液质使用操作规程

液质联用仪操作规程

CG-YF1358-2010

1操作前检查

1.1 检查氮气和氩气的出口压力，压力分别为0.5~0.6MPa和0.1~0.2MPa

1.2检查洗针溶液和流动相

1.3 流动相须现配并超声，缓冲盐溶液过0.22μm微孔滤膜（或者使用色谱纯的盐溶液和酸溶液）

1.4 如使用溶融石英进样管，操作前应检查石英管是否拉长，确保其未超出ESI探针尖端。

-61.5 检查系统真空度，电离真空计读数（分析仪区域）应小于5×10 Torr。

1.6 检查废液液位，及时清空废液。

2操作步骤及注意事项

2.1 开机

2.1.1 打开UPS电源

2.1.2 打开质谱电源，即打开质谱主电源开关（Main Power Switch）至On（/）位置；打开真空开关（Vacuum Switch）在Operational状态；用密封垫或者放电针堵上离子传输毛细管；真空开关开启约10小时后，打开电子开关Electronics Service Switch）在Operational状态；

2.1.3 打开计算机（此时液相和质谱内置的CPU会通过网线与电脑主机建立通讯联系，这个时间大约要1～2分钟）

2.2双击Quantum tune图标，进入质谱界面，点击Quantum Tune Master界面上图标，查看质谱状态，确认Fore Pump Pressure为1.0~1.5 mTorr，Ion Gauge Pressure小于-6 6eTorr。

2.3 打开自动进样管理器和液相泵的电源

2.4 化合物ESI/MS/MS质谱条件优化建立

2.4.1. 双击桌面图标，打开Quantum Tune Master 界面；

2.4.2. 在Tune Master 中界面上，选择菜单Workspace，选择Compound Optimization Workspace 按钮，显示Compound Optimization 工作界面；

2.4.3. 设置优化参数：

A. 选择Optimization Modes (优化模式)： MS Only按钮；

B. 在Optimization Mass 列表中，输入母离子质量数;

C. 在优化参数列表中，选择() 优化的参数(Spray Voltage，Sheath gas pressure， Aux gas pressure，Tube lens offset，Skimmer offset)；

D. 单击Start 按钮，开始优化；优化结束后, 选择Accept按钮；

E. 选择Optimization Modes (优化模式):MS+MS/MS按钮；

F. 在Optimization Mass 列表Num product 列中，输入子离子个数(1~8)；

G. 在优化参数列表中, 选择() 优化的参数(Collision energy)；

H. 单击Start 按钮， 开始优化； 优化结束后，选择Accept按钮；

I. 参数优化完成，保存质谱方法：选择Save tune as 按钮，选择保存位置，输入文件名称，

保存质谱方法(.TSQTune文件)；

J. 单击定义扫描模式Define scan 快捷图标，在扫描模式区单击鼠标右键, 选择Copy scan

event。

2.5 化合物LC/MS/MS方法建立

2.5.1. 双击桌面上LC Quan快捷图标,点击Creat a New Workbook，输入相应Study Name（研究课题的名称等）及Workbook name（实验的名称和日期），继续点击next，选择同一文件夹里已存在的workbook，即导入该项目的方法（首次编辑方法时不选择该项）。继续点击Next，进入LCquan主界面

2.5.2. 在LCquan主页上，点击Instrument Setup按钮， 建立LC/MS/MS方法；

2.5.2.1. 设置液相色谱部分参数：

A. Surveyor自动进样器参数设置：

1) 点击Instrument Setup窗口中的Surveyor AS图标；

2) 输入Wash Volume (如400 μl)，Flush Volume (如400 μl)；

Injection Volume：进样量，若定量环为25ｕL，Partial Loop部分进样一般设置为10ｕL（即小于定量环体积的1/2），（建议使用Partial Loop部分进样）；若需Full Loop满环进样，则设置为25ｕL

Needle Height from bottom：2.0mm

Syringe Speed（ｕL/s）：8.0

Flush Volume：如400ｕL

Flush/Wash Source：Bottle

Wash Volume：如400ｕL

Tray Temperature：10℃左右（视样品性质而定）

Column Oven Control：35℃左右（视样品性质而定）

B. Surveyor 液相泵的参数设置：

1) 点击Instrument Setup窗口中Surveyor pump图标；

2) 输入A，B，C，D流动相名称，Column Description(色谱柱标注)；

3) 设置流动相条件(流动相比例，流速等)；

点击Pump General，输入A、B、C、D各相代表流动泵中的流动相溶液的名称，最大柱压设定为400.0Bar；点击Gradient Program，设定流动相梯度，可以使用等度洗脱或梯度洗脱。

2.5.2.2. 设置质谱部分(TSQ Quantum)参数:

点击Instrument Setup窗口中的TSQ Quantum图标;

1) 图中第一栏Run setting是设定样品的运行时间（MS Acquire Time）是否使用分段扫描（Segments）等

MS Acquire Time：样品的运行时间

Segments：若被测化合物较多时，可设置此项

Scan Events：设定扫描事件

Tune Method：即在Quantum Tune软件下优化的目标化合物的质谱条件

Scan Events 1：对于定量分析来说我们经常使用的是SRM（选择反应监测），需要设定母离子和子离子，扫描时间和各子离子的碰撞能量。

2) Same value for all SRMs

Scan Witdth（m/z）：0.002~5

Scan time：0.5左右（具体值是扫描点数而定）

Peak Width Q1（FWHM）：0.4或0.7（一般设定为0.7）

Polarity：正负电离模式

Data type：Centroid或profile，样品分析时一般设置为Centroid

Skimmer Offset：视化合物情况决定是否需要设定

3) 这些设置的值在进行化合物的质谱条件优化时，可以拷贝到此界面下，即单击Paste scan event按钮.

2.5.2.3点击质谱界面上的液相色谱控制按键AS/LC/GC Direct Control， 进入液相控制界面，观察各管路中是否有气泡，若有气泡，打开purge阀， Accela Pump界面上的flow设定为1000ｕL/min，将需要排气泡的管路流动相比例设置为100%，点击Apply，完成后，关闭purge阀，将与purge阀连接的注射器中的液体排出。

2.5.2.4 观察自动进样管理器挂壁上的注射器内是否有气泡，若有气泡，则点击下拉菜单中的flush syringe，设定flush 的体积为合适的值，如6000ul，流速为100ｕL/min，点击Apply，完成后，若还有气泡则重复一次，直到没有气泡为止。

2.5.2.5 设定进样方法所用流动相的起始比例及对应流速，平衡色谱柱至泵压稳定。

2.6 样品序列建立及样品分析

2.6.1点击菜单栏Acquisition中的Set up

A. 选择样品类型Sample Type: Unknown, QC, Blank,

B. 输入文件名称File Name：可以手动输入，也可点击鼠标右键浏览，选择已经存在的文件的文件名;

C. Sample Name：样品名称，一般设定为样品编号

D. Level：用于定量计算时设置的不同浓度点的代号

F. Vial Pos：设定样品瓶在进样器中的位置Position: A:1-A:40, B:1-B:40,C:1-C:40, D:1-D:40. E:1-E:40;

G. Inj Vol：From AS

2.6.2 样品分析

A.运行单个样品，在Sequence列表中鼠标点击选择需要运行的样品，单击按钮，设定样品运行结束后仪器状态After Sequence Set System (On，仪器仍在扫描状态，Standby，仪器处在待机状态，Off，仪器关机)，单击OK，开始进样分析；

B.运行多个样品: 单击按钮，在Run Rows空格中输入要运行的样品范围(在序列表中的行标, 如1-6)，设定样品运行结束后仪器状态After Sequence Set System (On，仪器仍在扫描状态，Standby，仪器处在待机状态，Off，仪器关机)，单击OK，开始进样分析。

C.通常需要将界面切换到在线监测界面，即点击Status完成界面切换

2.7 定量数据处理方法建立

2.7.1.点击LC Quan界面下的

2.7.2 设置定量方法

A 定义定量方法(内标法，外标法)： 单击Option菜单， 单击Calibration by, 选择定量方法(内标法, Internal Standard, 或者外标法External Standard), 点击OK;

B. 打开一演示数据文件：左下角图谱中右键鼠标，open rawfiles，打开一原始数据文件(在要作定量处理的数据中选择一个,最好是打开一个标样的数据文件)；

2.7.3. 设置定量方法(内标法)参数: ，点击方法编辑图标，出现Identification界面；

A. 定量组分的识别Identification参数：设定定量组分的名称Name (点击界面右上角组分(Components)，直接输入该组分名称)，扫描方法Filter (下拉菜单中选择该组分对应的扫描方法)，点击OK，输入保留时间Retention time，点击OK (如果是多组分定量,点击component栏内菜单, 选择add, 输入第二个组分名称,其他参数设定相同)；

B. 内标物的识别Identification参数：在component栏内菜单，选择add，直接输入内标物名称, 扫描方法Filter (下拉菜单中选择内标物对应的扫描方法), 点击OK, 输入内标物保留时间Retention time, 点击OK；

C. 内标物积分参数设定Peak Detection Algorithm：积分方法，选择ICIS或者Genesis，输入内标物各积分参数, 点击OK；

D. 定量组分积分参数设定Peak Detection Algorithm：积分方法，选择ICIS或者Genesis，输入该组分各积分参数, 点击OK；

E. 校正曲线Calibration 参数设定：单击Calibration 缺省菜单；

F. 点击界面右上角组分(Components) 列表栏内内标物的名称，定义其为内标物：在组分类型Component type 栏内选择ISTD，点击OK；

G. 点击界面右上角组分(Components) 列表栏内定量组分的名称，在Target compounds 栏内, ISTD的下拉菜单中选中内标物, 点击OK；

H. 标准溶液浓度Levels 设定: 单击Level 缺省菜单，在左侧浓度列表内，Cal Level列内从上到下依次输入每个浓度的代号(如1, 2, 3 ···, 或cal-1, cal-2, cal-3 ···,或者A, B, C ···等)，Amount 列内从上到下依次输入各标准溶液浓度值，单击OK，定量方法(内标法)建立完成；

I. 保存方法

2.7.4.设置定量方法(外标法)参数：

A. 定量组分的识别Identification 参数：设定定量组分的名称Name (点击界面右上角组分(Components)，直接输入该组分名称)，扫描方法Filter (下拉菜单中选择该组分对应的扫描方法)，点击OK，输入保留时间Retention time，点击OK；(如果是多组分定量,点击界面右上角组分(Components)，选择add，输入第二个组分名称，其他参数设定相同)；

B. 定量组分积分参数设定Detection：点击界面右上角组分(Components) 列表栏内定量组分的名称，输入该组分各积分参数，点击OK；

C. 校正曲线Calibration参数设定：单击Calibration 缺省菜单，设定各参数。

2.7.5. LC/MS/MS方法保存，保存后，以后每次进行同一研究课题的样品分析时可以在此基础上调用和修改

2.8 定量数据处理及定量结果浏览

2.8.1 点击定量列表设置图标，点击next，选择Create new sequence，从项目文件夹下的Raw files中，把Standards文件导入右侧Standards一栏中，把样品文件导入右侧Unknowns一栏中。

点击Edit，出现需做定量计算的样品序列表。

2.8.2点击Survey图标

2.8.3点击Review All图标

2.8.4 点击Report 图标

用。 ，查看Standards和QCs计算结果 查看全部样品计算结果 ，选择相应的报告模板，生成定量结果文件，保存并供打印使

2.9 结束分析

2.9.1 分析完成后，运行洗柱和保护柱的程序，洗柱完成后，将流速设置为0

2.9.2 关机操作步骤：将质谱设置为待机Standby状态；

A 关闭电子开关(Electronics Switch)；

B 关闭真空开关(Vacuum Switch)；

C 两分钟后关闭质谱主电源开关(Main Power Switch)至Off (O) 位置。

2.9.3 关闭液相部分开关。

2.9.4 关计算机。

2.9.5 关闭UPS开关。

2.9.6 冲洗样品传输管，样品管，API探针。

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