PCR 引物设计的原则和要点
更新时间:2023-08-07 20:55:01 阅读量: 实用文档 文档下载
- pcr是什么意思推荐度:
- 相关推荐
PCR 引物设计的原则和要点
PCR 引物设计的原则和要点
http://www.77cn.com.cn 2005-5-13 9:13:57 来源:生物中国人
引物设计有3 条基本原则:首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构,再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。引物设计应注意如下要点:
1 引物的长度一般为15-30 bp,常用的是18-27 bp,但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。
2 引物序列在模板内应当没有相似性较高,尤其是3’端相似性较高的序列,否则容易导致错配。引物3’端出现3 个以上的连续碱基,如GGG 或CCC,也会使错误引发机率增加[2]。 3 引物3’端的末位碱基对Taq 酶的DNA 合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率,末位碱基为A 的错配效率明显高于其他3 个碱基,因此应当避免在引物的3’端使用碱基A[3][4]。另外,引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR 反应失败。5’端序列对PCR 影响不太大,因此常用来引进修饰位点或标记物[2]。 4 引物序列的GC 含量一般为40-60%,过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。
5 引物所对应模板位置序列的Tm 值在72℃左右可使复性条件最佳。Tm 值的计算有多种方法,如按公式Tm=4(G+C)+2(A+T),在Oligo 软件中使用的是最邻近法(the nearest neighbor method)。
6 ?G 值是指DNA 双链形成所需的自由能,该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3’端?G 值较低(绝对值不超过9),而5’端和中间?G 值相对较高的引物。引物的3’端的?G 值过高,容易在错配位点形成双链结构并引发DNA 聚合反应[6]。
7 引物二聚体及发夹结构的能值过高(超过4.5kcal/mol)易导致产生引物二聚体带,并且降低引物有效浓度而使PCR 反应不能正常进行[8]。
8 对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点,应根据下一步实验中要插入PCR 产物的载体的相应序列而确定。
正在阅读:
PCR 引物设计的原则和要点08-07
作风建设个人自查自纠问题台账07-31
村“扫黑除恶”专项斗争工作汇报02-22
太阳能作业(李斐2010214084)10-23
在2022年全市转变作风改善发展环境建设年活动动员大会上的讲话范03-23
同在公益网戒网站建设和营销推广策划书08-25
如何评估借款人的还款意愿02-22
2013年高考数学(课标版)原创预测题(理科):专题三 数列01-31
电厂作风建设自查自纠分析报告09-16
我的英语老师作文800字02-05
- 教学能力大赛决赛获奖-教学实施报告-(完整图文版)
- 互联网+数据中心行业分析报告
- 2017上海杨浦区高三一模数学试题及答案
- 招商部差旅接待管理制度(4-25)
- 学生游玩安全注意事项
- 学生信息管理系统(文档模板供参考)
- 叉车门架有限元分析及系统设计
- 2014帮助残疾人志愿者服务情况记录
- 叶绿体中色素的提取和分离实验
- 中国食物成分表2020年最新权威完整改进版
- 推动国土资源领域生态文明建设
- 给水管道冲洗和消毒记录
- 计算机软件专业自我评价
- 高中数学必修1-5知识点归纳
- 2018-2022年中国第五代移动通信技术(5G)产业深度分析及发展前景研究报告发展趋势(目录)
- 生产车间巡查制度
- 2018版中国光热发电行业深度研究报告目录
- (通用)2019年中考数学总复习 第一章 第四节 数的开方与二次根式课件
- 2017_2018学年高中语文第二单元第4课说数课件粤教版
- 上市新药Lumateperone(卢美哌隆)合成检索总结报告
- 引物
- 要点
- 原则
- 设计
- PCR
- 金融学专业《货币银行学》练习题(一)
- 管理学名词解释汇总
- 2016年安徽自主招生生物模拟试题:ATP的结构和功能
- 甲状腺乳头状微小癌的诊治
- 项目教学法在《餐饮服务与管理》课程教学中的创新
- Pyramid_Principle金字塔原理
- 《红楼梦》研究 教学大纲
- 青少年毒品预防教育教学案例
- 第3课 降水的变化与分布
- 电力工程电缆设计规范
- 认识圆课件(幻灯片)修改
- 使用User Profile Wizard 跨域迁移用户profile&计算机 - Windows Server 相关技术 - WinOS技术论坛 微软
- 基础会计(2017年)继续教育测试题及答案
- 2018年江苏高考数学二轮复习教师用书:第1部分 知识专题突破 专题10 平面解析几何 含答案 精品
- _庄周梦蝶_主旨新解
- 在市委六届十二次全体(扩大)会议上的总结讲话
- 2010年第六次全国人口普查主要数据公报
- 2019-《奇妙的超低温世界》阅读答案-范文word版 (2页)
- 热电厂2012年度培训总结
- 中国共产党入党志愿书填写范文