caspase-glo3 7assay
更新时间:2024-01-18 00:01:01 阅读量: 教育文库 文档下载
1. 说明
2. G8090成分
1x2.5ml caspase 3/7 buffer,1瓶caspase 3/7底物(冻干);置于-20度,避光。4度3个月,常温4天。
96孔板 25次 100ul/孔 384孔板 100次 25 ul/孔 3. 试剂的准备和储存
a caspase 3/7 buffer和caspase 3/7底物用前置于室温;
b 将caspase 3/7 buffer加入caspase 3/7底物瓶,混匀,使得caspase 3/7底物溶解,成为caspase glo-3/7试剂。
c caspase glo-3/7试剂4度可放置3天;4度放置1周可达到90%信号;4度放置4周可达到75%信号;caspase glo-3/7试剂-20度放置1周可达到75%信号;-20度放置4周可达到60%信号。
4. 检测细胞内caspase glo-3/7活性
本实验caspase glo-3/7试剂和样品1:1混合。(96孔板100ul caspase glo-3/7试剂+100ul样品;384孔板 25ul caspase glo-3/7试剂+100ul样品。)
需要准备的仪器 a 光度计
b 96孔板振荡器 c 加样器 d 96孔板 4 A检测条件
空白对照:caspase glo-3/7试剂+细胞培养液
阴性对照:caspase glo-3/7试剂+培养细胞的细胞培养液 实验孔:caspase glo-3/7试剂+处理后细胞的细胞培养液
注意:a 96孔板中加入<20000细胞/孔; b 阴性对照和试验孔细胞数要一致; c 最高发光信号可能在1-2h达到,所以要在3h之内检测。
4 B 96孔板中培养的细胞caspase glo-3/7活性检测的标准方案
a 检测前,把caspase 3/7 buffer和caspase 3/7底物置于室温,混匀; b 拿出96孔板,室温放置片刻;
c 把caspase glo-3/7试剂100ul加入96孔板中(空白孔,阴性对照孔,试验孔)。避免交叉污染。
d 轻柔的混匀,300-500rpm 30s,然后室温孵育30min-3h。(室温尽量避免变化) e 用发光仪检测。 6 注意事项
a 敏感性,一定要有空白对照,并且在3h之内检测; b 温度,光照和温度都会影响检测数据;
c 化学试剂,DMSO可用来溶解有机化学试剂;
d 混合,用细胞来检测时一定要混合以促进细胞裂解。
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