B@B#H$N%H@N%!&&&BG($H&NBH$N

*:F反应启动后，3JK酶核酸外切酶活性将和靶

此时，两个基团相互解离而.LM结合的探针水解，

发出荧光，荧光强度和扩增产物的量相关，因此可对原始标本进行定性检测，并可通过荧光强度比较进行半定量分析。

痰标本取材不当，所取痰标本不一定来自病灶所在部位，或患者经过治疗痰中菌量减少；（!）标本中存在*:F反应的抑制物等；（&）痰标本留取过程中易受口腔、气道和环境的污染等；影响了本试剂盒检测的敏感性和特异性，因此还要进一步提高检测敏感性。另外，本组病例中B例非结核分枝杆菌肺病此病人出现痰涂片和培养阳性而结核菌*:F阴性，时并非假阴性，而是因所扩增的结核菌复合群特异性.LM片段并非非结核分枝杆菌所共有。

!常规的结核杆菌细菌学检查，阳性率较低，

且费时、操作繁琐、不能除外约B1GN的非结核杆菌病例，结果可靠性差。*:F方法的出现，显示出了灵敏度高、特异性强、快速简便等特点。但在实际应用中，受多种因素的影响，*:F法也存在假阳性和假阴性问题。本试剂盒闭管操作，并在反应液中加入基本避免了由于扩增产物带来的污染，有利OLP，

于提高检测的特异性。

@本试剂盒将*:F技术和荧光检测技术相结

合，扩增产物检测中，避免了肉眼观察结果的主观误差，结果更客观、快速，便于临床上应用。

参

$

考文献

中华结核和呼吸病杂志T

&本试剂盒检测敏感性为($H&N（%!Q$$B），特异性

谭耀驹T李一耕T谭守勇T谢贝HM7A=U48V6;?1聚合酶链反应

为#@H#N（BGQB#），阴阳性符合率为(#H&N,（%!IBGQ和涂片法、培养法相比特异性相近而敏感性$(@）-，

差异有显著性，与本院$##B报告的检测痰标本中

如（$）3R1$!&SA结果相近,!-。可能与一些因素有关；

!

技术检测结核分支杆菌及临床应用H

$##%T!$’(#H

雷建平H肺结核病人同份痰标本涂片T培养与*:F扩增$!&SA结果比较H江西医药T$##BT&"D@E’$#%H

保定地区血小板三项指数正常参考范围的确立

高保成

蔡会欣

F@@GH$$I$

文献标识码!

文章编号$""%1""!&D!"""E"&1"$&(1"!

中图分类号

血小板计数在临床上常被用来监测病人的出凝血状况，随着许多现代化的全自动血球计数仪的不断涌出，对血小板功能的监测又增加了许多项目，象血小板平均体积、血小板主要用于对血小分布宽度等等。其中血小板平均体积（)*+）板减少原因的鉴别,$-，一般情况下，周围血小板破坏增多者骨髓损伤血小板减少者)*+减低，另外，)*+增高，)*+还可判断骨髓功能的预后。而*./是指血小板体积分布的变异系数，好多疾病都可引起以上指标的不同变化，在此不再赘述。而判断这些指标高低的标准就是这些指数的正常参考范围，虽然国内诸多作者已有过报道，但这些参考范围的报道是否适合本地区还有待于商榷，为此我们利用日本产01

!质量控制采用:;<=>8?公司提供的@:1A=<6全血质

控物分为正常、高值、低值三种，每日测定均值，标准差与变异系数，都在质控范围内。

&标本来源包括高考应届毕业生@B@名，男!$&名，

女!@$名。本市交通警察!"@名，男$(!名，女&!名。银行系统离退休干部，男@#名，女&$名。以上人员均经体格检查正常，年龄从$(C(&岁。

@检测方法

附表

手指末稍采血测定，按不同性别年龄分

组，得出各组结果，再进行统计分析。

本地区血小板三项指标测定结果#$"%

V("(

*:3DW$"#Q2E!"GH@YB&H(

)*+DX=E#H&BY"H%@

*./DNE#H%BY$H!(

%""全自动血球计数对本地区健康人群的*23、)*+、*./

三项指数进行了检测与探讨。

$仪器与试剂日本45678901%""全自动血球计数

B检测结果

仪，全套试剂由仪器公司配套提供。作者单位’"($"""

河北省保定市第一中心医院检验科

经统计学计算血小板三项指标结果在D下转$%@页E

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/x92j.html