食品生物化学实验思考题
更新时间:2023-06-09 12:16:01 阅读量: 实用文档 文档下载
《蔗糖酶的提取及分级沉淀提取综合实验》部分思考计算
先预习综合性实验的P25~30以及P49~57;
一、熟练酶液蔗糖酶活力测定方法及计算
还原糖是分子中含有游离醛基或酮基的单糖或双糖,蔗糖经蔗糖酶酶解作用后,酶
解产物的还原糖含量可用3,5二硝基水杨酸比色法测定,与葡萄糖标准工作曲线比较定量计算。经公式换算可求出酶液中蔗糖酶活力。糖液中还原糖含量越高,说明蔗糖酶活力越大,可通过蔗糖酶活力的大小,评价酶的提取方法、酶纯化的结果等指标。 蔗糖蔗糖酶
葡萄糖果糖
酶液中蔗糖酶活力单位计算:
利用葡萄糖标准曲线,根据蔗糖被蔗糖酶酶解3分钟后反应液中还原糖的生成量来
计算。
设:已知葡萄糖标准工作曲线回归方程为:
y =1.56A+0.0051 (y:单位为mg;A:520nm吸光值)
已知:吸取酶解反应液0.2mL,比色法测得520nm波长吸光值A=0.670。
答案:13.13(U/mL)
若酶解反应液酶活力高,需稀释后才能检测,换算时注意稀释倍数的换算。
(2)若所提取酶液总体积为20mL,酶液总酶活力等于多少?
二、酶的分级沉淀提取
经酵母破壁提取的酶液除含有蔗糖酶外,还含有其他的杂蛋白,实验中蔗糖酶的分级沉淀提取是一除杂纯化过程。分级沉淀试剂可用乙醇或硫酸铵,加入酶液的沉淀剂浓度不同,不同种类的蛋白质在不同浓度的脱水剂体系中稳定性的不同,可达到除杂的目的。
加入适量的沉淀剂后,酶液经离心后均有沉淀物产生,沉淀物用缓冲液溶解后,测定溶解液的酶活力大小以及蛋白质含量,可评价沉淀物是以为主还是杂蛋白。若测定结果蛋白质含量高,但酶活力相对较小,说明此试剂浓度可除去部分杂蛋白未能有效提取蔗糖酶;继续提高试剂浓度,则可能达到有效提取蔗糖酶的目的。
学 答案:262.57(单位) 术部1求 :(1)酶液蔗糖酶活力(U/mL);(按51页计算公式计算) 整理
分级沉淀实验计算考题:
1、室温下取20mL酶液进行酶的分级沉淀提取实验,沉淀剂选用硫酸铵。若一次沉淀硫酸铵的饱和度浓度达40%,需向酶液添加固体硫酸铵多少克?离心分离后,上清酶夜的体积为23mL,若要使上清液硫酸铵的饱和度提高至70%进行二次沉淀提取,需补加固体硫酸铵多少克?(计算过程需利用57页附表2硫酸铵饱和度的常用表)
答案:4.84g; 4.71g。
2、用20mL酶液进行酶的分级沉淀提取实验,已知原酶液蔗糖酶总活力为200U。酶液经一次盐析沉淀离心分离后,沉淀物溶解液为7mL,测得酶活力5 U/mL,求:
(1)7mL酶液蔗糖酶总活力。
(2)一次沉淀酶的提取率?
答案:35/200=17%
(3)经二次盐析沉淀后,离心分离沉淀物溶解液为8.5mL,酶活力10 U/mL。求:
酶液蔗糖酶总活力;及二次沉淀后酶的提取率?
答案:85U; 酶提取率:85/200*100=42.5%
思考:哪次沉淀条件有利于蔗糖酶的提取。
三、酶液比活力计算
已知:(1) 50mL酶液,其蔗糖酶活力为10U/mL,蛋白质含量20mg/mL。计算酶液的总活
力及比活力。
答案:总活力=500U;比活力=0.5
(2) 50mL酶液,其蔗糖酶活力为8U/mL,蛋白质含量5mg/mL。计算酶液的总活力
及比活力。
答案:总活力=400U;比活力=1.6
根据计算结果评价两酶液的纯度。
2学术部整理 答案:35U(酶活单位);
四、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量计算注意问题:
测定时,若吸取样液是20微升,则V=0.02(mL)代人计算;若酶液中蛋白质含量高,需
稀释后再取样检测,则注意稀释倍数的换算。
注意:
一、实验检测方法:
1、酶活力的测定方法:预习辅助性实验一 蔗糖酶活力测定(49-51页)
2、蛋白质测定方法用:预习辅助性实验三 考马斯亮蓝染料比色法(54页) 正确熟练掌握两测定方法,是完成实验的基础。
二、实验分组:
因实验内容较多,以试验台为单位组成实验小组,选出组长,做好实验分工,如:葡萄糖标准曲线制备;酶液蔗糖酶活力测定;蛋白质含量测定;酶的分级沉淀(分级沉淀只选其中一种方法即可)等工作的完成均需统筹安排,每个同学积极参与,相互协作,共同完成。
三、预习:
每个同学需全面进行预习,熟悉实验内容,明确实验最终的目的,需记录哪些数据,填写哪些表格,熟悉实验检测方法,某一环节的错误有可能导致实验得不到数据。
教科书蛋白质、酶的章节内容也可进行预习。
有问题下周实验可以讨论解答。也可发邮件商榷。
学细读预习p25~30页的实验内容,以及辅助性实验内容。然后计算以上思考题, 术部3整理
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