HPLC法测定黑米中花青素的主要成分及含量

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HP LC 法测定黑米中花青素的主要成分及含量

薛晓丽 (吉林农业科技学院实验管理中心,吉林吉林132101)

摘要 [目的]为准确鉴定黑米提取物中花青素的成分和含量提供一种有效的测定方法。[方法]用HP LC 法测定黑米提取物中花青素的主要成分及其含量。[结果]在黑米提取物的1%盐酸甲醇溶液的紫外-可见吸收光谱的紫外和可见光区各有一个较强的吸收峰,其波长分别为270和520n m 。黑米提取物的4个批次产品在131551m in 附近均有峰检出,它们的保留时间分别为131722、131633、131517和131518m in,其平均保留时间为131598m in,与矢车菊素232葡萄糖苷标准品的保留时间比较吻合。黑米提取物中矢车菊色素的平均含量为4118%。3个浓度的矢车菊素232葡萄糖苷的平均回收率为10415%。矢车菊素232葡萄糖苷的峰面积的RSD 为1156%(n =5)。[结论]黑米中花青素的主要成分是矢车菊素232葡萄糖苷,该测定方法准确可行。关键词 HP LC;黑米;花青素;矢车菊素中图分类号 O657.7  文献标识码 A   文章编号 0517-6611(2009)11-04854-02D eterm i na tion of the M a i n Com ponent and Its Conten t of Anthocyan idi n i n Bl ack R i ce by HPLC

XUE X i a o 2li  (Laboratorial Managing Center,J ilin Agricultural Science and Technol ogy,Jilin,J ilin 132101)

Abstract  [Objective ]The ai m was t o p r ovide an effective deter m ination method f or accurately identifying the component and its content of anthocyanidin in the extracts of black rice 1[Method ]The main component and its content of anthocyanidin in the extracts of black rice were deter m ined by HPLC method 1[Result]I n the UV and visible area of UV 2vis absorp tion spectrum of the 1%hydr ochl oric acid 2methanol solu 2tion of balck rice extracts,there were 2stronger abdorp ti on peaks and their wavelengths were 270and 520nm resp 1There were peaks detected fr om 4batches of p r oducts of balck rice extracts near 131551m in,their retenti on ti m e were 131722,131633,131517and 131518m in and their average retention ti me was 131598m in,which was relatively consistent with the retention ti me of standard cyanidin 232glucoside 1The av 2erage content of cyanidin in the extracts of black rice was 4118%1The average recovery of cyanidin 232glucoside at 3concn 1was 10415%1The RSD of peak area of cyanidin 232glucoside was 1156%(n =5)1[Conclusi on ]The main component of anthocyanidin in black rice was cy 2anidin 232glucoside and this deter m inati on method was accurate and feasible 1Key words  HPLC;B lack rice;Anthocyanidin;Cyanidin

作者简介 薛晓丽(1970-),女,吉林吉林人,硕士,实验师,从事药物

化学的教学和研究。

收稿日期 2009201220

花青素为黑米中的主要黄酮类物质(anthocyanidin ),这是一种广泛存在于自然界植物中的水溶性天然色素,在自然状态下常与各种单糖形成糖苷,称为花色苷。花青素作为一种天然食用色素,安全、无毒、资源丰富,而且具有一定营养和药理作用,在食品、化妆品、医药、保健等方面有着巨大的应用潜力[1-2]

。大量研究表明,花青素具有抗氧化、抗突变、

预防心脑血管疾病、保护肝脏、抑制肿瘤细胞发生等多种生

理功能

[3]

。笔者采用高效液相色谱法对黑米中花青素的主

要成分进行了分析,为准确鉴定黑米提取物中花青素的成分和含量提供一种有效的检测方法。

1 材料与方法111 材料与设备

11111 材料与试剂。黑米(吉林地产,市售),矢车菊素232葡

萄糖苷标准品(Sig ma 公司);甲醇、乙腈(色谱纯Fisher Sci 2

entific )、盐酸、磷酸、无水乙醇(分析纯)。

11112 设备。LC 220AT 高效液相色谱仪(岛津);检测器SP D 220,VP 2ODS C 18柱(416mm ×15010mm ),UV 21700分光

光度计(岛津),电子天平,超纯水仪,真空泵,超声清洗器。

112 实验方法

11211 黑米提取物的制备。将115t 黑米倒入浸泡池中,用35%~45%乙醇浸泡4h,温度控制在30~40℃,将浸泡液进

行分离除杂后,用减压蒸馏的方法去除多余的乙醇,干燥成粉末。

11212 黑米提取物的紫外-可见光谱分析。用移液管吸取

花青素样品溶液012m l,移入10100m l 的容量瓶中,用1%盐

酸甲醇(V ∶V )稀释,用UV 21700进行紫外-可见吸收光谱分析。

11213 样品溶液。准确称取25100mg 的黑米提取物溶于25100m l 的1%盐酸甲醇溶液中,超声20m in,将溶液用0122

μm 滤膜过滤,取5μl 上样。

11214 标准曲线的绘制。将矢车菊素标准品1100mg 溶于1100m l 1%盐酸甲醇溶液中,配成1mg/m l 的标准储备液。

从标准储备液中吸取一定量,用1%盐酸甲醇稀释成2、10、

20、50、100μg/m l 标品待测液,用0122μm 滤膜过滤,取5μl 上样。以矢车菊色素浓度为纵坐标,峰面积为横坐标进行线性回归分析,绘制标准品的标准曲线:f (X )=11864960×

10-5

X -01329793,r =019999。

11215 样品中矢车菊素232葡萄糖苷含量的计算。

x (%)=

A ?C ?V

A s ?m ?1000

6?f

式中,x 为矢车菊色素含量;A 为样品中矢车菊色素峰面积;C

为标准溶液中矢车菊色素的浓度(μg/m l );V 为样品最终定容体积(m l );A s 为标准溶液中矢车菊色素峰面积;m 为试样质量(g );f 为稀释倍数。

11216 色谱条件。流动相:4%磷酸∶乙腈(818∶112,V ∶V ,用Na OH 调pH 值为210),0145μm 滤膜抽滤,等梯度洗脱,流

速018m l/m in;柱温30℃;检测波长520n m 。

2 结果与分析

211 光谱分析 花青苷类化合物分别在265~275和465~560n m 处有2个特征吸收蜂。将黑米提取物用1%盐酸甲

醇溶解,进行紫外-可见光吸收光谱扫描,可以发现在紫外和可见光区各有1个较强的吸收峰,其波长分别为270和

520n m,由此可推断黑米提取物中的色素为花青苷类物质。212 矢车菊素232葡萄糖苷标准品色谱图 由图1可知,矢

责任编辑 孙红忠 责任校对 卢瑶

安徽农业科学,Journal of Anhui Agri .Sci .2009,37(11):4854-4855

车菊色素保留时间为131551m in

。图1 矢车菊素232葡萄糖苷标品色谱图

F i g 11 HP LC chro ma togram of cyan i di n (Cy )232glucosi de

st andards

213 黑米提取物中矢车菊色素的色谱图 图2为在图1的

实验条件下测定黑米提取物4个批次产品得到的色谱图。从色谱图上可以看出,在131551m in 附近均有峰检出,4个批次的保留时间分别为131722、131633、131517、131518m in,平均保留时间为131598m in,与标品的保留时间比较吻合,可以断定此峰为矢车菊素。将图2中矢车菊色素的峰面积代入标准曲线,通过计算得出黑米提取物中矢车菊色素的平均含量为4118%。

214 回收率实验 分别精密吸取一定量的矢车菊素232葡萄

糖苷标准品溶液,加入到已知量的矢车菊素232葡萄糖苷浓度的样品中,按测定样品含量的方法操作、测试,测得3个浓度

的矢车菊素232葡萄糖苷的平均回收率为10415%。

215 精密度实验 取同一批次的花青素样品溶液,精密吸

取10μl,连续进样5次,测定矢车菊素232葡萄糖苷的峰面积,结果其峰面积的RSD =1156%(n =5)

图2 黑米4批次提取物中矢车菊色素色谱图

F i g 12 HP LC chro ma togram of cyan i di n pi g ment i n extracts fro m four batches of bl ack r i ce

3 结论采用HP LC 法测定黑米中花青素的主要成分,实验条件采用岛津VP 2ODS C 18柱,以磷酸(4%水溶液)∶乙腈(V ∶V =

818∶112,pH 值210)为流动相,流速为018m l/m in,柱温30

℃,检测波长520n m 。结果表明:黑米中花青素的主要成分是矢车菊素232葡萄糖苷,平均含量为4118%。

参考文献

[1]段玉清,谢笔钧.原花青素在化妆品领域的研究与开发现状[J ].香精

香料化妆品,2002(6):23-26.

[2]孙丽华,江月仙,王巧懿.天然抗氧化剂原花青素的保健功能及其应用

[J ].食品研究与开发,2004(2):109-112.[3]鲍永华,郭永臣,郭延君,等.原花青素对S M MC 27721肿瘤细胞凋亡及

其端粒酶活性的影响[J ].西北农林科技大学学报:自然科学版,2007(1):28-31.

(上接第4843页)

表明,采用2种模型预测的结果具有相当高的精确度[3]

参考文献

[1]吕效国.自回归预测模型的参数估计及其应用[J ].职业时空,2006,12

(21):30-31.

[2]吕效国,王占君,钱峰,等.自回归模型建立的必要条件及其应用[J ].

数学的实践与认识,2008,38(16):113-119.

[3]吕效国,王占君,孙建平,等.用主成分分析法进行卫生系统绩效考核

综合评价[J ].中国卫生统计,2008,25(4):448.

5

58437卷11期                徐建新等 灰色灾变理论在东方红灌区旱涝灾情预测中的应用

本文来源:https://www.bwwdw.com/article/w57l.html

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