细胞污染原因和处理
更新时间:2023-08-13 23:42:01 阅读量: IT计算机 文档下载
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养成良好的无菌操作的习惯拿70%酒精擦手,擦超净台,擦培养瓶,擦培养基瓶,各种瓶子的口多拿火焰烧灼。就不再会发生细菌污染。
决定要进行细胞培养,首先一定要有强烈的无菌意识!操作中要求自己遵守严格的操作规程,不要怕麻烦,越细心越好,越“罗嗦”越好!
我发现在提取需要组织时,往往头会距离组织很近,所以带口罩很重要!还要换无菌衣(紫外照过的白大褂)
另外,每次开始实验前,先用紫外照无菌台和实验室20分,用酒精擦手,台面,不消毒的器械(如移液枪,冰块等);实验中,如允许,尽量多过火,开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处进行;使用无菌台后,再用酒精擦全台面,紫外照20分!
还有,做到绝对无菌,那不可能!但我们可以做到最大限度的减少含菌量! 使用完的东西尽快移出无菌台!另外无菌台上的器械,试剂摆放,也尽量遵循一定的顺序!依污染可能程度依次向外摆。
1. 滴管不要接触瓶口,吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。
2.凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。
3.初学者一般可以用培养瓶养细胞,个人认为瓶污染的机率要比皿小。
4.注意配制完全培养基时不要发生污染,在使用前一定要做无菌培养,因为一般应用污染后的培养基培养细胞后,很快就会发生特别严重的污染。
2. 1.注意喷酒精装置的应用:制作很简单,用过的化妆品,理发店理发前往头发上喷 水的瓶子及其他一些有喷水功能的瓶子,经过处理装上百分之75的酒精就可以了(我不知道有没有实验专用喷洒酒精的瓶子,如果有那就更好了)。我用的是师姐留下来的一种护肤品的瓶子。常常往超净台台面,手上喷洒酒精,效果很好。
2。我进入细胞培养室就戴上PE手套(一次性塑料薄膜手套),当在超净台操作时戴上一次性橡胶手套。
3。培养箱内水盘里的水,用灭菌的超净水,每周更换一次(至少也要两周换一次)。换水前要用百分之75酒精消毒。水浴箱也要定期消毒(用百分之75酒精)换双蒸水。
4。从培养箱内取东西前手一定要喷酒精,动作要快,可以先看好了,要取的东西在那里,然后快取。显微镜下观看细胞时间也不要过久,否则会对细胞有不利影响。
5。很多人喜欢常规用抗生素,其实除于特殊筛选系统中外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素。当在无血清培养基中添加抗生素时,降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下,抗生素不被灭活,可能对于细胞达到毒性水平。
6。液体培养基贮存于4℃ 冰箱,实验进行前放在37℃ 水槽中温热。温热前后注意酒精消毒。
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7。用离心法从动物身上取细胞时, 其离心速率不要超过1000转/分钟(很多文献上都大于这个数值,但记住不要超过1000),时间一般不超过10分钟,否则会造成细胞死亡。
8。取出冷冻管后, 一般是放入37 °C 水槽中快速解冻。我按着师姐的经验都是放入38°C的水中,上面一些战友提到了39和40°C,不知道效果如何,希望多多交流,希望其他战友如果也有不同于37°C的,请多多跟帖,互相交流。在水中摇动冷冻管的时候水不要浸到瓶盖。
9。在超净台内,瓶盖口应该朝下放。我们知道,用酒精灯的火烧一下,不是为了杀菌,主要是形成向上的气流,防止空气中的细菌落下,如果这样的话,那么瓶盖口向上就不对了,所以瓶盖口应该向下放,但应该注意超净台的酒精消毒。
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