昆虫细胞色素P450基因的多样性_进化及表达调控_郭亭亭

昆虫学报ActaEntomologicaSinica,March2009,52(3):301-311

ISSN0454-6296

昆虫细胞色素P450基因的多样性、

进化及表达调控

郭亭亭,姜 辉,高希武

1

2

1,*

(1.中国农业大学农学昆虫学系,北京 100193;2.农业部农药检定所,北京 100024)

摘要:细胞色素P450单加氧酶(cytochromeP450monooxygenases,P450s)是由多个功能相关的亚铁血红素-硫醇盐蛋

白基因组成的一个基因超家族,在各种内源和外源物质的代谢中起着主要作用。目前GenBank中注册的昆虫P450基因序列已超过1000个,其中双翅目占序列总数的74%,鳞翅目占序列总数的16%。而昆虫P450基因序列已克隆的全长序列中大部分属于CYP4和CYP6家族,两个家族成员分别占总数的20%和45%。利用GenBank中现已注册的昆虫P450基因的cDNA全长序列进行比对并绘制进化树,揭示不同种类昆虫P450的亲缘关系。结果显示基于P450基因的昆虫部分目的进化关系与大部分先前依据其他分子数据或形态分类学得到的昆虫系统进化关系基本吻合。现有研究表明,细胞色素P450基因的表达可能受顺式作用元件(cis-actingelement)、反式作用因子(trans-actingfactor)或两者共同调控,调控可能涉及转录增强的转录机制或mRNA稳定性增加的转录后机制。关键词:细胞色素P450;多样性;亲缘关系;基因表达与调控中图分类号:Q965.9 文献标识码:A 文章编号:0454-6296(2009)03-0301-11

Diversity,evolutionandexpressionregulationofcytochromeP450monooxygenasegenesininsects

GUOTing-Ting,JIANGHui,GAOX-iWu(1.DepartmentofEntomology,ChinaAgriculturalUniversity,Beijingl00193,China;2.InstitutefortheControlofAgrochemicals,MinistryofAgriculture,Beijing100024,China)

:CytochromeP450monooxygenases(P450s)areasuperfamilyofgenesencodingmultifunctionalAbstract

heme-thiolateproteinsthatplayadominantroleinthemetabolismofawidevarietyofbothendogenousandxenobioticsubstances.ThetotalnumberofP450genesininsectsregisteredintheGenBankisover1000.MostoftheregisteredP450genesequencesarefromDiptera(74%)andLepidoptera(16%).Ofthetotalful-llengthsequencesofP450genesofinsectsregistered,20%areCYP6membersand45%CYP4members.AnovelphylogenetictreeoftheinsectP450superfamilywhichexpoundsevolutionaryrelationshipofdifferentsubfamiliesandorderswashereconstructedusingamultiplealignmentoftheregisteredinsectP450sequences.Therelationshipsofinsectordersrevealedbythephylogenetictreemostmatchtheevolutionaryrelationshipsofinsectordersbasedonothermoleculardataormorphologicaltaxonomy.ThepresentresearchindicatesthattheexpressionofcytochromeP450genesmayberegulatedbycis-actingelementor/andtrans-actingfactor,andtheregulationmechanismsmayinvolvethetranscriptionenhancement(transcriptionalmechanism)oranincreaseinmRNAstability(pos-ttranscriptionalmechanism).Keywords:CytochromeP450;diversity;evolutionaryrelationship;geneexpressionandregulation 细胞色素P450单加氧酶系是一种广泛分布于需氧生物体内的氧化酶系,由细胞色素P450单加氧酶、细胞色素b5和NADPH-细胞色素P450还原酶等多种成分组成。细胞色素P450单加氧酶

(cytochromeP450monooxygenase,P450)是一类含血红素和硫羟基的蛋白,它是微粒体多功能氧化酶的末端氧化酶,从NAD(P)H获得电子后,催化单加氧反应(Greenetal.,2004;HoshiandLahir,i

1

2

1,*

基金项目:国家重大基础研究规划(/9730计划)项目(2006CB102003);高等学校科技创新工程重大项目培育资金项目;国家/十一五0国家科

技支撑计划项目(2006BAD08A03);国家自然科学基金项目(30170621)

:guott830506作者简介:郭亭亭,女,1983年5月生,硕士研究生,主要从事昆虫毒理学和分子生物学研究,E-mail@

*

:gaoxi通讯作者Authorforcorrespondence,E-mailwu@

::;-15

302昆虫学报ActaEntomologicaSinica52卷

2004)。但由于昆虫P450含量低且不稳定,从昆虫中纯化、鉴定P450难度较大。80年代末以后,昆虫P450新基因不断被克隆出来,对于昆虫P450的研究才取得了迅速的发展。

细胞色素P450是参与外源和内源化合物合成、分解的一种重要代谢酶系(Feyereisen,1999;Scot,t1999)。P450在生物体中分布广泛,1967年Ray首先在家蝇Muscadomestica中确定P450的存在。由于生物体中P450种类的多样性和P450广泛的底物特异性,细胞色素P450在昆虫的生命过程中有多种功能。包括参与杀虫剂和植物次生物质的代谢以及蜕皮激素、保幼激素、性信息素的合成,与昆虫的生长、发育和防御密切相关(Feyereisen,1999;ScottandWen,2001)。昆虫利用P450的调控作用对寄主植物产生适应性(Liuetal.,2006)。昆虫通过集中于中肠的解毒系统(包括P450s、谷胱甘肽-S-转移酶和酯酶等)对摄入的有毒物质(包括植物次生物质)快速代谢,而脂肪体有利于代谢经表皮或气管进入体内的有毒物质(于彩虹等,2002)。P450单加氧酶在昆虫的各个组织中广泛分布,中肠、脂肪体和马氏管中活性较高(Scot,t2008)。在昆虫的各个发育阶段,P450单加氧酶的活性有显著的变化,在各个龄期的幼虫中活性变化明显(Scot,t1999,2008)。虽然细胞色素P450家族成员之间的一级结构差异较大,氨基酸序列同源性很低,但是越来越多的证据表明,细胞色素P450的空间结构却有着较大的相似性,并且含有由含铁血红素和半胱氨酸组成的活性中心(WellerandFoster,1993;SagmiandShimizn,1998)。有关昆虫P450生化特性、诱导特性、结构与功能的关系以及基因的表达调控已有一些综述(Brattstenetal.,1986;Scot,t1999;Feyereisen,2005)。

细胞色素P450起着对杀虫剂解毒和活化的双重作用(Hardstoneetal.,2007;Scot,t2008)。P450单加氧酶作为昆虫体内三大解毒酶系(细胞色素P450、谷胱甘肽-S-转移酶和乙酰胆碱酯酶)之一,现已证明是大多数重要害虫对杀虫剂产生高水平抗性和交互抗性的主要原因。代谢抗性的化学本质是杀虫剂代谢活性的增强,归因于相关酶在数量或质量上的改变,可能涉及的机制包括基因扩增、酶基因突变以及基因转录的增强等(LiuandScot,t1998)。对于昆虫抗性的产生和调控机制唐振华和吴士雄(2000)以及邱星辉和冷欣夫(1999)已经作近年来随着科技的发展,大量的CYP基因得到克隆和鉴定。本文总结了昆虫各个目在GenBank中已注册的P450基因cDNA序列,利用软件进行序列比对并构建进化树,用以研究不同种类昆虫P450的亲缘关系。并对P450基因的表达调控机制的最新进展进行综述。

1 昆虫P450基因的种类多样性

细胞色素P450是有35亿年进化历史的古老基因家族(Nelson,1998),有极大的种类多样性(WojtasekandLea,l1999)。细胞色素P450单加氧酶是由多个基因家族组成的一个基因超家族(superfamily),并被进一步分成许多基因家族(family),每个基因家族又包括数个基因亚族(subfamily)。昆虫P450基因家族分别拥有众多的亚家族成员和等位基因突变体,对于P450的命名曾经比较混乱。Nebert等提出的P450系统命名法现已被广泛接受(Nebertetal.,1987,1989,1991;Nelsonetal.,1993,1996)。在该系统中所有物种的细胞色素P450同工酶(除果蝇及鼠基因用C'yp外')均以字母/CYP0为词首。随后的阿拉伯数字表示不同家族,阿拉伯数字后的大写字母表示不同亚家族,字母后面的数字表示不同的同工酶。细胞色素P450的氨基酸若有40%以上的一致性(identity),归于同一家族,如CYP6;氨基酸序列若有55%以上的一致性则归于同一亚家族,如CYP6A。用正体大写代表基因产物、mRNA或蛋白质;基因用斜体表示。

已发现的昆虫P450基因分属于CYP4,CYP6,CYP9,CYP12,CYP18,CYP28,CYP49和CYP301-34148个家族(Amenyaetal.,2008)。其中CYP6,CYP9,CYP12,CYP18和CYP285个基因家族为昆虫特有(Bergeetal.,1998)。大量的CYP6以及CYP4家族成员在抗性品系品系中表现出过量表达因而被认为是抗性相关的P450基因。

截止至2007年12月,GenBank中注册的昆虫P450cDNA已超过1000个。黑腹果蝇Drosophilamelanogaster和冈比亚按蚊Anophelesgambiae基因组测序的完成为双翅目昆虫P450数目的迅速增长奠定基础。鳞翅目因为包含多种农业害虫也进行了较多的研究。已注册的昆虫P450cDNA全长序列及片段共有1043个,其中全长序列259个,片段,

3期郭亭亭等:昆虫细胞色素P450基因的多样性、进化及表达调控

表1 已克隆的昆虫P450基因cDNATable1 ClonedP450cDNAininsects

303

片段数

种类Species

cDNA全长序列cDNAful-llengthsequences

Numberofsegments

鳞翅目Lepidoptera家蚕Bombyxmori

CYP4G25,

CYP4M5,

CYP4M9,

CYP6AB4,

CYP6AB5,

CYP6AE,

CYP6AE2,

CYP6AE9,

20

CYP6AE8,CYP6AE22,CYP6AE21,CYP6AE7,CYP6AU1,CYP6B29,CYP9A20,CYP9A19,CYP9A19(strainDazao),CYP305B1,CYP337A1

小菜蛾Plutellaxylostella野桑蚕Bombyxmandarina烟芽夜蛾Heliothisvirescens烟草天蛾Manducasexta斜纹夜蛾Spodopteralitura香芹黑凤蝶Papiliopolyxenes天蚕Antheraeayamamai欧洲防风草结网毛虫Depressariapastinacella棉铃虫Helicoverpaarmigera美洲棉铃虫Helicoverpazea凤蝶Papiliocanadensis北美黑条黄凤蝶Papilioglaucus甘蓝夜蛾Mamestrabrassicae烟青虫Helicoverpaassulta小计Subtotal双翅目Diptera黑腹果蝇

Drosophilamelanogaster

CYP4AC1,CYP4AC2,CYP4D8,CYP4G15A,CYP6A9,CYP6A22,

CYP4D14,CYP6A13,CYP6A23,

CYP4AC3,CYP4AD1,CYP4D21,

CYP4P1,CYP6A14,CYP6D2,

CYP4E1,CYP4P2,CYP6A17,CYP6D4,

CYP4C3,CYP4E2,CYP4P3,CYP6A18,CYP6D5A,

CYP4D1A,CYP4D1B,CYP4D2,CYP4E3,CYP4S3,CYP6A19,CYP6D5B,CYP18,

CYP4G1,CYP6A2,CYP6A20,CYP6G1,

CYP4AE1,CYP6A8,CYP6A21,CYP6G2,CYP18A1B,CYP311A1B,CYP313B1,

59

CYPM3R9,

CYPM3R5,

CYP6AA1,

CYP6M1,

CYP6N1,

CYP6N2,

CYP6P1,

CYP6P2,

162

CYP6BF1(v1,v2,v4)

CYP4M9,CYP6AB4,CYP6B29,CYP9A19,CYP9A22,CYP305B1v1,CYP9A1v2

CYP4M2,CYP307A1,CYP314A1,CYP315A1,CYP302A1,CYP306A1

CYP4M14v1,CYP4S9v1

CYP6B3(v5,v4,v3c,v3b,v3a),CYP6B1(v2,v1)CYP4G25

CYP6AB3v2,CYP6AB7,CYP6AB3,CYP6AE1C

CYP6AE12,CYP6B2,CYP6B6(midgut),CYP6B6(fatbody)CYP6B7,CYP9A12,CYP9A14,CYP9A17,CYP9A18

CYP4M6,CYP4M7,CYP6B8,CYP321A1CYP6B25,CYP6B26

CYP6B4,CYP6B23,CYP6B24CYP4L4,CYP4S4178

84109811914012250110

CYP9A19(strainLaos),CYP9A22,CYP9A22(strainDazao),

CYP18A1,

CYP302A1,

CYP315A1,

CYP306A1,

CYP9A22(strainLaos),CYP9A21,

CYP4G15B,

CYP6T1,CYP6T3,CYP6U1,CYP6V1,CYP6W1,CYP9B1,CYP9B2,CYP9C1,CYP9F2,CYP9H1,CYP12A4,CYP12A5,CYP307A1,CYP308A1,CYP312A1,

拟暗果蝇Drosophilapseudoobscura冈比亚按蚊Anophelesgambiae

CYP313A1,

CYP12B2,CYP12C1,

CYP309A2,CYP313A3,

CYP18A1A,CYP311A1A,CYP313A5,

CYP28A5,CYP28C1,CYP28D1,CYP28D2,CYP301A1,CYP303A1,CYP304A1,CYP305A1,

CYP309A1,CYP313A2,

CYP310A1,CYP313A4,

CYP314A1,CYP315A1,CYP316A1,CYP317A1,CYP318A1

CYP6P3,CYP6P4,CYP6R1,CYP6S1,CYP6S2,CYP6Y1,CYP6Z1,CYP6Z2,CYP6Z3,CYP9K1,CYP12F1,CYP12F2,CYP12F3,CYP12F4CYP4D3v2,

家蝇Muscadomestica

CYP4D4v2,

CYP4D35,

CYP4D36,

CYP4G2v1,

CYP4G13v2,

CYP6A5v2,

CYP6A24,CYP6A36,CYP6A37,CYP6A38v1,CYP6D1,CYP6D3v2,CYP6D3v3,CYP12A1,CYP12A2,CYP28B1

5

304

续表1 Table1continued

昆虫学报ActaEntomologicaSinica52卷

片段数

种类Species

cDNA全长序列cDNAful-llengthsequences

Numberofsegments

埃及伊蚊Aedesaegypti淡色库蚊Culexpipiens白纹伊蚊Aedesalbopictus蚊虫Ochlerotatussollicitans果蝇Drosophilamettleri果蝇Drosophilapachea海德氏果蝇Drosophilahydei微小按蚊Anophelesminimus不吉按蚊Anophelesfunestus白腹丛蚊Armigeressubalbatus小计Subtotal鞘翅目Coleoptera

赤拟谷盗Triboliumcastaneum马铃薯甲虫Leptinotarsadecemlineata

青杨虎天牛Xylotrechusrusticus椰心叶甲Brontispalongissima异发丽金龟Phylloperthadiversa玉米根莹叶甲Diabroticavirgifera小计Subtotal膜翅目Hymenoptera意大利蜂Apismellifera红火蚁Solenopsisinvicta小计Subtotal半翅目Hemiptera

美国牧草盲蝽Lyguslineolaris长红锥蝽Rhodniusprolixus柑橘木虱Diaphorinacitri

桑粉介壳虫Maconellicoccushirsutus小计Subtotal等翅目Isoptera

山林原白蚁Hodotermopsissjostedti澳大利亚矛颚家白蚁Coptotermesacinaciformis达尔文澳白蚁Mastotermesdarwiniensis

黄肢散白蚁Reticulitermesflavipes小计Subtotal

2CYP4U1

51221

CYP6AM1

4

3

CYP6X1(v1,v2,v3)

CYP4G11,CYP6AS5,CYP314A1CYP4AB1,CYP4AB25

030011130

7

CYP4Q4,CYP4Q7

CYP4G29,CYP6BH1(v1,v2),CYP6BJ1,CYP9V1

331533483

152

CYP6P7,CYP6P8CYP6B9

CYP6AL1,CYP9J1,CYP9J2,CYP302A1,CYP314A1,CYP315A1CYP6E1,CYP6F1CYP6N3(v1,v2,v3)

CYP6P1(v1,v2,v3,v4,v5),CYP6BB1(v1,v2,v3,v4,v5)CYP4D10,CYP4E5,CYP9B3,CYP28A1,CYP28A2

1972671809101756153

3期

续表1 Table1continued

郭亭亭等:昆虫细胞色素P450基因的多样性、进化及表达调控 305

片段数

种类Species

cDNA全长序列cDNAful-llengthsequences

Numberofsegments

蜚蠊目Blattaria

太平洋折翅蠊Diplopterapunctata德国小蠊Blattellagermanica小计Subtotal啮虫目Psocoptera

嗜卷书虱Liposcelisbostrychophila小计Subtotal总计Total

CYP6CE1,CYP6CE22259

2784

CYP9E1,CYP15A1

CYP4G15,CYP4C21,CYP6J1,CYP6K1,CYP6L1,CYP9E2P1,CYP9E2,CYP9E2P210

4824

cDNA片段615个,共占序列总数的74%;鳞翅目已克隆的全长cDNA序列78个,cDNA片段84个,共占序列总数的16%。这两个目昆虫的P450占昆虫P450cDNA总数的90%。双翅目P450全长序列及片段大部分来自黑腹果蝇、冈比亚按蚊和埃及伊蚊Aedesaegypti;鳞翅目P450则大多来自家蚕

Bombyxmori。其余几个昆虫目的P450基因全长序列集片段以鞘翅目(55个)、等翅目(23个)、蜚蠊目(18个)居多,这3个目的序列数占总数的9%。CYP4和CYP6家族与昆虫抗药性相关,所以有大量的基因被克隆。在已克隆的全长序列中大部分属于CYP4和CYP6家族,CYP4家族已克隆的全长序列有51个,CYP6家族已克隆的全长序列有116个分别占全长cDNA的20%和45%。

随着研究的深入,细胞色素P450家族正在不断扩充,基因数目不断增加。但研究集中在双翅目和鳞翅目等少数几个目的几个昆虫种,对于昆虫纲P450的整体情况还需进一步研究。

翅目、膜翅目、鞘翅目等4个目部分昆虫的CYP307,CYP306,CYP302等P450Halloween家族基因的系统发生关系,发现它们和脊椎动物P450来源于共同的祖先。为了解昆虫P450基因的系统进化关系,利用GenBank现已注册的大部分昆虫P450全长基因序列构建系统进化树(图1)。构建系统进化树之前首先采用ClustalX1.83对P450的核苷酸序列进行序列比对,然后利用MEGAversion3.1进行系统进化树的构建。系统进化树的构建方法为最大简约

法(maximumparsimonymethod,MP),参数选择软件默认的缺省参数(bootstrap检验重复500次)。昆虫细胞色素P450系统进化树包括8个目34个种。如图1所示,CYP12和CYP314,CYP315等线粒体P450家族很早就分化出来了,这一支系可能在真核和原核生物分化之前就已生成了。CYP4家族可能是昆虫CYP家族中最早分化出来的一个,与先前报道的研究结果(DegtyarenkoandArchakov,1993)一致。已测出全长序列的昆虫P450基因中,接近半数的基因属于CYP6家族。CYP6是与昆虫抗性的产生关系最密切的一个基因家族,因而不断有新的基因被克隆出来。图1显示,CYP6家族中CYP6D亚族是优先于其他CYP6亚家族分化出来的,与CYP4亲缘关系较其他CYP6亚族近。推测CYP6D亚族可能是最早从CYP4家族中分化出来的一个CYP6亚家族。

图1显示,与CYP6和CYP9等昆虫特有家族相比,CYP4家族在进化关系上属于单独的一支,这一支包括了所有已知全长序列的CYP4家族成员。已有文献报道昆虫细胞色素P450R的CYP4家乳,

2 昆虫P450基因的进化关系

虽然细胞色素P450有35亿年的进化历史,而古生物学及地质学证据表明,昆虫及其他陆生节肢动物起源于距今约3亿年以前。Nelson等(1998)构建的包括70个动物细胞色素P450的系谱发生树显示:在CYP3ClAN中包含的昆虫CYP6家族和CYP9家族与哺乳动物CYP3和CYP5家族亲缘关系较近。有学者推测昆虫CYP6家族约在3亿~7亿年前从CYP3家族中分化出来的(NelsonandS

CYP4与CYP6可能是在哺乳动物与昆虫分化之前通过基因复制而产生的(WangandHobbs,1995)。Ono等(2005)研究发现,几种昆虫的CYP4家族基因和果蝇CYP311A1,CYP312A1亚族亲缘关系较近,与图1显示的结果一致。CYP6家族的进化关系较为复杂,虽然所有的家族成员都属于在进化关系上和CYP4并列的一个大的支系,但这个支系里包括CYP6,CYP9,CYP18,CYP28等多个基因家族。这与Feyereisen(2005)的研究结果一致。CYP6家族中的各个亚族的进化关系也错综复杂,

CYP6B,CYP9,CYP18和CYP28等在另一个进化支系上。CYP6B和CYP9亲缘关系较近,而CYP18和CYP28的亲缘关系较近。在分化时间上,CYP18和CYP28的分化早于CYP6B和CYP9。CYP6B亚族可能是CYP6家族最晚分化出来的。图1显示,CYP6D亚族是CYP6家族中最先分化出来的一个亚族,有可能是其他亚族的祖先。Tomita和Scott(2005)通过比较不同CYP6亚族基因的内含子也推断CYP6A1,CYP6A2和CYP6B1可能是由CYP6D1

进化而来。

图1 Genbank中已注册的昆虫纲P450全长cDNA序列系统进化树Fig.1Phylogenetictreeofful-llengthinsectP450cDNAregisteredinGenBank

在GenBank中输入/种名+P4500进行检索得到cDNA全长序列。用ClustalX1.83和MEGA3.1,进行序列比对和进化树构建。进化树构建方法为MP法,bootstrap检验重复500次。Searchforful-llengthP450cDNAinGenBankwiththesearchword/specificname+P4500.SequencealignmentisdonebyClustalX1.83andthephylogenetictreeisbuiltbyMEGA3.1.TheMPmethodwasusedtoformthetreeandthebootstrapvalueis

图2 昆虫纲若干目的进化关系

Fig.2Evolutionaryrelationshipsofseveralordersininsecta

A:8个目的形态学进化关系(仿周尧,2001)Morphologicalrelationshipsof8insectorders(adaptedfromZhou,2001);B:由图1中CYP6亚族的进化树显示的昆虫5个目P450进化关系EvolutionaryrelationshipsofP450sin5insectordersaccordingtothephylogenetictreeofCYP6inFig.1;C:由图1中CYP4亚族的进化树显示的昆虫4个目P450进化关系EvolutionaryrelationshipsofP450sin4insectordersaccordingtothephylogenetictreeofCYP4inFig.1;D:由图1中CYP6和CYP4亚族的进化树显示的昆虫7个目P450进化关系EvolutionaryrelationshipsofP450sin7insectordersaccordingtothephylogenetictreeofCYP6andCYP4inFig.1.

由于黑腹果蝇Drosophilamelanogaster,冈比亚按蚊Anophelesgambiae等双翅目昆虫基因组测序的完成和对棉铃虫,香芹黑凤蝶Paliopolyxene,北美黑条黄凤蝶Papilioglaucus等鳞翅目农业昆虫广泛

研究的深入,现已分离和鉴定的大部分P450基因都集中在双翅目和鳞翅目。图1包括的已知全长序列的P450基因中,CYP6A亚族成员大多来自双翅目,而CYP6B亚族的成员基本都来自鳞翅目。证明CYP6A和CYP6B两个亚族可能是在双翅目和鳞翅目分化出来后才生成的。

与CYP6A亚族同源的一个进化支系包含多个目的CYP6家族基因,分别是半翅目美国牧草盲蝽Lyguslineolaris的CYP6X亚族,鞘翅目马铃薯甲虫Leptinotarsadecemlineata的CYP6BH和CYP6BJ亚族,等翅目Hodotermopsissjoestedti的CYP6AM亚族,啮目嗜卷书虱Liposcelisbostrychophila的6CE亚族和蜚蠊目德国小蠊Blattellagermanica的CYP6J,CYP6K,CYP6L亚族。从图1的显示的亲缘关系来看,这几个目的CYP6基因很早就与大多数双翅目CYP6A亚族基因分化成两个不同的支系了,这与这些基因所属目的形态学分类关系大致相似:)(:B)可得,蜚蠊目的CYP6族基因相对化关系(图2

于上述其他几个目是较早分化出来的。等翅目和啮虫目的CYP6族基因表现出一定的同源性,在分化时间上也在蜚蠊目CYP6族之后。半翅目和鞘翅目

是真变态群中较晚分化的目,两者的CYP6族基因有同源性,相对于上述其他几个目的CYP6族基因也是最晚分化出来的。但由于这几个目已分离的P450全长基因数目很少,它们确切的进化关系仍需进一步研究。CYP4亚族系统进化树显示,各目P450分化的时间从早到晚分别是:蜚蠊目、鞘翅目及膜翅目和鳞翅目(图2:C)。由CYP6和CYP4家族进化树推测的各目P450进化关系如图2(D)。

3 昆虫P450基因的调控

昆虫细胞色素P450可被药物、植物次生性物质、杀虫剂等诱导。关于昆虫P450的调控邱星辉和冷欣夫(1999)已经作出较详细的综述。研究发现,P450介导昆虫抗性的可能机制包括P450的过量表达(Hemingwayetal.,2004)和氨基酸残基改变。调控基因的突变引起的P450的过量表达可能是P450

近几年又不断有新的研究结果证明P450的过量表达在介导昆虫抗性产生方面的重要作用。Bautista等(2008)发现氯菊酯抗性品系小菜蛾Plutellaxylostella4龄幼虫体内的P450基因CYP6BG1过量表达,并通过基因沉默证明过量表达的CYP6BG1增强了氯菊酯的代谢,从而导致抗性的产生。Karunker等(2008)发现,B型和Q型烟粉虱对吡虫啉的抗性由CYP6CM1过量表达引起的。Willoughby等(2006)利用微阵列技术证明了在杀虫剂抗性的果蝇中,P450基因的过量表达起着重要作用。Strode等(2008)通过构建埃及伊蚊的P450,GSTs及酯酶和胆碱酯酶等235个抗性有关的基因的微阵列芯片,表明了CYP9亚族在抗性品系中高度表达。Daborn等(2007)利用GAL4/UAS系统研究表明果蝇P450Cyp6g1,Cyp6g2和Cyp12d1基因的过量表达导致了其对DDT、烯啶虫胺、环虫腈、二嗪农的抗性。LeGoff等(2006)利用微阵列技术对86个果蝇P450基因的表达差异研究,发现苯巴比妥或莠去津可以诱导Cyp6a2,Cyp6w1和Cyp12d1基因过量表达。

细胞色素P450基因系统是一个十分复杂的体系,它的表达调控是生物体内和体外多种因素相互作用的结果。其中基因激活和转录水平的调节是基因调控的最主要环节。发生在基因转录水平上的调控涉及顺式作用元件(cis-actingelement)和反式作用因子(trans-actingfactor)两个因素(唐振华和吴士雄,2000)。P450的表达可能受顺式调控元件,反式作用因子或顺式、反式因子的共同调控,调控可能涉及转录增强的转录机制或mRNA稳定性增加的转录后机制(邱星辉和冷欣夫,1999)。上述几种P450表达调控机制在昆虫中都已经发现。抗性品系的昆虫受到诱导后往往在顺式调控元件或反式作用因子的调控下产生P450的过量表达。

3.1 受顺式元件调控的昆虫P450基因

香芹黑凤蝶P.polyxene的CYP6B1v3(Prapaipongetal.,1994)、北美黑条黄凤蝶(P.glaucus)的CYP6B4(Mcdonnelletal.,2004)、家蝇的CYP28B1和CYP4G13v2(LiuandZhang,2002)、不吉按蚊A.Funestus的CYP6P9(Amenyaetal.,2008)等P450基因都受顺式元件调控。

Prapaipong等(1994)对香芹黑凤蝶P.polyxene的研究发现CYP6B1v3基因启动子序列包含TATA和CAAT盒等顺式元件,这些顺式元件在昆虫受到花椒Hung等(1996)通过分析来自P.polyxene的CYP6B4v2、CYP6B5v1和来自P.glaucus的CYP6B1v3和CYP6B3v2等4个基因的5c端上游序列发现,它们的启动子区存在XRE-xan(xanthotoxinresponsiveelement)等相似的转录调控元件。Petersen等(2003)通过研究CYP6B1v3启动子区操控报告基因CAT在Sf9细胞中的表达证明,在香芹黑凤蝶CYP6B1v3基因启动子存在重叠的EcRE/ARE/XRE-xan元件,用于激活过量表达。Mcdonnell等(2004)研究发现,在北美黑条黄凤蝶P.glaucus中代谢呋喃香豆素的P450基因CYP6B4和CYP6B1启动子在某些区域高度相似,也存在EcRE/ARE/XRE-xan元件,这些转录调控元件在花椒毒素或苯并芘诱导下调控CYP6B4基因的过量表达。Brown等(2004)发现C/EBP和Inr等更接近启动子的元件也在花椒毒素的诱导下调控CYP6B1v3的过量表达。Liu和Zhang(2002)通过对家蝇的研究发现,P450基因CYP28B1和CYP4G13v2受顺式元件调控。这两个基因的启动子不仅与CYP6D1启动子同源,而且还有与CYP6B1相似的启动子元件。Amenya等(2008)发现,不吉按蚊A.Funestus中的CYP6P9基因也受顺时元件的调控发生过量表达从而产生对拟除虫菊酯的抗性。3.2 受反式作用因子调控的昆虫P450基因一些研究表明,家蝇的CYP6A1(Feyereisenetal.,1995),果蝇的Cyp6a2(Maitraetal.,2000),Cyp6a9(Maitraetal.,1996),Cyp6a8(Maitraetal.,2002)基因的过量表达受反式因子的调控。反式因子突变可能发生在调节基因的启动子区、基因编码区,或通过突变影响反式作用因子的转录后修饰。

CYP6A1作为从抗性品系家蝇中分离的第一个P450基因(Feyereisenetal.,1989),在抗性品系中mRNA的表达量至少高出敏感品系10倍(Carinoetal.,

1994)。Feyereisen等(1995)研究发现,CYP6A1过量表达受反式作用因子调控。Maitra等(2000)通过基因杂交和染色体置换研究了位于果蝇Ò号染色体上的Cyp6a2和Cyp6a8的过量表达机制,发现敏感品系中两基因的表达均受到位于Ó号染色体上的反式作用因子的抑制,而抗性品系的反式作用因子发生基因突变失去抑制功能从而产生过量表达。Maitra等(2002)将Cyp6a8启动子上游序列与荧光素报告基因融合,用以检测Cyp6a8启动子活性。结果表明抗性品系91-RCyp6a8的-11/-761区域能够与有活性的反式作用因子结合,再

用因子突变引起。

3.3 受顺式元件和反式因子共同调控的P450

基因

CYP6D1是从家蝇中分离的与拟除虫菊酯抗性有关的一个P450基因(LiuandScot,t1996)。Liu和Scott(1996,1997)的研究结果表明,抗性品系CYP6D1的过量表达同时受位于Ñ号染色体上的顺式作用元件和位于Ò号染色体上的反式因子的调控。

CYP6D1基因的反式作用因子为锌指蛋白(mdGf-i1),它是CYP6D1基因表达的阻遏物。Scott等(1999)的研究发现家蝇拟除虫菊酯抗性品系LRP品系CYP6D1基因5c端旁侧序列转录起始区附近位于-15~-29位核苷酸处的一个15bp的片段的突变可能导致该品系中CYP6D1的过量表达。Gao和Scott(2006)利用凝胶迁移技术证实了在家蝇抗性品系中位于CYP6D1v1启动子上的mdGf-i1结合位点被一个15bp

的插入物破坏,导致抗性品系家蝇mdGf-i1结合效率大大降低,从而解除了mdGf-i1对CYP6D1的抑制。这一突变引发CYP6D1基因过量表达并产生抗性。CYP6D3是位于家蝇Ñ号染色体上与CYP6D1相距20kb的抗性相关基因,两者的核苷酸序列相似度为77%,CYP6D3和CYP6D1在抗性家蝇中的表达量均为敏感品系的10倍以上(KasaiandScot,t2001)。Kasai和Scott(2001)推测CYP6D3和CYP6D1的过量表达可能存在相似的调控方式,而比对各个品系CYP6D3的5c端旁侧序列并未发现有插入片段存在,因此CYP6D3的调控方式仍然需要进一步研究。

P450基因表达的调控涉及到许多步骤,mRNA转录后的稳定性以及翻译后的调控也可能起着重要的作用。

应用(Dabornetal.,2002;LeGoffetal.,2003;Pedraetal.,2004;Davidetal.,2005;Vontasetal.,2005;Strodeetal.,2006)。对P450基因超家族进化机制的研究将起到促进作用。对于P450的各个家族成员间的亲缘关系和进化机制的研究较少,应综合运用分子生物学和形态分类学的研究成果进行分析。对于昆虫P450基因的表达和调控机制的研究很多解释目前还处于推测阶段,关于P450基因的顺式、反式调控机制尚需要大量的证据来支持这些推测。鉴于昆虫P450在抗药性产生过程中的重要作用,研究昆虫P450的进化和表达调控机制对于昆虫抗药性的治理大有裨益。

参考文献(References)

AmenyaDA,NaguranR,LoTC,RansonH,SpillingsBL,WoodOR,

BrookeBD,CoetzeeM,KoekemoerLL,2008.OverexpressionofacytochromeP450(CYP6P9)(1):19-25.

BautistaMA,MiyataT,MiuraK,TanakaT,2008.RNAinterference-mediatedknockdownofacytochromeP450,CYP6BG1,permethrin.InsectBiochem.Mol.Biol.,39(1):38-46.BergeJB,

FeyereisenR,

AmichotM,

1998.

CytochromeP450

Philos.

monooxygenasesandinsecticideresistanceininsects.:1701-1705Trans.R.Soc.Lond.B,353.

BrattstenLB,HolyokeCWJr,LeeperJR,RaffaKF,1986.Insecticide

resistance:BrownRP,

Challengetopestmanagementandbasicresearch.

SchulerMA,

2004.Transcriptionofa

fromthe

diamondbackmoth,Plutellaxylostella,reduceslarvalresistanceto

inamajorAfricanmalariavector,

AnophelesFunestus,resistanttopyrethroids.InsectMol.Biol.,17

Science,231:1255-1260.

BerenbaumMR,

lepidopterancytochromeP450promoterismodulatedbymultipleelementsinits5cUTRandrepressedby20-hydroxyecdysone.InsectMol.Biol.,13(4):337-347.

CarinoFA,KoenerJF,PlaPPFWJr,FeyereisenR,1994.Constitutive

overexpressionofthecytochromeP450geneCYP6A1inahouseflystrainwithmetabolicresistancetoinsecticides.Mol.Biol.,24(4):411-418.

DabornPJ,LumbC,BoeyA,WongW,BlasettiA,

RH,BatterhamP,

2007.

ffrench-Constant

Evaluatingtheinsecticideresistance

InsectBiochem.

4 小结与展望

细胞色素P450是一个基因超家族,具有丰富的生物多样性。目前对于昆虫P450的研究成果集中在双翅目和鳞翅目昆虫,以及CYP4和CYP6等一些与抗性相关的基因家族。未来将有更多的昆虫

基因组测序成功,将极大地扩充P450的家族成员。随着分子生物学的发展,将会有越来越多的P450基因被发现。微阵列分析技术等分子生物学高新技术被越来越多的应用于昆虫抗性基因的筛选及表达差异等的研究。DNA微阵列分析技术在研究果蝇potentialofeightDrosophilamelanogastercytochromeP450genesbytransgenicover-expression.InsectBiochem.Mol.Biol.,37:512-519.

DabornPJ,YenJL,BogwitzMR,LeGoffG,FeilE,JeffersS,TijetN,

PerryT,HeckelD,

BatterhamP,

FeyereisenR,WilsonTG,

ffrench-ConstantRH,2002.AsingleP450alleleassociatedwith:2253-2256insecticideresistanceinDrosophila.Science,297.DavidJP,StrodeC,VontasJ,NikouD,VaughanA,PignatelliPM,

LouisC,HemingwayJ,RansonH,2005.TheAnophelesgambiae:lymistudylicdifi

A,102:4080-4084.DegtyarenkoKN,ArchakovAI,

Lett.,332:1-8.FeyereisenR,1999.

507-533.

:GilbertLIFeyereisenR,2005.InsectcytochromeP450.In,LatrouK,

GillSSeds.

ComprehensiveMolecularInsectScience.Elsevier,

Oxford.1-77.

FeyereisenR,AndersenJF,CarinoFA,CohenMB,KoenerJF,1995.

CytochromeP450inthehousefly:Structure,catalyticactivityandregulationofexpressionofCYP6A1inaninsecticide-resistantstrain.:233-239.Pestic.Sci.,43

FeyereisenR,KoenerJF,FarnsworthDE,NebertDW,1989.Isolation

andsequenceofcDNAencodingacytochromeP450fromaninsecticide-resistantstrainofthehousefly,A,86(5):1465-1469.

GaoJ,ScottJG,2006.RoleofthetranscriptionalrepressormdGf-i1in

CYP6D1v1-mediatedinsecticideresistanceinthehousefly,Muscadomestica.InsectBiochem.Mol.Biol.,36:387-395.GreenMT,

DawsonJH,

GrayHB,

2004.

Oxoiron(IV)

in

chloroperoxidasecompoundIIisbasic::1653-1656chemistry.Science,304.

HardstoneMC,LeichterC,HarringtonLC,KasaiS,TomitaT,Scott

JG,2007.

CytochromeP450monooxygenase-mediatedpermethrin

resistanceconferslimitedandlarvalspecificcross-resistanceinsouthernhousemosquito,Culexpipiensquinquefasciatus.Pestic.:175-184Biochem.Physiol.,89.HemingwayJ,

HawkesNJ,McCarrollL,

RansonH,

2004.

TheInsect

molecularbasisofinsecticideresistanceinmosquitoes.Biochem.Mol.Biol.,34(7):653-665.

HoshiT,LahiriS,2004.Oxygensensing:Itcsagas!Science,306:

2050-2051.

HungCF,HolzmacherR,ConnollyE,BerenbaumMR,SchulerMA,

1996.

ConservedpromoterelementsintheCYP6Bgenefamily

suggestcommonancestryforcytochromeP450monooxygenasesmediatingfuranocoumarindetoxification.Proc.Natl.Acad.Sci.:A,93

KarunkerI,BentingJ,LuekeB,PongeT,NauenR,RoditakisE,

VontasJ,GormanK,DenholmI,MorinS,2008.Over-expressionofcytochromeP450CYP6CM1isassociatedwithhighresistancetomidaclopridintheBandQbiotypesofBemisiatabaci(Hemiptera:i

:634-644Aleyrodidae).InsectBiochem.Mol.Biol.,38KasaiS,ScottJG,2001.ExpressionandregulationofCYP6D3inthe

housefly,Muscadomestica(L.).InsectBiochem.Mol.Biol.,32:1-8.

LeGoffG,BoundyS,DabornPJ,YenJL,SoferL,LindR,Sabourault

C,

Mad-iRavazziL,

ffrench-ConstantRH,

2003.

Microarray

analysisofcytochromeP450mediatedinsecticideresistanceinieM..,(:.

InsectP450enzymes.Annu.Rev.Entomol.,44:

1993.MolecularevolutionofP450

superfamilyandP450-containingmonooxygenasesystems.FEBS

LeGoffG,HilliouF,SiegfriedBD,BoundyS,WajnbergE,SoferL,

AudantP,

ffrench-ConstantRH,FeyereisenR,2006.Xenobiotic

responseinDrosophilamelanogaster:SexdependenceofP450andGSTgeneinduction.InsectBiochem.Mol.Biol.,36:674-682.LiuN,ScottJG,1996.Geneticanalysisoffactorscontrollinghigh-level

expressionofcytochromeP450,CYP6D1,

cytochromeb5,

P450

reductase,andmonooxygenasesactivitiesinLPRhouseflies,Muscadomestica.Biochem.Genet.,34(3-4):133-148.

LiuN,ScottJG,1997.PhenobarbitalinductionofCYP6D1isduetoa

transactingfactoronautosome2inhouseflies,Muscadomestica.InsectMol.Biol.,6(1):77-81.LiuN,

ScottJG,

1998.

IncreasedtranscriptionofCYP6D1causes

cytochromeP450mediatedinsecticideresistanceinhousefly.InsectBiochem.Mol.Biol.,28:531-535.

LiuN,ZhangL,2002.IdentificationoftwonewcytochromeP450genes

andtheir5c-flankingregionsfromthehousefly,Muscadomestica.:755-764InsectBiochem.Mol.Biol.,32.

LiuNN,ZhuF,XuQ,PridgeonJW,GaoXW,2006.Behavioral

change,physiologicalmodification,(4):671-679.

MaitraS,DombrowskiSM,BasuM,RaustolO,WatersLC,GangulyR,

2000.FactorsonthethirdchromosomeaffectthelevelofCyp6a2:147andCyp6a8expressioninDrosophilamelanogaster.Gene,248-156.

MaitraS,DombrowskiSM,WaterLC,GangulyR,1996.Threesecond

chromosome-linked

clustered

Cyp6

genes

show

differential:180

constitutiveandbarbita-linducedexpressioninDDT-resistantandsusceptiblestrainsofDrosophilamelanogaster.Gene,-171.MaitraS,

PriceC,

GangulyR,

2002.

Cyp6a8

ofDrosophila

melanogaster:Genestructure,andsequenceandfunctionalanalysis:859-870oftheupstreamDNA.InsectBiochem.Mol.Biol.,32.McdonnellCM,

Conserved

BrownRP,regulatory

BerenbaumMR,elements

in

the

SchulerMA,promotersgenes

2004.of

two165

:andmetabolicdetoxification

Mechanismsofinsecticideresistance.ActaEntomologicaSinica,49

mplicationsforP450I

allelochemica-linduciblecytochromeP4501139.

NebertDW,AdesnikM,

PhillipsIR,-11.NebertDW,

NelsonDR,

AdesnikM,

SatoR,

CoonMJ,

differentially

regulatetranscription.InsectBiochem.Mol.Biol.,34:1129-EstabrookRW,GonzalezFJ,

1987.

TheP450gene

:6

1

GuengerichFP,GunsalusIC,JohnsonEF,KemperB,LevinW,

WatermanMR,

superfamily:Recommendednomenclature.DNACellBiol.,

CoonMJ,

EstabrookRW,

GonzalezFJ,GuengerichFP,GunsalusIC,superfamily:

JohnsonEF,Kemper

B,LevinW,PhillipsIR,SatoR,WatermanMR,1989.TheP450

Updatedlistingofallgenesandrecommended

nomenclatureforthechromosomalloc.iDNACellBiol.,8(1):1-13.

NebertDW,NelsonDR,CoonMJ,EstabrookRW,FeyereisenR,Fuji-i

Y,,,usI

3期郭亭亭等:昆虫细胞色素P450基因的多样性、进化及表达调控

EF,LoperJC,SatoR,WatermanMR,WaxmanDJ,1991.The:UpdateonnewsequencesP450superfamily,genemapping,andrecommendednomenclature.DNACellBiol.,10(1):1-14.

ToxicologyandMolecularBiology.India.117-124.

ResearchSignpost,

311

Kerala,

ScottJG,LiuN,WenZ,SmithFF,KasaiS,HorakCE,1999.House

:flycytochromeP450CYP6D1

5cflanking

sequencesand

NelsonDR,p.

Biochem.Physiol.,121(PtC):15-22.

NelsonDR,KamatakiT,WaxmanDJ,GuengerichFP,EstabrookRW,

FeyereisenR,GonzalezFJ,newsequence,

CoonMJ,GunsalusIC,GotohO,accessionnumbers,

earlytrivial

OkudaK,NebertDW,1993.TheP450superfamily:Updateon

genemapping,

namesofenzymesandnomenclature.DNACellBiol.,12(1):1-51.NelsonDR,

KoymansL,KamatakiT,

StegemanJJ,FeyereisenR,

WaxmanDJ,WatermanMR,GotohO,CoonMJ,EstabrookRW,GunsalusIC,NebertDW,1996.P450superfamily:Updateonnewsequences,genemapping,:1-42Pharmacogenetics,6.

NelsonDR,StrobelHW,1987.EvolutionofcytochromeP450proteins.

Mol.Biol.Evol.,4(6):572-593.

OnoH,OzakiK,YoshikawaH,2005.IdentificationofcytochromeP450

andglutathione-S-transferasegenespreferentiallyexpressedinchemosensoryorgansoftheswallowtailbutterfly,PapilioxuthusL.InsectBiochem.Mol.Biol.,35:837-846.

PedraJH,McIntyreLM,ScharfME,PittendrighBR,2004.Genome-wide

transcription

profile

of

field-and

laboratory-selected

dichlorodiphenyltrichloroethane(DDT)-resistantDrosophila.Proc.:A,101.PetersenRA,

NiamsuPH,

BerenbaumMR,

SchulerMA,

2003.

TranscriptionalresponseelementsinthepromoterofCYP6B1,aninsectP450generegulatedbyplantchemicals.BiophysicaActa,1619:269-282.PrapaipongH,

BerenbaumMR,

ShulerMA,

1994.

Transcriptional

regulationofthePapiliopolyxenesCYP6B1gene.NucleicAcidsRes.,22(15):3210-3217.QiuXH,LengXF,

1999.ExpressionregulationofcytochromeP450

genesandthemolecularbasisofP450monooxygenase-mediatedinsecticideresistanceininsect.ChineseJournalofPesticideScience,1(1):7-14.[邱星辉,冷欣夫,1999.昆虫细胞色素P450基因的表达与调控及P450介导抗性的分子机制.农药学学报,1(1):7-14]

RewitzKF,O.ConnorMB,GilbertLI,2007.Molecularevolutionofthe

:insectHalloweenfamilyofcytochromeP450s37:741-753.

SagmiI,ShimizuT,1998.ThecrucialrolesofAsp-314andThr-315in

thecatalyticactivationofmolecularoxygenbyneuronalnitric-oxidesynthase.J.Biol.Chem.,273(4):2105-2108.

:CytochromesScottJG,1999.Molecularbasisofinsecticideresistance

:757-777P450.InsectBiochem.Mol.Biol.,29.Scott

JG,

2008.

Insect

cytochrome

:P450s

Thinking

beyond

:LiuNeddetoxification.In.RecentAdvancesinInsectPhysiology,

Phylogeny,

gene

Biochimicaet

accessionnumbersandnomenclature.

comparisonofalleles.Gene,226(2):347-353.:ScottJG,WenZ,2001.CytochromesP450ofinsects

iceberg.PestManag.Sci.,57:958-967.

StrodeC,SteenK,OrtelliF,RansonH,2006.Differentialexpression

ofthedetoxificationgenesinthedifferentlifestagesofthemalariavectorAnophelesgambiae.InsectMol.Biol.,15(4):523-530.StrodeC,WondjiCS,DavidJP,HawkesNJ,LumjuanN,NelsonDR,

DraneDR,KarunaratneSH,HemingwayJ,BlackWC4th,RansonH,2008.GenomicanalysisofdetoxificationgenesinthemosquitoAedesaegypti.InsectBiochem.Mol.Biol.,38(1):113-123.TangZH,WuSX,2000.HeredityandEvolutionofInsectResistanceto

Pesticides.ShanghaiScientificandTechnicalLiteraturePress,Shangha.i129-156.[唐振华,吴士雄,2000.昆虫抗药性的遗传与进化.上海:上海科学技术文献出版社.129-156]TomitaT,ScottJG,1995.

CYP6D1:

cDNAanddeducedproteinsequenceof

theputativegeneforcytochromeP450responsiblefor

thetipofthe

pyrethroidresistanceinhousefly.InsectBiochem.Mol.Biol.,25(2):275-283.VontasJ,

BlassC,KoutsosAC,DavidJP,KafatosFC,LouisC,

ChristophidesGK,

RansonH,

2005.

Gene

HemingwayJ,

expressionininsecticideresistantandsusceptibleAnophelesgambiaestrainsconstitutivelyorafterinsecticideexposure.InsectMol.Biol.,:509-52114.

WangXP,HobbsAA,1995.IsolationandsequenceanalysisofacDNA

cloneforapyrethroidinduciblecytochromeP450fromHelicoverpa:1001-1009armigera.InsectBiochem.Mol.Biol.,25.WellerGL,FosterGG,1993.GeneticmapsofthesheepblowflyLucilia

cuprina:Linkagegroupcorrelationswithotherdipterangenera.Genome,36(3):495-506.

WilloughbyL,ChungH,LumbC,RobinC,BatterhamP,DabornPJ,

2006.AcomparisonofDrosophilamelanogasterdetoxificationgeneinductionresponsesforsixinsecticides,caffeineandphenobarbita.lInsectBiochem.Mol.Biol.,36:934-942.

WojtasekH,LealWS,1999.Degradationofanalkaloidpheromonefrom

the

pale-brown

chafer,

Phyllopertha

diversa

(Coleoptera:

Scarabaeidae),byaninsectolfactorycytochromeP450.FEBSLett.,:333-336458.

YuCH,GaoXW,ZhengBZ,2002.InductionofthecytochromeP450

by2-tridecanoneinHelicoverpaarmigera.ActaEntomologicaSinica,45(1):l-7.[于彩虹,高希武,郑炳宗,2002.2-十三烷酮对棉铃虫细胞色素P450的诱导作用.昆虫学报,45(1):1-7]ZhouY,2001.ZhouYaoKunchongTuji(AtlasofInsectsbyZhouYao).

HenanScienceandTechnologyPress,Zhengzhou.[周尧,2001.周尧昆虫图集.郑州:河南科学技术出版社]

(责任编辑:赵利辉)

organizationandfunctionalconservation.InsectBiochem.Mol.Biol.,

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/wjx4.html