普通固体制剂2015版微生物限度方法适用性试验报告

XX制药有限公司

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微生物限度方法适用性试验报告

文件编号：XXX

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起草人_____________ 审核人_____________ 批准人_____________

部门____________ 部门____________ 日期__________ _

___________ ___________ 日期日期

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1、概述

本公司主要产品之一，本产品已进行批量生产并已进行工艺验证,微生物检验相对稳定，由于《中华人民共和国药典》2015年版对微生物限度检查方法改变，其产品的微生物检验方法和培养基发生改变，可能影响检验结果的准确性。为确保检测方法的准确性及适应性，测定方法的可靠性进行验证，根据样品特性制定检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。 2、验证依据：《中华人民共和国药典》2015版 四部通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法、1107非无菌药品微生物限度标准。 3、验证目的

建立该产品的微生物限度检查方法，并对其有效性进行评价，确保试验方法的完整性，保证检验结果的可靠性。 4 、验证小组成员及职责 人 员 姓 名 组 长 副组长 成 员 职 位 质量部 经理 质量部 QC主任 职责 质量负责人负责验证报告的审核、批准。 1.负责对确认记录、数据进行复核，确认报告的总结。 2.负责对验证及检验记录、数据、结果进行分析和汇总。 1、负责验证报告的起草 检验人员 2、负责检验数据的收集、记录的填写 5、主要验证用仪器仪表的校验 仪器名称 立式压力蒸汽灭菌器 生化培养箱 超净工作台 结果：

确认人： 日期：

规格型号 检定情况 检定部门

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6、验证用菌种及培养基

菌种名称 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉 培养基、缓冲液名称 胰酪大豆胨琼脂培养基 胰酪大豆胨液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基 麦康凯液体培养基 麦康凯琼脂培养基 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 复核人

编号 （批号） 批号 来 源 配制批号 日 期 购进日期 传代日期 有效期至 传代 次数

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7、试验菌悬液制备

7.1 需氧菌总数计数方法适用性试验、霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验菌株培养 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌于胰酪大豆胨琼脂培养基上，于30-35℃培养3天；接种白色念珠菌、黑曲霉于胰酪大豆胨琼脂培养基上，于30-35℃培养5天，用于需氧菌总数计数方法适用性试验。

接种白色念珠菌、黑曲霉于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，于20-25℃培养5天，用于霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验。

取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加人3～5ml含0.05% (m l/m l)聚山梨酯8 0的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2?8℃ ,在验证过的贮存期内使用。 7.2 大肠埃希菌检查方法适用性实验菌株培养

将大肠埃细菌接种于胰酪大豆胨琼脂培养基上，30-35℃培养18-24小时，取培养物适量，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8℃，可在24小时内使用。

8、供试液的制备

取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，制成1：10的供试液。

8.1需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数计数方法适用性试验

8.1.1试验组 取上述1:10供试液1ml和不大于100cfu试验菌（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉），分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。

取上述1:10供试液1ml和不大于100cfu试验菌（白色念珠菌、黑曲霉），分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。

胰酪大豆胨琼脂培养基用于需氧菌总数计数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于霉菌和酵

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母菌总数计数。

8.1.2供试品对照组 取规定量供试液，按平皿法测定供试品本底菌数。 8.1.3菌液对照组：测定所加的菌液数。

8.1.4阴性对照组：取试验用的稀释液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。

8.1.5培养：需氧菌总数计数平板倒置于30～35℃培养箱中培养3天，霉菌、酵母菌总数计数平板倒置于20～25℃培养箱中培养5天。 8.1.6回收率计算：

试验组的回收率(%)?试验组平均菌落数?供试品对照组平均菌落数?100%

菌液对照组的平均菌落数8.1.7结果判断：试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液对照组的平均落数的百分率）应在0.5～2范围内。 8.2控制菌检验方法验证 8.2.1大肠埃希菌：

8.2.1.1试验组：取1：10的供试液10ml和不大于100cfu的大肠埃希菌菌液1ml，接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30～35℃培养18小时。

8.2.1.2供试品对照组：取1：10的供试液10ml接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30～35℃培养18小时。

8.2.1.3阳性对照组：取不大于100cfu的大肠埃希菌菌液1ml，接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30～35℃培养18小时。

8.2.1.4 阴性对照组：取试验用的稀释液10ml，接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30～35℃培养18小时。

取上述培养物1ml接种100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养 18小时。

若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，应进行分离、纯化适宜的鉴定试验，确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。

8.2.1.6结果判断：在麦康凯琼脂培养基平板上，阴性对照组与供试品对照组应无菌生长，其他各试验组应有菌落生长，并且经鉴定，显MUG与靛基质阳性。

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9、需氧菌总数计数方法适用性试验记录 菌种 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽 孢杆菌 白色念 珠菌 产品批号 黑曲霉 结论 检验人 复核人 日期 日期 试验组（cfu） 皿1 皿2 平均 供试品对照组（cfu） 皿1 皿2 平均 菌液组（cfu） 皿1 皿2 平均 阴性对照回收率 组（cfu）

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10、霉菌及酵母菌总数计数方法适用性试验记录 菌种 白色念 珠菌 产品批号 黑曲霉 结论 检验人 复核人 日期 日期 试验组（cfu） 皿1 皿2 平均 供试品对照组（cfu） 皿1 皿2 平均 菌液组（cfu） 皿1 皿2 平均 阴性对照回收率 组（cfu） XX制药有限公司

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11、大肠埃希菌检查方法适用性试验记录 产 品 批 号 试验组 供试品对照组 试 验 组 阳性对照组 阴性对照组 供试品对照组 试 验 组 阳性对照组 阴性对照组 供试品对照组 试 验 组 阳性对照组 阴性对照组 麦康凯琼脂培养基 日期 日期 BL MUG （ ml） 靛基质 结论 检验员 复核人

备注：“+”为有菌生长或呈阳性，“-”为无菌落生长或呈阴性 。

12、结论：本品按《中国药典》2015年版四部通则1105非无菌产品微生物

限度检查：微生物计数法，进行需氧气菌、霉菌和酵母菌总数计数验证，结果表明 用平皿法检查本品的需氧气菌、霉菌和酵母菌。 按1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法，进行控制菌检查方法验证，结果表明 用麦康凯液体培养基与麦康凯琼脂培养的相关方法检查大肠埃希菌。

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