小分子化合物H-131抑制胃癌细胞增殖及机制-论文

解趔学研究 2 0 1 4年第 3 6卷第 2期

A n a t R e s, 2 0 1 4 . V 0 1 . 3 6 . N o . 2

8 1

论著

小分子化合物 H一 1 3 1抑制胃癌细胞增殖及机制张健， 李瑞娟， 张红艳，刘 奇， 李丹妮 z, 李丰 (中国医科大学基础医学院细胞生物教研室//教育部医学细胞生物学重点实验室，辽宁沈阳 1 1 0 0 0 1 )【摘要】 目的方法

研究小分子化合物 H一 1 3 1对人胃癌细胞 S G C 7 9 0 1、 B G C 8 2 3、 M K N一 4 5增殖的抑制作用及其相关机制。

应用不同浓度的化合物 H一 1 3 1处理人胃癌细胞 S G C 7 9 0 1、 B G C 8 2 3和 M K N. 4 5,采用 MT r法检测该化合物对细胞增

殖的影响，流式细胞术检测其对细胞周期的影响， We s t e n r b l o t检测化合物对周期调控蛋白 C y c l i n D1和 C D K 4表达的影响。结果化合物 H. 1 3 1能够以剂量依赖的方式抑制人胃癌细胞 S G C 7 9 0 1、 B G C 8 2 3及 MK N一 4 5的增殖，并且能够抑制上化合物 H. 1 3 1能够通过下调胃癌细胞中 C y c l i n D1和 C D K 4的表达水平，抑制胃癌细胞 G 述细胞 G。期向 S期的转化。We s t e n r b l o t结果显示 H. 1 3 1能够以剂量依赖的方式下调胃癌细胞 S G C 7 9 0 1中 C y c l i n D1和 C D K 4的蛋白表达水平。结论期向 S期的转化，进而抑制胃癌细胞增殖。

【关键词】 胃癌； H一 1 3 1; 细胞株； 细胞周期蛋白 D 1; 细胞周期蛋白依赖激酶T h e e f e c t a n d me c h a n i s m o f H- 1 3 1 s u p p r e s s i n g t h e p r o l i f e r a i t o n o f g a s t r i c c a n c e r c e l l s Z H A NG J i a n, L I R u i - j u a n,

Z H AN G Ho n g - y a n,L I U Q i, L I D a n— n i,L I屁C o r r e s p o n d i n g a u t h o r: L I

T h e R e s e a r c h C e n t e r f o r C e l l B i o

l o g y, K e y L a b o r a t o r y o fMe d i c a l C e l l B i o l o y g

Mi n i s t y r o f P u b l i c E d u c t a i o n f o C h i n a,C h i n a Me d i c a l U n i v e r s i t y, S h e n y ug a 1 1 0 0 0 1,C h i n a,E— ma i l:l f i e n g t ) h d l 5@ g r a a i l . c o n

【 A b s t r a c t】

O b j e c i t v e T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t a n d m e c h a n i s m o f H一 1 3 1 o n t h e p r o l i f e r a t i o n o f h u m a n g a s t r i c c a n c e r

c e l l s . Me t h o d s MTY wa s u s e d t o o b s e r v e t h e e f e c t o f H- 1 31 o n t h e p r o l i f e r a t i o n o f S GC 7 9 01, B GC8 2 3 a n d MKN一 4 5 c e l l s .F l o w c y t o me t r y wa s u s e d t o c h e c k t h e e f e c t o f H一 1 3 1 o n c e l l c y c l e .W e s t e r n b l o t t i n g wa s a d o p t e d t o i d e n t i f y t h e e f f e c t o f H一 1 3 1 o n t h e e x p r e s s i o n o f C y c l i n D1 a n d C DK4 .Re s u l t s H. 1 3 1 c o u l d s u p p r e s s t h e p r o l i f e r a t i o n o f S GC 7 9 01 .BGC 8 2 3 a n d MKN一 4 5

c e l l s i n a d o s e— d e p e n d e n t ma n n e r .I t c o u l d a l s o o b v i o u s l y i n h i b i t t h e t r a n s i t i o n o f c e l l s f r o m G1 t o S p h a s e .T h e We s t e n r b l o t r e— s u

i t s s h o we d t h a t H一 1 3 1 s i g n i i f c a n t l y d o wn— r e g u l a t e d t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f C y c l i n D1 a n d CD K4 i n S GC 7 9 01 c e l l s . Co n c l u - s i o n H- 1 3 1 s u p p r e s s e s Cy c l i n D1 a n d CDK 4 e x p r e s s i o n,a n d i n h i b i t s t h e t r a n s i t i o n o f c e l l s f r o m GI p h a s e t o S p h a s e,a n d r e - s u hs t h e a n t i - p r o l i f e r a t i v e e f f e c t o n h u ma n g a s t r i c c a n c e r c e l l s .

【 K e y w o r s】 G d a s t r i c c a n c e r; H一 1 3 1; C e l l l i n e s; C y c l i n D 1; C y c l i n— d e p e n d e n t k i n a s e 4

胃癌是一种常见的恶性肿瘤 .其死亡率在世

c , H。 o N O 2 S (图1 ),相对分子质量仅为 2 8 6 . 3 1。本研究旨在通过实验检测化合物 H一 1 3 1对于人胃癌细胞 S G C 7 9 0 1、 B G C 8 2 3及 MK N一 4 5增殖及细胞周

界范围内高居第二，在我国则居于第一位…。近年来.胃癌的发病率呈逐年上升趋势。由于早期诊断困难 .多数患者就医时已处于癌症的中晚期[ 2 - 3]。 化疗成为进展期胃癌的主要治疗方法。因此，成功开发针对胃癌行之有效的治疗药物成为当前胃癌

期的影响，发掘其影响细胞增殖和细胞周期的具体作用机制，为胃癌的小分子药物研发提供一定的实验依据。

研究的重要课题。化合物 H . 1 3 1是我们课题组从 S P E C S数据库购进的小分子化合物。其分子式为

1材料与方法1 . 1材料与试剂

基金项目：国家自然科学基金 ( 8 1 2 3 0 0 7 7, 8 1 3 0 2 1 2 7 ) 1 .沈阳药科大学制药工程学院 .辽宁沈阳 1 1 0 0

1 6 2 .中国医科大学附属第一医院肿瘤内科，辽宁沈阳 1 1 0 0 0 1 通信作者：李丰 . E- m a i l: l i f e n g p h d 1 5@g m a i l . c o n r

化合物 H一 1 3 1购自S P E C S数据库，其分子结构式见图 1。将 H. 1 3 1用二甲基亚砜 ( d i me t h y l s u l f o x i d e。 D MS O)溶解后配制成 2 0 m m o l/ L的储存

液，使用前用培养基稀释成所需的药物终浓度；人

解剖学研究 2 0 1 4年第 3 6卷第 2期

A n a t R e s, 2 0 1 4, V o 1 . 3 6, N o . 2

胃癌细胞的增殖。 C y e l i n D 1和 C D K 4作为细胞周期起始点 G / S 期的正性调节因子，启动细胞分裂，在肿瘤的发生

c a n c e r i n As i a:r e s o u r c e - s t r a t i f i e d g u i d e l i n e s .L a n c e t On—

c o l, 2 0 1 3, 1 4 ( 1 2 ): e 5 3 5 - 5 4 7 .4 T h r u mu r t h y S G,Ch a u d r y MA,Ho c h h a u s e r D,e t a 1 .T h e

过程中具有重要意义[ 1 1 - 1 4]。实验中，我们检测到随着化合物 H一 1 3 1处理浓度的逐渐升高，胃癌细胞S G C 7 9 0 1中 C y c l i n D1和 C D K 4的表达水平逐渐

d i a g n o s i s a n d ma n a g e me n t o f g a s t ic r c a n c e r . BMJ,2 01 3,3 4 7: f 6 3 6 7 .

5 Mi s l e h J G, S a n t o r o P, S t r a s s e r J F, e t a 1 . Mu l t i d i s c i -p l i n a r y ma n a g e me n t o f g a s t r i c c a n c e r .S u r g On c o l C l i n N

降低。提示化合物 H一 1 3 1能够以剂量依赖的方式下调 C y e l i n D 1和 C D K 4的蛋白水平。由此可以推测 .化合物 H一 1 3 1是通过下调胃癌细胞中 C y c l i n D I和C D K 4的表达量，从而负向调控 G / s期监测点，阻滞细胞由 G,期进人 s期。

A m,2 0

1 3, 2 2 ( 2 ): 2 4 7 - 2 6 4 .

6 詹文华，韩方海 .我国胃癌外科治疗的现状和思考 .实用肿瘤杂志， 2 0 0 8, 2 3 ( 2 ): 9 1— 9 3 .7 Wa n P,Y a n M,Ya n C,e t a 1 . C l i n i c a l r e s e a r c h p r o g r e s— s i o n i n c h e mo r a d i a t i o n t h e r a p y f o r r e s e c t a b l e g a s t ic r c a n—

综上所述，本研究初步阐述了小分子化合物H一 1 3 1对体外培养的人胃癌细胞 S G C 7 9 0 1、 B G C 8 2 3及M K N . 4 5的增殖具有显著抑制作用。利用流式细胞术检测了对细胞周期的影响 . We s t e r n b l o t法检测了化合物 H . 1 3 1处理的胃癌细胞中周期调控蛋白 C y c l i n D 1和 C D K 4的表达。结果显示： H一 1 3 1处理后。 S G C 7 9 0 1、 B G C 8 2 3及 MK N. 4 5

c e r . Z h o n g h u a We i C h a n g Wa i K e Z a Z h i,2 0 1 2, 1 5 ( 2 ):1 9 3— 1 9 6 .

8 Ki m J G. Mo l e c u l a r t a r g e t e d t h e r a p y or f a d v a n c e d g a s t ic r

c a n c e r . K o r e a n J I n t e r n Me d, 2 0 1 3, 2 8 ( 2 ): 1 4 9 - 1 5 5 .9 B t i l k e E,P e i p e r M,Kn o e f e l WT,e t 1. a Mu h i mo d a l t h e r a— p y i n l o c a l l y a d v a n c e d g a s t i r c c a n c e r . Dt s c h Me d Wo c h e n—

s c h r, 2 0 1 1, 1 3 6 ( 4 3 ): 2 2 0 5 - 2 2 1 1 .

1 O张东东，扈清云，梁衍锋，等.白藜芦醇抑制胃癌B G C 8 2 3细胞增殖机制的研究 .解剖学研究，2 0 0 8, 3 0( 1 ): 1—3.

细胞 G。期比例逐渐增加，而s期细胞比例显著下降。同时，化合物 H 1 3 1能够以剂量依赖的方式下调胃癌细胞 S

G C 7 9 0 1中 C y e l i n D1和 C D K 4蛋白的表达水平。以上结果提示小分子化合物 H. 1 3 1 能够通过下调胃癌细胞中周期调控蛋白 C y e l i n D 1、 C D K 4的表达，抑制胃癌细胞 G 期向 S期的

1 1 L i u W .R e n H,Re n J,e t a 1 . T h e r o l e o f EG F R/ P I 3 K/Ak t/ c y c l i n D1 s i g n li a n g p a t h wa y i n a c q u i r e d mi d d l e e a r c h o l e s t e a t o ma . Me d i a t o r s I n l f a mm,2 0 1 3, 2 0 1 3:6 51 2 0 7 . 1 2 S e i l e r R,T h a l ma n n GN, Ro t z e r D,e t a 1 .CC ND1/ C y— c l i n D 1 s t a t u s i n me t a s t a s i z i n g b l a d d e r c a n c e r:a p r o g n o s— t i e a t o r a n d p r e d i c t o r o f c h e mo t h e r a p e u t i c r e s p o n s e . Mo d

转化，进而抑制胃癌细胞的增殖。本研究的结果为进一步开发有效的小分子胃癌治疗药物提供了一定的理论依据。 参1

P a t h o l, 2 0 1 3, 2 7 ( 1 ): 8 7 - 9 5 .1 3 S u n Y,L u o D,L i a o D J .C y c l i n D1 p r o t e i n p l a y s d i f e r e n t

考

文献

r o l e s i n mo d u l a t i n g c h e mo r e s p o n s e s i n MC F 7 a n d MDA—

MB 2 3 1 c e l l s . J C rc a i n o g,2 0 1 2, 1 1: 1 2 .T a n VP,W o n g BC.G a s t i r c c a n c e r c h e mo p r e v e n t i o n:t h e c u r r e n t e v i d e n c e .Ga s t r o e n t e r o l C l i n No r t h A m,2 0 1 3, 4 2

1 4 S h i r li a S, Ag h a e i M, S h a b a n i M,e

t a 1 .Ad e n o s i n e i n—d uc e s c e l l c y c l e a r r e s t a nd a po p t o s i s v i a c y c l i nD 1/Cd k4

( 2): 2 9 9—3 1 6.2

a n d B c l一 2/ B a x p a t h wa y s i n h u ma n o v a i r a n c a n c e r c e l l

Ya n g L . I n c i d e n c e a n d mo r t a l i t y o f g a s t i r c c a n c e r i n C h i—

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S h e n L,S h a n YS,Hu HM,e t a 1 . Ma n a g e me n t o f g a s t i r c

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