安捷伦高效液相1100培训教材

Ａｇｉｌｅｎｔ　　１１００　ＬＣ

１

二

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　化学分析仪器部

现场培训教材

安捷伦科技有限公司

关机

１

　　Ｇ１３１６Ａ

　Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００ＬＣ

　　Ｇ１３１０Ａ　：（单元泵）

自动进样器ＶＷＤ检测器

　　Ｇ１３６２Ａ

　　Ｇ１３２１Ａ　　（ＦＬＤ检测器）

Ｇ１３１１Ａ（四元泵）

溶剂准备

二次蒸馏水

基本操作步骤：　（一）　　　　１

　　　２　　　　　３

４．６ｍｍ　ｉ．ｄ

ＡＣＮ

或Ｗｉｎｄｏｗｓ　２０００

双击Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　１　Ｏｎｌｉｎｅ

图标

　　　　　　　通讯

　４Ｔｏｏｌｂａｒ

ＶｉｅｗＭｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　Ｒｕｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ

Ｓｙｓｔｅｍ　ｄｉａｇｒａｍ

Ｓｈｏｗ　Ｔｏｐ

使其命令前有来调用所需的界面把流动相放入溶剂瓶中打开Ｐｕｒｇｅ阀单击Ｐｕｍｐ图标单击Ｓｅｔｕｐ　ｐｕｍｐ选项　　　８　５ｍｌ／ｍｉｎ　　　９出现参数设定菜单

选中Ｏｎ则系统开始Ｐｕｒｇｅ由溶剂瓶到泵入口

直到所有要用通道无气泡为止

单击Ｐｕｍｐ图标单击Ｐｕｍｐ　Ｃｏｎｔｒｏｌ选项单击Ｏｋ关泵　　　１１

出现参数设定菜单进入Ｐｕｍｐ编辑画面１．０ｍｌ／ｍｉｎ单击泵下面的瓶图标以二元泵为例

单击Ｏｋ

输入溶剂的实际体积和瓶体积

数据采集方法编

辑

开始编辑完整方法　　　从菜单中选择

　项ａｎａｌｙｓｉｓ　单击Ｏｋ

在

中加入方法的信息方法的用途等

单击Ｏｋ　进入下一画面

Ｄａｔａ

　　２

３

Ｆｌｏｗ

在

处输入７０．０，（Ａ＝１００－Ｂ）　，一行”Ｔｉｍｅｔａｂｌｅ”　，编辑梯度

Ｐｒｅｓｓｕｒｅ　Ｌｉｍｉｔｓ　Ｍａｘ

单击Ｏｋ进入下一画面

也可Ｉｎｓｅｒｔ

以保护柱子

　４

选择合适的进样方式，　“Ｓｔａｎｄａｒｄ　Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ只能输入进样体积可以输入进样体积和洗瓶位置ｓｅ　ｉｎｊｅｃｔｏｒ　ｐｒｏｇｒａｍ

点击Ｏｋ进入下一画面

如图所示

”－－－－

－－－－会在洗瓶中洗针Ｕ

５

在”Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ”下面的方框内输入所需温度，并选中它，点击”ｍｏｒｅ＞＞”

键，如图所示，选中”Ｓａｍｅ　ａｓ　ｌｅｆｔ”－－－使柱温箱的温度左右一致

点击ｏｋ进入下一画面

ＶＷＤ检测器参数设定：　　　　　　

　　　　　波长

＝３００ｎｍ

Ｉｎｓｅｒｔ输入随时间切换的波长

　７

　　　色谱条件：　　　

　　　　　　流动相：　７５％ＡＣＮ，２５％水

；　流量：　１ｍｌ／ｍｉｎ；　　　停止时间：　出峰完毕

　　　样品波长－－一般选择最大吸收处的波长

ＢＷＮｏｉｓｅ　

参比带宽ＢＷ—

至少要与样品信号的带宽相等Ｐｅａｋ

ｗｉｄｔｈＳｌｉｔ—狭缝窄宽时同时可以输入采集光谱方式范围

选中所用的灯　　　　点击Ｏｋ进入下一画面

ＲＩＤ检测器参数设定：

，设定为Ｏｆｆ，

若环境温度不稳定，则设定光学单元温度为高于环境温度５度，以防样品在池中沉淀Ｐｅａｋ　ｗｉｄｔｈ只有在高速分析下设为更短Ａｕｔｏｍａｔｉｃｒｅｃｙｃｌｉｎｇ　ａｆｔｅｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ

节省流动相可随时投入使用

如图所示：　“Ｏｐｔｉｃａｌ　Ｕｎｉｔ　Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ”－－－若环境温度控制在

　＊＊＊＊＊　

点击ＲＩＤ图标

设为Ｏｎ

必须将

设为ＯＮ

将其设为Ｏｎ　　点击Ｏｋ，进入下一ＦＬＤ画面

ＦＬＤ检测器参数设定：

　色谱条件　　　样品

５ｕｌ

　　柱温箱：　　３０　　　ＥＸ＝２４６ｎｍ，　ＥＭ＝３１７ｎｍ　，ＰＭＴ＝１０　　　　响应时间＝４ｓ．　　　　　停止时间

　　Ｐｅａｋ　ｗｉｄｔｈ大多数应用设为４ｓ　　多波长及光谱

　　Ｍｕｌｔｉ　Ｅｍ

发射　

步长ｓｔｅｐ

Ｈｅａｔｅｒ

１０

　Ｒｕｎ　ｔｉｍｅ　ｃｈｅｃｋｌｉｓｔ　Ｄａｔａ　ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ单击Ｏｋ单击菜单Ｓａｖｅ　ｍｅｔｈｏｄａｓ输入一方法名ｔｅｓｔ单击Ｏｋ

从菜单　“Ｖｉｅｗ”中选中”Ｏｎｌｉｎｅ　ｓｉｇｎａｌ”　，选中Ｗｉｎｄｏｗｓ　１，然后单击Ｃｈａｎｇｅ钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点击Ｏｋ．（如同时检测二个信号，则重复１２，选中Ｗｉｎｄｏｗｓ　２）

从

菜单中选择

ｉｎｆｏ在Ｐｒｅｆｉｘ　

如上图所示在中选择或

　Ｐｒｅｆｉｘ—

框中输入前缀

仪器会自动命名ｖｗｄ０００２……

´ÓInstrument ²Ëµ¥Ñ¡ÔñSystem onµÈÒÇÆ÷Ready

´ÓMethod²Ëµ¥ÖÐÑ¡Ôñ

２

从菜单中

Ｆｉｌｅ

Ｄａｔａ　ａｎａｌｙｓｉｓ

选中您的数据文件名

单击Ｏｋ

Ｌｏａｄ　ｓｉｇｎａｌ

３

Ｇｒａｐｈｉｃｓ”菜单中选择选项从Ｒａｎｇｅｓ中选择Ａｕｔｏ　ｓｃａｌｅ及合适的显示时间

反复进行

从

中选择　

”，如积分结果不理想，再从菜单中选择

选项

Ｐｅａｋ　ｗｉｄｔｈＨｅｉｇｈｔ　ｒｅｊｅｃｔ

从菜单中选择选项则修改相应的积分参数

图标

　５

从菜单中选择选项

（２）

Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ

Ｒｅｓｕｌｔｓ选中Ｐｅｒｃｅｎｔ

（３）

从

菜单中选择“Ａｕｔｏ

４

ｉｎｔｅｇｒａｔｅ　（３）　（４）

ｒｅｐｏｒｔ底部的关机：

则报告结果将打印到屏幕上

钮

则单击Ｒｅｐｏｒｔ

１００％的水冲洗系统２０分钟

反相色谱柱［正相色谱柱用适当的溶剂冲洗］

及其它窗口

如ＡＣＮ

用ｓｈｕｔ　ｄｏｗｎ关

然后关泵

用适于

（五）

１

存放时

色谱柱用相应的有机相 对于手动进样器毫升

流动相使用前必须过滤

溶剂不能干涸

其它主意事项见说明书

两端封死

要用水冲洗进样口

易长菌

要配制９０％水＋１０％异丙醇

正相每次数

　　＊４

维护知识

１

它会对色谱柱

消除由于

污染对分析结果的影响

由于填料颗粒很细溶剂和样品中的细小颗粒

会使色谱柱和毛细管容易堵塞

溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损

样品过滤头的类型

适用于大进样量的过滤

处理样品体积少于５０µｌ

适用于范围广的过滤３ｍｍ内径滤膜类型

适用于所有溶剂并无任何可溶物　不适用于有机溶剂推荐

　　　　　　　　　　用　　于　蛋白质和其相关样品

适用于绝大多数有机溶剂和水溶液

由０．２µｍ和０．４５µｍ两种规格

　　　　　　　　　　　７０％乙醇

具有蛋白吸收低

不适用于二甲基甲酰胺

２

ＨＰＬＣ用缓冲盐时，由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象，析出的细小盐粒非常坚硬，它附着在蓝宝石活塞杆上，随着蓝宝石活塞杆的往复运动，容易产生划痕，并磨损密封垫，造成漏液等故障现象

缓冲盐的浓度在０．１ｍｏｌ或

大于０．１ｍｏｌ时，必须使用该在线冲洗选项．清洗液配制：

９０％水＋１０％异丙醇．该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张力

不能干涸

为什么 Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００ＬＣ的流动相管路非常细？在使用ＨＰＬＣ时，应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响

液体流动相的流速也

比气相慢１－２个数量级样品进入色谱柱后进样器

连接管中都会引起色谱

峰的展宽

为使柱外效应减之最小Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００ＬＣ使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路

０．１７ｍｍ内径　－－－－－－绿色　；０．１２ｍｍ内径－－－－－－－红色内径　－－－－－０．１３ｍｍ；０．１８ｍｍ；０．２５ｍｍ；０．５ｍｍ

４

　　流动相使用前必须进行脱气处理

如Ｏ２以防止在洗脱过程中当流动相由色

谱柱流至检测器时气泡会增加基线的噪音

甚至无法分析

柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能可能会

造成荧光猝灭

常用的脱气方法比较

利用液体中氦气的溶解度比空气低效果

较好

加热回流法但操作复杂

抽真空脱气法

超声脱气法用超声波振荡１０－　　　　　　　　　　　　　１５ｍｉｎ

在线真空脱气法在线脱气无需额外操作脱气效果明显优于以上几种方法

５

以及堵塞后的处理

从而影响泵的运行

ＰＨ＝４—７以下几种方法可以有效防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞

请严格执行溶剂过滤

请勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液Ｃ可在溶剂中加入０．０００１－－－０．０的０１叠Ｍ氮化钠．Ｄ：在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹，以氩气隔绝空气避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下堵塞后的处理法方法

在浓硝酸中浸泡１ｈ６

Ａｇｉｌｅｎｔ

１１００ＬＣ泵给色谱柱提供稳定流量准确的流动相

Ａ过滤使用缓冲盐时Ｃ用

１００％的水冲洗系统２０分钟如甲醇谱柱［正相色谱柱用适当的溶剂冲洗］　　　　

Ｄ

压力高于１０ｂａｒ使用合适的密封圈

然后关泵适于反相色

如何选择合适的泵头活塞密封圈

但使用正相溶剂

特别是长时间使用时

我们建议使用聚四氟乙烯密封圈

ｐ／ｎ０９０５－１４２０　　２／ｐｋ

聚四氟乙烯密封圈的压力范围为建议在泵的压力限制中

８

当盐溶液与有机溶剂溶液混合时而不会出现沉淀重力作用使盐颗粒沉淀下来

阀Ａ接水相／盐溶液此法连接可有效使盐回落到盐溶液中若颠倒过来出现问题

当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时

有机溶剂通道直接接在Ａ通道的上方Ｄ通道上以除去阀口上可能出现的盐沉淀

在线真空脱气机使用要注意那些事项

Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００ＬＣ

的真空脱气机无需过多维护

Ａ

要用随仪器附带的注射器抽满脱气机腔体

要先抽空

Ｂ

１０

由于样品分子在液体流动相中的扩散系数

比在气体中４小￣５个数量级

因此在柱子以外的任死何体

积柱接头

器样品分子的扩散和滞留而使柱效降低

获得理想的分析结果

检测

在更换色谱柱时注意接头处理就可以了卡套接头或ＰＥＥＫ管线手拧街头

要注意柱子接头处的形状和长度下面是不同厂家柱子接头的形状和长度

客户只需

柱子出口为不锈钢

不锈钢卡套已固定死

１１

使用时要注意什么

当使用缓冲溶液后

同时搬动进样阀数次

以防止虹吸现象的发

注意事项

安装时六通阀的５生Ｂ

当样品量少时要小于１／２ｌｏｏｐ体积

但最大进样体积

进样体积由定量管的体积决定

需注射５—６倍的ＬＯＯＰ体积

要使用专用的液相注射器进样

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