植物生理实验希尔反应

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植物生理学实验

希尔反应的观察和反应速率的测定

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摘要：

本实验以新鲜的菠菜叶片为实验材料；以菠菜的离体叶绿体为实验对象,由离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂，根据2，6 -二氯酚靛酚在光下从蓝色到粉红色再到无色的变化，观察希尔反应。在本实验中观察到，加入叶绿体悬浮液的试管，在光下由蓝色变为绿色(由于叶绿体存在的原因）;暗处的试管仍为蓝色。

一、实验原理与实验目的

实验原理：

希尔发现,离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂（如2,6－二氯酚靛酚、高铁氰化钾、苯醌、ＮADP+、草酸等) ２H2O+2A→2AH２＋O２

希尔反应的测定的方法是(1）放氧速率；(2）氧化剂被还原的速率。本实验中２,6-氯酚靛酚还原后,溶液由兰色变为无色。

实验目的:

观察和测定希尔反应,了解叶绿体在光合放氧中的作用。

二、实验材料和方法

实验材料:菠菜

实验器材:离心机、分光光度计、天平、研钵、漏斗、容量瓶、量筒、烧杯、纱布、移液管、

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台灯等

实验试剂：（１）提取液（0.067Ｍ磷酸缓冲液,pH 6.5 + 0．3M 蔗糖+ 0.01M ＫCl)；(2) 0．1％2,6-二氯酚靛酚（溶于0.067M 磷酸缓冲液+０.01%KCl）

三、实验步骤

１.离体叶绿体悬浮液的制备

称取８克叶片，加10ｍｌ预冷提取液研磨，在研钵中捣碎30秒钟后,继续加入15mｌ冷提取液;

经过二层纱布过滤，去残渣,挤出滤液,置于离心管中。

以100０转/分离心3分钟;弃去沉淀。

以3００0转／分离心上层液,8分钟,弃去上清液，沉淀为破碎的叶绿体。

用20ml提取液悬浮沉淀，置于冰浴备用。

2．离体叶绿体对２,6 -二氯酚靛酚的还原作用

取2支试管,分别加入5ｍl叶绿体悬浮液和1mｌ0．1%的2,6 -二氯酚靛酚。一试管照光，另一试管置于黑暗。５-10min后观察溶液颜色的变化。

四、实验结果与讨论

实验结果:

黑暗处的试管颜色未发生变化,一直都是蓝绿色；

光照下的试管颜色明显变浅,由较深的蓝绿色变为浅绿色，证明希尔反应的存在，可见离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂。

实验讨论：

1、离体叶绿体对染料的还原作用实验中,比较两个处理的溶液颜色有何不同，并解释实验结

果。

答:现象:两份叶绿体悬浮液，分别加入1ml ０.１％的2,6－二氯酚靛酚后,一份在光照条件下,一份在黑暗条件下；在黑暗条件下的叶绿体悬浮液一直是蓝绿色的；而在光照条件下的叶绿体悬浮液在加入1ｍl 0.１％的2,6－二氯酚靛酚后为蓝绿色，而放在光下一段时间后叶绿体悬浮液又慢慢变为原来的颜色,浅绿色。

原因：这是由于叶绿素在光照条件下被激活，而释放出电子，从而还原某些氧化剂。２,6 -二氯酚靛酚本来是蓝色的,加入后使得叶绿素提取液变为蓝绿色,而2，6-氯酚靛酚还原后，溶液变为无色，这时叶绿素提取液又变为原来的颜色，浅绿色。

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参考文献：

王英典，刘宁. 植物生物学实验指导 . 北京：高等教育出版社.（第2版）

本文来源：https://www.bwwdw.com/article/toke.html