一致性评价重磅参考：(USP1092)溶出度试验的开发和验证解析

一致性评价重磅参考资料：（USP1092）溶出度试验的开发

和验证

2015-12-25刘建华医药信息新药开发

译者：刘建华 国药集团工业有限公司

前言

目的：溶出度试验的开发和验证（1092）目的是为溶出度的测定提供了全面的开发和验证的方法以及相应的分析技术。本指导原则贯穿溶出度测定的全部过程，并对方法验证提供了指导和验证标准。同时它还涉及对普通制剂和缓释制剂产生的数据和接受标准进行说明。 范围：本指导原则讨论了溶出度试验的开发和验证，重点是固体口服剂型。所提出的概念也可能适用于其他剂型和给药途径。对于一些不同于USP章节中的设备和程序均已给出合适的解释。

本指导原则的基本框架如下：

1. 前期评估（对产品开发以及溶出度方法开发的前期研究评估） 1.1 滤膜相容性研究（Performing Filter Compatibility） 1.2 原料药在不同溶媒中溶解度和稳定性的测定 1.3 选择溶出介质和体积

1.4 选择溶出设备（桨法和篮法以及其他方法） 2. 方法开发 2.1 脱气 2.2 沉降 2.3 搅拌 2.4 研究设计 2.4.1 取样时间点 2.4.2 观察 2.4.3 取样 2.4.4 清洗 2.5 数据处理 2.6 溶出度试验的评估 3. 分析整理 3.1 样品的处理 3.2 过滤 3.3 离心 3.4 分析过程 3.5 光谱分析 3.6 HPLC分析

4. 程序化

4.1 溶出介质的准备

4.2 样品的选择和取样时间的设计 4.3 取样和过滤 4.4 清洗

4.5 使用软件和计算机处理结果 4.6 找出需要验证的存在偏差的过程 5. 验证

5.1 专属性/安慰剂的干扰 5.2 线性和范围 5.3 准确度/回收率 5.4 精密度试验 5.4.1 重复性试验 5.4.2 中间精密度试验 5.4.3 重现性试验 5.5 耐用性试验

5.6 对照品和供试品的稳定性试验 5.7 程序化验证 6. 接受标准 6.1 普通速释制剂 6.2 缓释制剂 6.3 控释制剂 6.4 多重溶出度试验 6.5 溶出度结果的解释 6.5.1 普通速释制剂 6.5.2 缓释制剂 6.5.3 控释制剂 7. 参考文献

1. 前期评估（对产品发展以及溶出度方法开发的前期研究评估）

在方法开发之前，对用以评价剂型的溶出行为的滤膜、溶出介质、介质体积和溶出设备进行筛选是非常重要的。 1.1滤膜相容性研究

在获得准确试验结果中，过滤是一个样品制备的关键步骤。过滤的目的是为了去除溶出液中未溶解的药物和辅料。如果不把未溶解的药物和辅料从供试品溶液中去除，那么那些未

溶解的药物颗粒会继续溶解并改变试验结果，因此，如果取样管中没有过滤器，必须对溶出度样品立即过滤。

过滤同时也可去除可能干扰测定的不溶性辅料。选择适当的过滤材料是非常重要的，和应该完成的，并且最好在早期的溶出开发过程中用实验进行确定。在选择滤膜中重要考虑是滤膜的材料，型号和孔径大小。过滤器的选择是根据评价过程中溶出程序开发的早期阶段，在后期试验中可能需要重新考虑，比如药品或成分的变化以及辅料质量的变化（微晶纤维素粒径的改变）。

用于溶解试验的过滤器有管路过滤器，过滤盘或frits，滤头，或针头式过滤器。过滤材料必须与介质和药物兼容。一般的孔径范围从0.20到70μm，如果需要其他孔径的过滤器同样可以使用。如果原料药的粒度很小（例如，微分化颗粒或纳米颗粒），找到一个过滤器孔径滤除这些小颗粒滤膜至今还具有挑战性。

过滤可能发生对药物的吸附，并需要进行评估。过滤材料将与溶解介质相互作用，影响单个溶质的回收率，必须通过具体案例进行考虑。不同的过滤材料具有不同的药物结合特性。滤膜对药物的吸附率依赖于药物浓度。因此，吸附性应在预期浓度范围内不同浓度样品溶液进行评估。由于药物吸附是可饱和的，弃去一定体积的初滤液收集随后的续滤液，以达到接近原来的溶液浓度的样品也是可取的。通常选择适合的过滤材料，最大限度地减少滤膜吸附干扰，润湿滤膜对减少吸附也是必要的。此外，从过滤器滤下的溶出物不干扰检测也是非常重要的，一般可以通过溶出介质过滤前后进行比较得知，滤膜是否干扰样品的测定。

根据要过滤样品溶液的体积以及样品溶液中颗粒的量选择滤膜孔径。使用正确的滤膜孔径将提高溶液的通过率和回收率，并减少滤膜堵塞。使用大孔径滤膜过滤小体积溶液，可以导致样品溶液损失量过大而收集不到所用样品量；使用小孔径滤膜过滤，需要更高的压力和较长的时间，并且溶液滤膜迅速堵塞。

用于USP装置4的过滤器使用时需要特别注意，因为他们使用在流中（应该是自动取样器中的过滤装置），不溶颗粒沉积在过滤器，创造流动的阻力。

在自动化系统的情况下，对滤膜材料和孔径大小的过滤器的选择可以用类似的方式来手动过滤。流通过滤器的流量和堵塞可能自动化系统中是关键的。通过试验比较过滤和未过滤的标准和样品溶液差别，验证该滤波器是适当。这是通过首先制备一个合适的标准溶液和样品溶液。例如，准备在烧杯中一个典型溶解的样品，大力用磁力搅拌器搅拌使药物溶解完全。对于标准溶液，比较过滤溶液（弃去的适当体积后）和未过滤的溶液品的结果；样品溶液，比较过滤样品（弃去适当体积后）和离心分离，过滤解决方案。 1.2原料药在不同溶媒中溶解度和稳定性的测定

在选择合适的溶出介质的过程中，需要确定原料药的物理化学特性。在溶出度试验需要决定溶出介质的组成，重要的是要评估缓冲液和pH值，以及不同的表面活性剂（如果需要）对药物的溶解度和稳定性的影响。在37℃通过测定不同介质中的饱和浓度，用摇瓶溶解法（平衡溶解度）测定药物的溶解性，为了平衡药物和溶出介质中缓冲液之间的离子潜在影响，使用盐酸和氢氧化钠的混合物对溶解度进行研究；除了典型的缓冲溶液。在某些情况下，评估药物在37℃以外条件下（即，25℃）的溶解度可能也是必要的。在溶解度试验过程中应检查

上清溶液的pH值，以确定在溶解过程中pH值是否改变。也可使用其他可供选择的方法进行溶解度测定。

溶出典型的介质可如下（未按照优先顺序列出）：稀盐酸，在生理pH值范围为1.2-7.5缓冲溶液（磷酸盐或者醋酸盐），模拟胃或肠液（含有或不含酶）和水。例如某些药物，药物和缓冲液或盐的不相容可能会影响缓冲液的选择。用缓冲液和酸的体积摩尔浓度对药物有增溶作用，这个因素也需要评估。

有时候水溶性介质中（酸性水溶液或缓冲溶液）可能添加一定比例的表面活性剂（如十二烷基硫酸钠（SDS），聚山梨醇酯，或十二烷基二甲基氧化胺）以提高药物的溶解度。选择用于溶解度试验的表面活性剂时应涵盖所有常用种类的表面活性剂，比如阴离子、非离子型和阳离子，当已经确定一个合适的表面活性剂时，应对表面活性剂不同的浓度进行研究，以确定达到漏槽条件所需的最低浓度。一般情况下，表面活性剂的浓度高于它的临界胶束浓度（CMC）。表1列出了溶出介质中常用的表面活性剂，表中提供了CMC的近似的临界值，以便我们参考，此外，表中所列表面活性剂并不全面，不能排除未列出的表面活性剂。其他表面活性剂，如羟丙基β-环糊精，已被用来作为溶出介质添加剂来提高难溶性化合物的溶解，美国食品药品管理局（FDA）溶出度数据库中，已经收载含有羟丙基β-环糊精的溶出介质（1）。通常情况下，表面活性剂的加入量以满足达到漏槽条件所需的溶出介质体积。

由于使用不同级别的表面活性剂会影响药物的溶解度，因此要控制表面活性剂的级别和纯度。例如，SDS只有在技术级和高纯度级别才可以使用。在使用HPLC方法进行分析时，从不同来源的聚山梨酯（吐温）80会影响它的适用性。

反离子或pH值可能会影响表面活性剂溶液的溶解性或稳定性。例如，当含有SDS的磷酸盐缓冲液中钾盐浓度为0.5mol/L时，就形成了沉淀析出，但是使用磷酸钠制备含有SDS的介质时，可以避免这种现象发生。

表1 常见表面活性剂的临界胶束浓度 表面活性剂 CMC（%重量/体积） 十二烷基硫酸钠（SDS,SLS） 0.18%-0.23% 牛磺胆酸钠 0.2% 胆酸钠 0.16% 脱氧胆酸钠 0.12% 0.033%-0.036%（0.92-1.0十六烷基三甲基溴化铵（CTAB） mM） 苄索氯铵（季铵盐1622） 0.18%(4mM) 聚山梨酯20（吐温20） 0.07%-0.09% 聚山梨酯80（吐温80） 0.02%-0.08% 辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯（ La0.01% brasol ） 聚氧乙烯蓖麻油35（Cremophor0.02% EL） 聚氧乙烯月桂醇醚（Brij 35） 0.013% 辛苯聚醇（Triton X-100） 0.01%-0.03% 月桂基二甲基胺N-氧化物（LDA0.023% 参考文献 2-4 3 3 3 5,6 2 3,7 3.7 4 8 9 3,10 11 阳离子 阴离子 非离子 两性离子 O） 通常，溶出介质为缓冲盐溶液，但是，对于非pH值依赖性的产品可以使用纯化水作为溶出介质。不推荐使用纯化水作为溶出介质的原因：水的质量取决于它的来源，而水的pH值不像缓冲溶液能够严格控制。此外，水的pH每天都变化在运行期间也会改变取决于原料药和辅料。另外使用水性有机溶剂混合物作为溶出介质是不推荐的，但是，特殊情况下（有充分适当的理由），也是可以接受的。

必要时，应该对原料药的稳定性进行考察，在所选择的溶出介质中加入辅料，在37℃条件下进行考察。这种升高的温度潜在的降低溶液的稳定性（降解）。稳定性应允许有足够的时间来完成或重复分析过程。当沉淀发生时，物理稳定性也需要关注，因为室温或冷藏贮存时会降低药物的溶解度。 1.3溶出介质和体积选择

当开发一个溶出试验方法时，一个目标是满足漏槽条件，漏槽条件定义为溶出介质体积至少为体积药物饱和溶液的所需体积的三倍。当满足漏槽条件后，溶出度结果能够更好的反映药物制剂的质量。在适当条件下，介质不满足漏槽条件也是可以接受的。溶解介质的组成和体积取决于药物溶解性试验的结果。例如，表面活性剂的选择和浓度选择，需要根据药物溶解度数据和溶出度曲线进行判断。

当交联明胶胶囊或明胶包衣的制剂溶出失败时，在溶出介质中允许使用酶，这同溶出度（711）指导原则一致，。在Capsules–Dissolution Testing and Related Quality Attributes（1094）中可以找到发生交联现象和采用酶进行方法开发的研究。其验证应根据第5节规定的所使用酶作为溶出度测定的方法验证要求进行验证。

另一种选择是使用胃液和人工胃液或者人工肠液。这些溶出介质可能包含生理表面活性成分，如牛黄胆酸。这些溶出介质也可能含有乳化剂（卵磷脂）和增加渗透压的组分，比如生理盐水溶液。同时，缓冲液的离子强度或体积摩尔浓度是可以操作的。设计的溶出介质代表了胃和小肠的进食和空腹状态。这些溶出介质在速释制剂（IR）建立体内溶解行为建模方面是非常有用的，特别是这些速释制剂含有脂溶性的原料药，并可能有助于理解与消化液的生理构成相关的制剂的溶出动力学。溶解动力学的成功模型已经发表，主要用于速释制剂。在缓释剂型减少药物溶解行为的影响，使用的这些溶出介质的不同需要进行评估。体外性能测试并不一定需要空腹和餐后状态的媒体建模。

对于肠溶制剂，酸中释放度是溶出度的一部分（（711）方法A或者方法B）。制药针对于药物标签中说明在酸中释放度不得过标示量的10%或者在酸液中降解而包有抗酸包衣的药物。根究具体情况进行解决，可能的解决方案包括：酸性介质中添加表面活性剂或者调整质量标准）

在选择溶解介质时，应注意通过分析确保原料药在整个过程中的稳定性适当。在某些情况下，如抗坏血酸的抗氧化剂，可用于在溶出介质中，以保证药物的稳定性。有些时候这些是不够的。化合物快速降解形成稳定的降解物，单独监测降解物或与原料药联合监控可能比只分析原料药更适合。采用高效液相色谱分析（包括超高效液相色谱等液相色谱法）替代光谱分析相比对降解的影响较小。

对于药典装置1（篮法）和装置2（桨法），溶出介质的体积可以从500到1000毫升不同。通常情况下，溶出介质的体积应当满足漏槽条件。在某些情况下，根据药物的浓度和漏槽条件，体积可以增加到2到4升之间，使用较大的溶出杯（这种方法的必须有充分的理由）。实际上，溶出介质的体积通常保持在上述法定范围内。或者，可能选用其他药典装置比较合适，如往复式气缸（装置3），往复架（装置7），或流通池（装置4）。某些装置可能需要较少体积的溶解介质（例如，100-200毫升），优选使用的桨法或蓝法。在这些情况下，非药典仪器装置（例如，体积小的设备）也可以选择使用。 1.4选择溶出设备（桨法和篮法以及其他方法）

装置的选择是根据对处方设计的认知和体外试验剂型的实际特点。一般来说，首选药典装置。

对于固体口服制剂，装置2和装置1使用最多。当装置1或装置2是不适用时，其他官方装置可以使用。装置3（往复气缸）已发现对咀嚼片、软胶囊、缓释制剂和不崩解型产品（如包衣小球）特别适用。装置4（流通池）对活性成分的溶解度有限的缓释剂型和速释剂型提供了很多优势。此外，设备4可用于多剂量剂型，如软胶囊，beaded products，栓剂剂型，或贮库型产品，以及悬浮型缓释剂型。仪器5（桨盘）和设备6（旋转缸）是有用的评价和测试的经皮给药形式。设备7（往复架）具有非崩解的应用，口服缓释剂型，支架，和植入物，以及透皮剂型。半固态剂型，常用的设备包括立式扩散池，浸入细胞，和流过的细胞器的外用剂型的插入（see Semisolid Drug Products—Performance Tests <1724>）。

对药典装置配件也可以有所调整；例如，除了药典装置40目以外的溶出篮（例如：10，20或者80目）需要使用，通过充足的数据进行详细的阐明后可以使用。必须注意的是篮子必须是均匀的并且满足<711>规定的尺寸要求。

新的溶出装置经过确定有效，并且优于药典装置时可以使用。例如，一个小体积的溶出装置配有小桨或者小蓝可以用于低剂量强度的产品。旋转瓶或透析管可能有实用的微球、植入制剂，靶向制剂和特殊剂型包括粉末改性流通细胞支架。

2. 方法的开发

一个正确的设计测试应该保证的数据稳定性（即较低的变异性），并且能够反映样品的重大稳定性问题。较高变异的结果难以确定的趋势和配方变化对溶出度影响的结果。样本大小可以确定方法的变异性。对于溶出度结果变异性的要求是：在10分钟或者之前12个样本的相对标准偏差（RSD）不得过20%，后续取样点的RSD值不得大于10%。然而，在方法开发过程中，可以使用较小的样本量，而操作者也需要作出相应的判断。大多数的溶出结果，表现出较少的可变性。在开发过程中的变异的原因应进行研究，并应可能减少变异性。引起变异性两个最有可能的原因是制剂本身（例如，原料药，辅料，或制剂过程）或与测试过程的相关的处理程序（例如，溶出漩涡，片粘在溶出杯壁或篮网上）。试验过程观察往往是有助于查找可变性的原因或者溶出度测定方法本身是否存在变异性。任何时间内制剂不能均匀地分散在整个容器中，异常结果就可能发生。根据问题的不同，通常的补救措施如下：设备类型，搅拌速度，脱气，沉降蓝的种类，或者溶出介质的组成。

在处方开发和生产过程中，可以发现许多变异的原因。例如，含量均匀度的差异，工艺不一致，辅料的相互作用或干扰，包衣，胶囊壳老化，稳定性放置过程中引起制剂硬化或软化的干扰源。 2.1脱气

应确定溶出介质脱气的目的，因为在溶解过程中如果在剂量单位或篮网出现气泡，会起到一个屏障作用，影响试验结果的可靠性。此外，气泡会使颗粒粘在设备和容器壁。剂量单位上的气泡可能会增加浮力，导致溶解速率增加，或者也有可能会减少可用的表面积导致在溶出率下降。难溶性药物对气泡的干扰最敏感；因此，检测这些类型的产品时需要脱气。在<711>部分附注描述了脱气方法。典型的脱气方法：加热介质，过滤，和在短时间内抽真空。其他脱气方法和在整个行业常规使用的脱气方法是可用的。一旦确定一个合适的脱气过程，它应该作为溶出方法的一部分记录下来。通过测量总溶解气体压力或通过测量水中溶解气体浓度来评估脱气程度。例如，使用USP的性能验证测试泼尼松龙片RS发现氧浓度低于6毫克/升是水已充分脱气的有效标志。

含有表面活性剂的溶出介质由于脱气过程导致过多的气泡通常不容易脱气，通常通过减少溶出介质中的表面张力，来减轻溶解的空气对溶解过程产生的影响，有时，在加入表面活性剂之前对溶出介质进行脱气是有效的。

确定溶出介质是否需要脱气是必要的，使用药典技术中的脱气方法，如上所述，比较溶出样品在脱气和未脱气的溶出介质中的运行结果。如果检测到脱气对溶出结果没有影响，在将来，该试验可以作为不需要进行脱气的理由。如果有影响，那么有必要小心的控制这个参数，谨慎地去描述脱气过程中的稳健性特点。

在大气压强下，在脱气的溶出介质中溶解的气体量是不稳定的，会趋向饱和。脱气介质的操作，比如搅拌或倾倒可以增加大气气体的再溶解速率。 2.2沉降篮

在测试过程中装置2沉降篮经常用来调节剂型的浮力，不然就会漂起来。当使用沉降蓝时，在书面程序必须提供对沉降篮的细节描述。评估沉降篮的不同类型，同时要识别沉降篮能够显著剂量单位的溶出曲线。当转移这个方法时，应使用相同的沉降篮，或者如果使用不同的设计，应当证明两种不同的沉降篮产生相同的结果。商业可用的沉降篮有几种类型。在<711>中图2a中对沉降篮进行了详细的描述。

一个标准的沉降篮可以通过使用合适长度的金属丝围绕圆柱体卷绕制成。使用316不锈钢丝为材料，通常0.032英寸/20容量规格，或其它惰性材料和缠绕的适当直径（如，木塞穿孔器）和缸丝匝数量以适合胶囊壳的类型。表2中列出了尺寸。线圈的端部可以是弯曲的，以保持胶囊在沉降篮内浸润。因为金属丝的端部是粗糙的，他们可能需要修整。如果沉降篮是手工制作，应记录沉降篮的材料和结构（例如，尺寸，设计，线圈数）;如果用的是商业沉降篮，供应商部件号，如果有的话，应当报告出。 表2普通胶囊壳规格使用的沉降篮金属线尺寸 胶囊壳型号 金属线长度 直径（cm） #0，延长 12 0.8 #1和#2 10 0.7 软木塞孔数量 4 3 #3和#4 8 0.55 2 虽然通常使用的沉降篮是为了保持剂型在容器的底部，它们也能够用于保持剂型粘附在容器中（例如：薄膜包衣片）。沉降篮应与剂型相适合。因此，相同的沉降篮大小可能不适合所有的剂型型号。沉降篮不应围绕剂型太紧，因为这可能会限制与介质的相互作用。相反，如果包装太松，剂型可能会逃脱。在测试开始后不久。沉降篮应该足够小，使得胶囊在沉降篮内没有改变方向。胶囊有一些交联存在时，试验时应小心，以保持胶囊壳粘附容器底部。在这种情况下，在<711>图2a中提供了沉降篮的统一设计将是有利的。 2.3搅拌

对于速释胶囊或片剂，一般采用装置1（篮法）在50~100 rpm，或者装置2（桨法）在50或75 rpm。如果有合适的理由其他搅拌速度也是可以接受的。考虑到搅拌速度太慢或太快产生的混合不一致，无论是篮法或者桨法，低于25 rpm或高于150 rpm的转速，均是不能接受的。对于混悬剂一般推荐转速为25rpm~50rpm。

在桨搅拌速度50rpm下，制剂在浆下存在圆锥（丘）状，将桨转速增加至75 rpm圆锥可以减少圆锥状，从而提高溶出数据。如果适用，也可以采用桨法100rpm，尤其是对于缓释制剂制剂。如果能够实现体内外相关性（IVIVC），使体外溶出曲线更好的反应体内溶出特性，或者在不影响方法的变异性溶出结果具有更好的区分力，增加或减小装置的转速均是合理的。

装置3（往复缸）可用于浸率范围每分钟从5降到30。流体力学的影响气缸的往复运动和样品在介质中运动结果。如果介质中含有表面活性剂，如果溶出介质中含有表面活性剂，在气缸和监视器的往复运动会引起起泡。加入抗泡沫剂如硅油或正辛醇可避免发泡。 装置4 (流通池) 2.4 研究设计

不管是速释制剂或者是缓控释制剂，对搅拌速率选择和其他研究设计原理，均应符合<711>规范要求（即装置，方法和说明）。 2.4.1 取样时间点

对于速释制剂，溶出度测定时间通常为30~60 min；在大多数情况下，单点取样设计足够满足药典的控制目的。然而，对于方法的开发阶段，应选择足够数量的时间点来充分表征溶出曲线增高和达到溶出平台的趋势。工业和法规概念的产品的可比性和产品性能需要增加时间点进行研究，产品的注册或批准也是需要的。根据FDA指导原则中生物药剂学分类系统，高溶解性高渗透性药物（快速溶出药物），如果在15分钟内溶出度达到85%以上，可不再进行曲线考察，单点试验就足够了。然而，大多数产品不属于这一分类。速释制剂的溶出度通常呈逐渐增加趋势，一般在30~45分钟溶出度值达到85%~100%。因此，大多数速释制剂会选择充足的时间点来表征产品的溶出特性。对于一些产品，包括悬浮液，早期的时间点获得的信息比较有用，例如，5，10分钟。对于溶出速度较慢的产品，60分钟后的时间点可能是有用的。药典中规定的溶解度试验时间确定通常是建立在对溶出曲线数据评估的基础之上。

15分钟溶出量大于85%的制剂f2相似因子是不适用的。如果使用f2相似因子进行比较，需要进行多个时间点溶出度测定，至少两个取样时间点平均溶出值低于85%（一般是n=12）

并且两组产品的溶出度值只有一个时间点大于85%。因此，在早期增加时间点检查可能是有用的。

对于缓释剂型测试，至少选择三个时间点，以防止剂量释放不完全，确定体外释放曲线，并要求药物释放完全（>80%）。增加采样时间点可能是有用的。根据体内外相关标准，如B级相关（according to In Vitro and In Vivo Evaluation of Dosage Forms <1088>），需要的测定出药物释放标示量100%的时间点。最后的时间点的选择是为了反映在开发过程中产生的药物释放曲线。对于含有多个活性成分的产品，确定每种活性成分的药物释放。

延迟释放剂型通常需要至少设计2个时间点，因此，在开发过程中评估整个溶出曲线是非常重要的。至于肠溶包衣制剂，包衣的功能通常被证明在酸介质中的抗酸能力，然后通过在一个较高的pH值介质，在<711>章节给出了标准的缓冲介质溶液中溶解的行为（如果理由适当其他溶出介质也是可以使用的）。酸中释放时间通常是2小时，与速释制剂在缓冲液中释放时间类似。对于没有进行肠溶包衣的缓释剂型，测定方法是不同的。与延迟释放不同，通过实验设计、PH值变化、多元设计不能确定释放的机制，因此，可能需要确定的时间范围和相应的百分比范围。

所谓的无穷点在开发研究中是有用的。为了获得一个无穷大点，在运行结束后（一般是最后一个取样时间点）增加桨或篮转速，并维持一段时间（通常是15~60分钟），在这段时间后，取样测定。虽然在溶出曲线中不要求100%的溶出，但是无限点可以比较的药物的均一性，并可以提供有用的信息，用于评估初始开发过程中的制剂特性或方法偏差。 2.4.2 观察

观察并记录产品的崩解和溶出行为是有用的，因为崩解和溶出方式可以为处方和工艺提供详细的信息。观察过程中，为清晰观察溶出杯中内容物，提供适当程度的光（适当考虑光降解）是必不可少的。绘制草图、拍摄照片或录像记录观测结果，对那些不能够实时观察溶出度试验的人来说是有用的。观察溶出过程变化对方法开发和配方优化特别有用。重要的是要记录所有六个溶出杯的观察结果，以确定是否在所有六个容器中观察到该结果，或者仅仅是几个溶出杯观察到该结果。如果测试的目的是为了协助处方开发，为处方设计提供任何观察到的独特现象。通常观察到的现象包括，但不限于以下内容：

①颗粒在整个容器内分布不均。这可以发生在颗粒附着到容器的两侧，篮下或者桨下有锥型堆积物，当物品浮在介质表面，当薄膜衣片粘在杯壁，和/或当偏离中心的堆状物形成。 ②气泡在容器内或装置上或单片制剂上。仪器上的光泽也是空气气泡的标志。在评估是否需要溶出介质脱气会进行这些观察。

③单位制剂摇晃或者旋转，或溶出桨击中单位制剂。 ④试验结束后，颗粒粘附于桨或篮内。

⑤薄膜或类似的结构，如透明囊或橡皮囊，围绕胶囊内容物的膨胀部分。 ⑥尤其在溶出介质表面，存在大量的漂浮颗粒或块状物。

⑦观察的崩解速度（例如，在一定的时间范围内，在剂量单位大小的百分比减少）。 ⑧包衣修饰或肠溶性产品的复杂崩解[例如，部分开放和分裂（类似于翻盖）或不完整的外壳开口]，伴随气泡和辅料的释放。

⑨剂型是否位于中心还是偏离中心，如果偏离中心，它是否粘在那里。 ⑩胶囊壳完全溶解或片剂崩解所需的时间。

观察也有助于证明所进行过程是正确的，或更重要的是，发生偏差。实例包括在试验期间确认在容器中的实际存在一种剂型，或同一容器无意中存在多种剂型，或自动进样器的过滤器已经落入到容器中。 2.4.3 取样

手动取样：手动采样，使用化学惰性设备（例如，聚合物或玻璃注射器和聚合物或不锈钢套管），滤膜，和/或一个过滤固定器。样品的位置必须符合<711> 规定。当搅拌速度是很慢的，例如，一个50转的篮法，应注意在容器中的同一位置，因为不同位置有可能是一个浓度梯度，避免采样非常接近轴或容器壁。在方法开发过程中，应作出决定每一时间点是否进行补液，一般不推荐补液，因为剂量单位可能会受到干扰。然而，如果在漏槽条件极限范围内必须进行补液。补液中，在计算中使用的体积保持不变，在整个时间点，但有一些药物的物质撤回每一个样品，将需要在计算中。金属表面与样品相互作用。例如，可能发生吸附在金属表面，或金属表面可能释放到水介质中的金属离子。然后催化降解反应，导致在分析过程中的工件。搅拌元件的表面和金属锁的注射器可能是干扰的来源，准确的采样。

自动采样：采样在4节讨论。自动化。 2.4.4 清洗

重要的是放置在测试之间的清洗过程的评价。溶解介质和/或产品的变化需要清洗的需要。残留物上的可以影响的结果（例如，吸附的残留物可能会溶解和改变随后的媒体属性或干扰的样品分析），和有效的清洗将返回到一个合适的状态，自动系统在第4.4节中讨论的清洗。 2.5 数据处理

溶出率的计算从药物浓度的变化中的溶解介质。对于介质的体积是固定的，如用于设备1和设备2测试的直接释放量的形式，只有一个采样时间，样品的浓度乘以介质体积到达质量的药物溶解通常表示为标示量的百分比。如果采取多个时间点，在早期的时间点的药物的总清除量应进行评估，并可能是部分溶解的量的计算，如果认为重要。类似地，如果介质体积不固定，例如在测试扩展版本产品中不被替换时，介质体积的变化必须是连续采样点计算的一部分。在与原位检测的闭环配置的装置4进行溶解试验提供了一个方便的控制的介质体积。对于测试仪器4在开放的配置，测试时间和流量，将确定在溶出计算中使用的介质的体积。

溶出结果可以用累积溶出率或分数率进行表述。累积溶出率代表在一段时间内发生的所有药物溶出的总和（图1）。分数率则表示在一个特定的时间点或在一部分的总测试时间（图2）进行评估。通常情况下，释放率将表示为每单位时间标示量的重量或者百分比。对于大多数药典溶出度测定，溶出速率指定时间点表示为相对于标示量的百分比。

图1。作为一个累积溶出率的例子。浓度，C，是药物释放量的量每体积溶出介质；t代表时间。这种类型很容易地观察到在恒定体积溶解系统，如设备1或设备2，或装置4在闭环配置。

图2 An example of a plot of the observed concentration of the sample taken for an interval that is negligibly small in relation to the time of the overall dissolution process. This concentration is propostional to the instantaneous or fractional dissolution rate(dc/dt). This type of plot is readily observed in continuous-flow dissolution systems, such as Apparatus 4 in open loop configuration.。 2.6 溶出方法评估

溶出度试验方法是指由溶出装置，溶出介质，和测试条件，共同组成一个方法，这个方法能个反应产品的关键属性变化，同时能够运用于日常操作，并且能够进行实验室之间的转移。

理想的溶出方法不会有不可接受的变异性，并且能够将不会贡献一个不可接受的程度的变异，并且在溶出度值低于85%应有足够的取样点。一旦溶出度达到85%时小于15分钟，f2相似因子将不再适用。

有很多挑战方法灵敏度的方法。一种选择是比较公司的不同配方（是故意制造最相关的关键变量，例如，±10%~20%的变化）溶出曲线。同样，已被强调的样品可以用来证明对稳定性的变化的敏感性。这一概念可以用来建立的因素，是最显着的影响的溶出率。这些研究可以集中在对溶出参数（例如，介质浓度，搅拌速度，和脱气）或产品属性（例如，辅料比例，颗粒大小，压缩）。最终的目标是了解释放机制，并确定是溶出度方法是否可以显示药物产品的关键质量属性的变化。

3.分析整理

溶出步骤也是一个复杂的样品制备过程。用于测定溶出过程中药物溶出量的处理和分析过程，称为“分析整理”。虽然本章讨论的分光光度法和高效液相色谱法是最常用的分析方法，其他适宜的分析技术也可以使用。在第5节，将详细描述方法验证标准。 3.1 样品处理

溶出样品在取样后，需要进一步的处理，使能够满足样品释放量的分析方法的测定要求。例如，过滤可用于除去未溶解的颗粒物样品，或者避光、冷藏贮存样品。此外，样品可能需要稀释至方法线性范围内的测定浓度。使用高效液相色谱法时，尽可能采用流动相稀释至样品以减少溶出介质对样品测定的影响。根据产品特性的要求，其他类型的处理方式也是存在的。例如加入适当的试剂使产生干扰的物质消除或者失活。然而，分离可能是不可能的或需要的不是必需的，在一些情况下，在原位测量的方法，如纤维光学或电化学测定方法可能是有用的。 3.2 过滤

在上面1.1章节中已经讲述。 3.3 离心

离心处理样品是不优选的，具体原因有以下几个方面：在固体颗粒除去之前，药物溶解可以继续发生，是药物的溶出浓度增大，并且离心的动力也可能导致增加溶解的药物颗粒。然而当所有常见滤膜对药物均有吸附或者所有滤膜均干扰药物的测定时（例如，使用荧光定量），可以选择离心法处理样品。离心法可以证明是有用的，在方法开发的过滤材料的适用性评价。

3.4 分析方法

用于溶出度测定的常用分析方法一般为分光光度法或液相色谱法。分光光度法较高效液相法更简便快捷，并且分光光度法较HPLC法更容易自动化，并且溶剂量使用较少。但是分光光度法测定需要专属性良好。高效液相色谱法是首选的原因有很多，如提供较宽测定范围，减少了需要稀释样品的步骤，提高了低浓度样品的分析灵敏度，并且可用于辅料或者多组分互相干扰的样品的测定。目前的高效液相色谱系统采用自动进样器，提高了自动化。 3.5 光谱分析

直接分光光度法分析可以采用手动操作。另外也可以采用自动吸样系统或者流通进样池进行自动化分析操作。按照标准操作规程或者计量文件的要求进行仪器日常的仪器检查，清洁和维护，有助于确保仪器的准确运行。分光光度计的比色皿的长度一般为0.02cm~1cm，如果测定浓度较小的样品也可以使用长度较大的比色皿，较长比色皿中存在气泡可能引起仪器

错误。细胞排列和气泡可能是错误的来源。较短的比色皿可以使样品不用稀释直接进行测定，然而不管使用什么比色皿，样品溶液的线性范围以及标准误差必须进样验证。

检测波长选择必须基于样物溶液吸收光谱。在某些情况下，药物在溶出介质中降解（例如，含阿司匹林的制剂），一般会选取其降解物一致的吸收波长。对于辅料有干扰的情况，可以选用多波长进行分析：吸光度从赋形剂在分析的波长可以通过波长处吸光度最小的药物从吸收度比值确定。

在方法经过验证后，对照品溶液浓度一般只有一个浓度值，无论选取溶出量为100%或者溶出度限度（Q）值均是可以的，因为线性范围已经经过验证。但是在验证试验之前，无论溶出度分析曲线的测定，或者产品的优势分析，均需要使用多个对照品进行测定，已涵盖了预对照品溶液和样品溶液均应在溶出的线性浓度范围内采用相同波长进行测量。然而，少量的有机溶剂可用于制备的对照品溶液，以满足在验证过程中测定的准确度。

吸光系数α的计算公式如下（朗伯比尔定律）：

α=A/bc

A=吸光度

b=比色皿长度（cm） c=浓度（mg/ml）

用于溶出试验吸光度的单位通常为AU?毫升/毫克，其中AU是吸收度单位，.历史的资料可用来提供分析物可接受的吸收范围的（使用适当的路径长度单元）。这个值可能会在故障排除异常数据时非常有用。

纤维光学作为采样测定方法，通过适当的验证，是一种选择。 3.6 HPLC法

对于HPLC分析，由注射溶解介质对色谱图的影响需要列出。如果目标峰响的应解决不好，溶剂的较大干扰可能影响响应的准确度和精确。如果需要进样较大量（>100毫升）这更为重要。系统适用性试验可评估峰形、溶剂干扰、和主峰相邻峰的分离、和进样精密度。至少，该精密度是至关重要的。

理想情况下，标准溶液应用溶解介质进行稀释，要在该方法的线性范围内的浓度，例如，100％，或所选择的制剂剂量值稀释。然而，有机溶剂可以在制剂标准中使用，在验证过程中只要满足该精密度标准。在一些情况下，为了改善峰形，样品可以用流动相稀释，以改善峰形。在线性浓度范围内制备标准溶液和样品溶液应，并在同一波长处测定。

4.自动化

溶出度测定的自动化有很多方式和层级。溶出准备、开启、设置取样点和取样以及清洗均能实现自动化。完全自动化是指每个操作步骤均实现自动化，比如溶出介质的配制或者取样。本章节主要讨论可以实现自动化的步骤。自动化的水平取决于溶出仪是开环的还是闭环，同时也取决于分析仪器是脱机的还是联机的。联机分析是指测试样品能够输送到测定系统中并返还到溶出仪中，例如含有流通比色皿的分光光度计。脱机分析是指将样品去除溶出仪，然后进行后续的分析（最典型的为高效液相色谱法），分析过程中消耗掉样品。仪器配置的选择取决于样品的量以及分析所限制的时间。自动化操作需要报告药典规定的仪器仪器偏

差，如清洗或者更换介质遗留在管路中的残留，并且非药典标准化操作的步骤必须进行验证。指导原则（711）规定的标准程序的偏差，如使用采样探头或者光纤探头，必须按照标准程序进行验证。 4.1介质的配制

自动化配制溶出介质一般是通过稀释已经配制完的浓溶液完成。自动配置溶出介质程序一般是通过检测重量或者体积将介质输送到溶出杯中。浓缩液物理化学稳定性同使用过程中稀溶液的均一性一样是一个重要的问题，并且必须进行考察。缓冲溶液和含有表面活性剂的溶出介质可能会存在稳定性问题，例如化学降解或者pH值的改变。物理稳定性主要是沉淀、重结晶或者相分离，也应该防止发生。如果介质要求脱气，脱气水平应该符合规定。介质中氧气的含量可以通过上述章节2.1脱气程序的方法进行评估。 4.2 样品的取样时间

溶出杯中应有一个循环的取样管路。自动取样和回收大大方便手动取样，因为它减少了取样过程中所引起的变量。同时在早期取样点手动取样很难满足药典要求的取样时间相对标准偏差在±2%的要求。 4.3 取样和过滤

自动化是代替手动取样的一种实用的方法，尤其是对于多个取样点的试验。样品的取样和过滤使用弯管接头或者一系列步骤从溶出仪中直接到测定仪器中。样品溶液从溶出仪中取走后，可以不回收至溶出仪中（消耗取样）或者返回至溶出仪中（循环取样）。

目前有许多家品牌的自动溶出仪，有半自动的也有全自动的。仪器应当按照相应标准操作规程进行日常的性能检查、清洗和维护，以满足仪器正常运行。

在整个取样过程中取样针可以保持在或者不保持在溶出杯中。取样针或者光纤取样针可能会影响整体管路的流体学，因此需要进行充足的验证以保证不对药物的溶出速率造成重大的影响。如果使用的滤膜与手动操作的不同，同样需要对不同的滤膜分别经行考察。药典设备1和设备2的采样区的位置是中途从搅拌元件顶部到介质表面，根据介质的体积，取样针应从取样区进行取样。用于通过空心轴进行取样的仪器，应采用一种方法来调整入口孔的深度以使其符合要求。取样量取决于管路、比色皿和其他设备的死体积，必须进行相应的调整。

循环采样可以通管路在取样后将溶液排入溶出杯中或者在两个取样点中间将溶液排入溶出杯中。在后者的情况下，死体积和浓度效应的影响是重要的考虑因素。

在多个采样时间点的试验中，补液是需要考虑的。当取样量的总体积超过溶出介质总体积的1%时，影响是很大的。如果没有循环利用介质，那么应该计算结果，具体见2.5节数据处理。

当后续样品受残留或先前取样的条件的影响，可能会发生交叉污染；第一个样品或条件的影响传递到第二样品。在处理液体时，在样品溶液中的先前液体的残留物可能污染后续样品溶液。溶出介质包含表面活性剂或脂质可能会出现一些问题。根据清洗方案在多个时间点测试和在测试开始以及连续采样都可能发生残留。这个问题将在4.4节清洁讨论。

溶解的原料药和取样的相互作用和设备转移是重要考虑的，当溶解的原料药发生吸附时，它最经常涉及的是溶解装置或抽样滤波器和管道的表面上。溶解的原料药在荷电时的吸附可以是pH依赖性的。溶解的原料药到采样装置部件的吸附应当使用的已知浓度的典型样

品溶液（从制剂或原料和辅料混合组分中溶出的样品）进行评估。

通常使用等分的同一样品溶液通过和绕过取样装置（包括采样探头，过滤器，管道，阀门和泵）设计一个交叉验证试验。

有可能对任何种类的材料或设备结构（例如，玻璃或特定的聚合物）的有限选择不能给出建议。参见5.7自动化注意事项的详细信息。

除了在2.4.3取样部分的信息外,泵和管道的连接处可能是自动化系统污染的来源。通常用于溶出试验的分光分析程序的干扰，较少关注的。但是，被研究的制剂含有低剂量的金属盐，如做一些膳食补充剂必须对干扰进行评估。

液体转移通常是通过聚合物管进行。惰性材料如聚四氟乙烯（PTFE），因为它们的机械性能的影响有时也无法使用。其中，软管是必需的，例如在蠕动泵或用于在小半径环绕，聚丙烯（PP）或高密度聚乙烯（HDPE）也可以是优选的材料。取决于聚合物的类型和它的结晶度和密度、主要增塑剂，可能产生组分的浸出。溶出物可能与分析程序干扰。被过滤到样品溶液中的浓度通常取决于表面、温度、暴露时间，流体动力学条件和溶出介质的组成。 4.4清洗

除了2.4.4清洁部分的信息，自动系统有具体的清洁问题。例如，推荐在采样时间和内运行时间评估清洗和冲洗的有效性。在测试之间评估清洁过程也是很重要的。

4.5操作软件和计算的结果

根据21 CFR11（17）仪器操作的软件系统和数据评估必须进行验证。

4.6药典程序的常见偏差需要进行验证 从药典程序中的一些常见偏差包括：

?主轴开始旋转投入样品引起的偏差 ?停留时间和采样探头位置 ?循环与消耗采样

?在消费采样样品体积置换。

5.验证

本章节所涉及的验证是一些典型的验证，但不是包括所有的验证，这些验证参考药典的验证<1225>或者ICH分析方法的验证。本章节讨论的溶出试验的验证包括两个部分，即溶出过程的验证和数据分析的验证。溶出过程是指药物在溶出介质中的溶出和取样，数据分析的定义详见第3章节分析整理。数据分析的验证包括专属性、线性和范围、精密度、准确定/回收率、耐用性和对照品溶液和供试品溶液的稳定性。而溶出过程的验证主要是评估供试品溶液制备的精密度和耐用性。数据分析的验证一般使用对照品溶液或者空白辅料溶液或者按照<1225>准确度试验中适用标准加入法制备的溶液进行验证，详细见下面章节。而溶出过程的验证需要使用有良好特性的产品（例如：比如具有良好的含量均匀度和溶出均一性）。根据验证参数的关系，溶出过程的验证和分析数据的验证可以同时进行验证，例如均在溶出杯中进行。同时根据研究阶段或预期数据的要求不同，验证参数和验证程度也会有所不同。

本章节的验证标准只有作为指导，因此不同产品的验证标准也会有所不同。生产厂家应该在相关的标准操作规程（SOP）中对取自身的产品进行规定合适的接受标准，其他特殊剂

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