抗生素效价培训大全
更新时间:2023-06-12 03:19:01 阅读量: 实用文档 文档下载
抗生素操作完全讲解 透彻 好理解 实用性极强
抗生素效价培训内容
一、需要干热灭菌的器皿:
C
二、以检磷酸泰乐菌素为例配置培养基和缓冲液的准备如下:
㈠①磷酸泰乐菌素原料含量测定标准:精密称取本品适量,加灭菌水定量制成每1ml中约
含1000单位的溶液,照抗生素微生物检定法测定。1000泰乐菌素单位相当于1mg的泰
乐菌素。
成品含量测定标准:精密称取本品适量,置100ml量瓶中,加灭菌磷酸盐缓冲液(pH6.0)
40ml,加甲醇40ml,超声15分钟,摇匀,放冷,加灭菌磷酸盐缓冲液(pH6.0)稀释至
刻度,使成每1ml中约含1000单位的溶液,取上清液,照磷酸泰乐菌素项下的方法测定,
即得。
②查《中国兽药典》2005年版附录103页抗生素微生物检定法,可知:
泰乐菌素 试验菌——藤黄微球菌(28001);培养基——Ⅱ,pH值为6.5~6.6或7.8~8.0;
灭菌缓冲液pH值——6.0;抗生素浓度范围2.5~10.0;温度——35~37;
时间——16~18
培养基Ⅱ制备方法:
胨 6g;酵母浸出粉 6g;琼脂 15~20g;牛肉浸出粉 1.5g;葡萄糖 1g;水 1000ml
磷酸盐缓冲液(6.0)——取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g,加水使成1000ml。
③缓冲液及培养基配置完成后进行高压121℃湿热灭菌,时间为15~20min。
㈡①标准品、原料、成品取样量的计算方法:
4 标准品效价:1034u/mg 原料效价:800u/mg 成品效价:880×10/100g
原料 800u/mg×x=1000u×10ml x=0.0125g
4成品 100g: 880×10=x:100ml×1000u x=1.13636g
标准品 1034u/mg×x=1000u×10ml x=0.00967g
注意事项:a.称量量必须大于应取的量,多余的量要另加溶液使溶液浓度达到标准;如
标准品取0.00992g,多加溶液量为x, 1034u/mg×9.92mg=1000u×x,x=10.26ml,则
另加溶液0.26ml。另外也要考虑容量瓶的体积,以免称量量过多使之盛不下。b.标准品
应从冰箱拿出后放置室温再进行称量。
②稀释步骤:
取5ml 50u/ml
缓冲液6.0定容至100ml
取5ml
50u/ml 5u/ml
缓冲液6.0定容至50ml
取5ml
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50u/ml 2.5u/ml
缓冲液6.0定容至100ml
二、具体操作过程:
① 试验操作过程在生物测定室的半无菌室内进行,一切准备就绪后就进行如下操作:
a.将所有双碟平铺在水平台上,事先加热融化的培养基吸取20ml均匀摊布每个双碟内;
等培养基凝固后盖上陶瓦盖,放置培养箱中。
b.将作为菌层的培养基水浴至90℃左右,然后再放置到菌层培养的控制温度(藤黄微
球菌的控制温度是48~50℃),这其中时间内可将菌液配制好(吸取2ml灭菌水至细
菌斜面内,摇匀),等温度降至控制温度时吸取菌液(一般为0.6ml)至培养基内并
摇匀,迅速吸取5ml至每个双碟使之均匀摊布。
c.菌层完全凝固后放置牛津杯,牛津杯应四角对称的放置在菌层平面上,然后再加高
低浓度溶液,牛津杯和抑菌圈的位置如下图所示:
d.
注意事项:a.细菌斜面应提前从冰箱拿出放置室温。b.吸取菌层5ml刻度吸管应放置 培养箱中保温。c.在双碟上记录标准品所对应位置以便测量数据,两个样品的标记应 区分开来。d.菌层培养的控制温度应直接量培养基的温度,因为水浴所用水的温度肯 定低于培养基的温度,使用的温度计要用75%酒精搽拭。
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