MRSA的随机扩增多态DNA分型研究

通货膨胀相关的系列论文,包括通货膨胀的相关经济知识,通货膨胀经济形势下的各种矛盾和解决办法,例如人民币升值问题、外汇储备问题、农产品价格和CPI的变化和人民生活相关的方方面面。

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2 0 t 2 ( ) 0 9 Oc; 6 5

MRS的随机扩增多态 DNA分型研究 A吴晓宁覃锦耀周元圆韦惠如南宁 5 0 2 ) 30 1

(广西医科大学第一附属医院临床医学实验部

摘要目的：用随机扩增多态性 DN技术 ( P )对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 ( s进行基因分型研究，确定医院应 A RA D, MR A)以内是否存在 MR A流行。方法： S收集我院临床分离的 4 O株 MR A,用 R D技术进行同源性分析。结果： 0 MR A经 S采 AP 4株 S

电泳可得到 1 1条片段，为 6个基因型。结论： AP分型技术简便、速，医院感染流行病学调查中具有较大应用价~ 1分 R D快在值。

关键词

MR A; AP基因分型 S R D;文献标志码： A文章编号：0 59 0 2 0 ) 50 3— 2 1 0— 3 X( 0 9 0— 7 10

中图分类号： 7 . 1 R3 8 1

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 ( S是医院感染的重要 MR A)病原菌之一，所造成的院内感染一直是临床普遍关注的问其题 _。MR A大多表现为多重耐药，仅对内酰胺类抗 1’ S不

123 D . . NA的扩增：物：’ C C AC GA 3。反应体引 5。 G T C一’ C系：总体积 5 L, 1×P R扩增缓冲液 5 5 0mmo/ O肛含 0 C I 0 ( lIKC1 0 .1 0mmo/ ih Hc H一 8 4,2 lL Tr— lp s . 0mmo/ g ) 4 lIM 、

生素耐药，常对喹诺酮类、基糖苷类和大环内酯类等抗还氨生素耐药，导致的感染治疗较困难，亡率极高。因此，其死采取有效的流行病学分型手段监测 MRS分析其来源、布， A,分 对确定 MR A引起的感染暴发及其传播途径，而采取有效 S进的控制非常必要。中，机扩增多态性D其随 NA技术 ( AP R D)已广泛应用于 MR A分子流行病学研究。本实验利用此技 S术分析我院临床分离的 MR A,了解其在我院的流行情 S以况

,为进一步实验研究奠定基础。并

种 d T N P各 2 0 I、板 DN L、物 1 2 lI,增 0 模 A2引 5//扩 mo条件： 4℃ 4mi ( 4℃ 4 , 6℃ 4 , 5℃ 2mi ) 5 9 n,9 0S 3 0S6 n×3 循环， 5℃ 5mi。 7 n

1 24 D . . NA扩增产物分析：扩增产物及 MAR各 1 I取 K O 点样于 1 2琼脂糖凝胶进行电泳， 0 4 n并于计算 . 1 0 V, 0 mi,机凝胶成像系统拍照分析。 1 2 5 R P聚类分析：用 C o sC e k r 2和 N y . . A D采 r s h c e Ts s

2 1件对 RA D电泳图谱绘制成树状图进行聚类分析。 .软 P

1材料与方法1 1材料 .

2结果 2 1 MR A的来源与分布： O株 MR A, . S 4 S自分泌物分离出 1 6株， 4%;标本 1占 O痰 2株， 3;液 1占 O血 0株， 2;占 5胆

11 1菌株来源：集 2 0 . .收 0 7年 3~7月本院微生物实验室自 临床标本培养分离出的金黄色葡萄球菌，头孢西丁纸片法经

汁、列腺液各 1株。主要分布在烧伤科 ( 4例，5 o,C 前 1 3Y)IU( 7例，7 5 )肝胆外科 ( l ., 5例， 2 5 )儿科、内科、吸 1.%,肾呼

筛检出 MR A 4 S 0株，载体保藏法于一 2用 O℃保存。1 1 2主要试剂：脂型基因组 D ..树 NA提取试剂盒、 C扩 P R增试剂盒 ( E s-D P R P e X,扩 Ta A聚合即 ay O C rMI包 qDN酶、O C 1×P R缓冲液、 NT S、料、定剂 )随机引物 (’ d P染稳、 5一 C G T C一’ (京赛百盛公司 ) C C AC GA 3 )北。溶菌酶 ( oa b Sl i r o公司)。头孢西丁纸片 (国 0X(I。英 )D)

内科各 3,诊 2例，例门内分泌科、染科、科各 1例。传骨2 2 MR A的 R D电泳结果： O株 MRS电泳后，扩 . S AP 4 A可增出 1 1带，子量在 1 0 10 0 b~1条分 0~ 0 p之间，图 1通见。

过聚类软件分析，分为 6个基因型，中 A型 2可其 o株 (株菌l 2、、、、、 4、 6、 7

1、 3、 4、 8 3、 5 3 )、 5 7 8 9 1 1 1、 8 2 2 2~ 3 3、 6,B型 1 2

1 1 3主要仪器、备： e m l t n C r o ai C ..设 Th r o E e r o p r t n P R co o仪， y e eG n nn全自动凝胶成像仪。 S s n e e Ge is1 2方法 .

株(菌株 3 1~2、 5 2 3 3~3 ) C型 1株 (株 6,、 9 2 2~ 7、4、 7 9,菌 ) D

型 4株 (菌株 4 1、 3 4 ) E型 2 (株 1、 5,、 O 1、0,株菌 1 1 ) F型 1株(株 l )菌 2。

1 2 1 MRS的鉴定：照 C I美国临床实验室标准化 . . A按 I ( S

协会 )20 0 7版的标准进行。头孢西丁纸片扩散法抑菌圈直径≤ 1 9mm为耐药、 2 ≥ 0mm为敏感。控菌株 A C 5 2。质 TC 2 9 3 1 2 2 MR A基因组 D . . S NA的提取：格按照说明书要求操严作。

1广西医科大学 20级医学检验本科生 03收稿日期： 0 8 1 - 1 2 0— 23

通货膨胀相关的系列论文,包括通货膨胀的相关经济知识,通货膨胀经济形势下的各种矛盾和解决办法,例如人民币升值问题、外汇储备问题、农产品价格和CPI的变化和人民生活相关的方方面面。

广西医科大学学报

20 t2 () 0 9Oc; 6 5

0 0b 0 p 9 0b 0 p 8 p 00 b 7 0b 0 p 6 0b 0 p 5 0b 0 p 4 0b 0 p 3 0b 0 p 2 0b 0 p 10b 0 p

l 23 45 6 78M 91 l 21 41 l M l 81 2 2 2 2 2 M 2 627282 O3l3 01 l 31 5 6 7l 9 O l 2 3 4 52 93 2M 3 43 63 83 0M 33 53 73 94

图 1 4 O株 MR A的 R D电泳图谱 S AP

M为 Mak数字 1 O为菌株 r,~4S等多重耐药菌的患者必须采取隔离措施和进行彻底的清 A洁与消毒，止耐药菌株引起暴发流行。防 由于引物是通用的，必预先知道该物种的基因序列，不 同一引物可用于不同细菌医院感染的调查，加了 R P增 A D技术在医院感染部门广泛应用的可行性。尤其是为暴发流行

3讨论近年来，由于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染率的不断上升和其具多重耐药性的特性，之成为现有抗生素难以控使制的医院感染菌， l治疗带

来严重困难。除了不断增加给临床的耐药问题， S的流行也正从医院向社区发展，其成 MR A使为医院和社区感染的严重问题。 采取彳效的流行病学分型于段监测 MR A,析其来 S分

的调查、寻找传染源、制医院感染争取了时间。控

参考文献：[]张庆玲，明华。仙园. 1刘王耐氧西林葡萄球菌的研究进展[] I医学感染学杂志， 0 2 1 ( 0: 9 9 . J. 1 华 2 0 .2 1 )7 778 E 3 S k ua .; l HS, n aaa a ,ta 2 ao l G ( d s o Ve k tr m n I e 1 .Meh— ticli— e it nt iln r s sa St p a hylc)c a e s: c o ( us ur u om p rs o c a ion f s c p iiiy e tn m e ho a d n l ss f us e tb lt t s i g t ds n a a y i o m e A— c

源、克隆相关件和分布，识别 MR A感染暴发及其传播途对 S径常重要。RAP技术的显著优点是可在模板 DNA序列 D

末知情况下任意没计引物，即不需要预先了解目的基冈和相应的序列，物具有普遍适用性，一种操作简便、速、引是快具有高分辨力的分型方法。通过对同一表型的菌株进行基因

分型，叮从根本上确定菌株遗传基础问的相互联系及变异， 结合l临床可追踪传染源及可能的传染途径；定同一病人反确复感染属于复发或再感染。但 R D的应用也有局限件， AP 最主要的是缺乏重复性和标准化，实验结果实验条件密切相关，同实验室结果缺乏可比十同一实验室反砬条什 ( l不牛， L j 物、浓度、板浓度、制条件 )同，纹图谱亦同。敞镁模控不指实验只使用于同批结果比较，不能与以件结果比较。而 国内、均有报道 MR A院内感染主要是少数流行菌株外 S感染所致，之为 EMRS即 e ie csri fMR称 A( pd mi tano SA)。。 。

p s ies se t l sris J . co il l, 0 1 3 o i v u c pi e t n[] Ji b i 2 0 . 9 t b a

r oC n( ):3 4 3 95 . 11 9 6 1

[ 2 I mbcA。 o e ( 3 ' i a P w r n ls f n o tra f o E .A a i o u be k o n n y s apb ge Typ a em e hiiln r it ntSt hy0㈣ c J u a e bl t cli essa l¨ sa r u y u i a do l m plfe ol e s b sng a r n m ya iid p ymor h DN A s p a

syJ .、nMi o il 9,5 30 230 7 a[] j(i l e b,1 7 3: 9 9 . r o 9 [] Ai s e S u a M . e 1 n a l . r g s f m h s i 4 d o s r e Hd . c sr H i e r o p e e d ot l o t a or t y: ne i a st hel b a or ge tcPor l e h cli— e taisofm t iiln r— r

s tn a I lc c u u e sc n sJ .F MS l i a t 1 y o c sa r u l e[] E s ) o 1 o mmu—no M e ir l d M c obi1 2 04. 0: 01 1 o. 0 4 1 l . 1

本次研究也得到相似结果。 0株 MR A的 R D可分为 6 4 S AP 种类型：犁 2 A O株， B型 1 ,型 1株，型 4株， 2株 c D E型 2株. F型 1株。分离的 4 0株 MRS集中在 A、 A B型。主要分布在烧伤及 I病区，他科室分离的菌株数量较少，因型 CU 基

I] H r yK .Usey 1, )p n e A. t 1 ) t s ad J s r W (p e h i B e a ) m .I sr i ibuto a c r c e ia i of tn nd ha a t rz ton St phyoc c i er a l oc us nt s r e r e t u l (SI pe s d ep a nis RU s) an p e tal d ot n i us f e or

也较分散。烧伤科感染者多有大面积烧伤，肤屏障破坏；皮 1 U病房患者多数有基础疾病 .疫功能低下 .受侵入件 C免接

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操作如使用呼吸机、心静脉插管等。巾大使 J广潜抗茼约}} j物，易发生 MR A感染。其传播斤式町能为直接接触 (容 S患者之间、者与医护人员之 r )或通过于、品 I按接触 .患 n . J物 h J仃待于进一步的证实。有报道 . I环境及阪人的 父院 必颂要求

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手、前庭均可分离出 MR A。此 .牺鼻 S

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本文来源：https://www.bwwdw.com/article/wlmj.html