常用鉴定试剂的配制和应用

常用鉴定试剂的配制和应用 一、通用试剂 1、碘试剂

检查一般有机化合物。

（1）碘蒸气 预先将盛有碘结晶的小杯置于密闭的玻璃容器内，使容器空间被碘蒸气饱和，将薄层置于容器内数分钟即显棕色斑点。有时，于容器中加放一小杯水，增加容器内的湿度，可提高显色的灵敏度。

（2）0.5％碘的氯仿溶液 喷洒试剂，置空气中待过量的碘挥发后，喷1％淀粉溶液，斑点由棕色转为蓝色。

2、硫酸试剂

检查一般有机化合物。

5％硫酸乙醇溶液作为色谱显色剂用。喷洒后，置空气中干燥15min，100℃烤至斑点呈色（不同化合物呈不同颜色）。

3、重铬酸钾—硫酸试剂 检查一般有机化合物。

5g重铬酸钾溶于l00ml40％硫酸中。喷该试剂后，150℃加热至斑点出现(不同化合物呈不同颜色)。

4、磷钼酸试剂 检查还原性成分。

5％磷钼酸乙醇溶液。喷洒后，120℃加热至呈蓝色斑点。 5、磷钨酸试剂 检查还原性成分

20％磷钨酸乙醇溶液。喷洒后，120℃烘烤，还原性物质呈蓝色斑点。 6、硝酸银—氢氧化铵试剂 检查还原性成分。

溶液i：0.1mol／l硝酸银溶液。溶液ⅱ：10％氢氧化铵溶液。临用前溶液i和ⅱ以

1︰5混合。喷洒后105℃加热5~l0min，至深黑色斑点出现。 7、中性高锰酸钾试剂 检查易还原性成分。

0.05％高锰酸钾溶液。喷洒后粉红色背景上显黄色斑点。 8、碱性高锰酸钾试剂 检查还原性成分。

溶液i：1％高锰酸钾溶液。溶液ⅱ：5％碳酸钠溶液。溶液i和ⅱ等量混合使用，喷洒后，粉红背景上显黄色斑点。

9、四唑蓝试剂 检查还原性成分。

溶液i：0．5％四唑蓝甲醇溶液。溶液ⅱ：25％氢氧化钠溶液。临用前两液等量混合。喷洒后，微热或室温放置显紫色斑点。

10、荧光素—溴试剂 检查不饱和化合物。

溶液i：0.1g荧光素溶于l00ml乙醇中。溶液ⅱ：5g溴溶于l00ml四氯化碳中。先喷洒溶液i，然后将薄层板放入盛有溶液ⅱ的缸内，黄色斑点出现后，于紫外光灯下检视，红色底板上显黄色荧光斑点。

11．荧光显色试剂 检查一般有机化合物。

（1）0.2％2，7--'氯荧光素乙醇溶液。 （2）0.01％荧光素乙醇溶液。 （3）0.1％桑色素乙醇溶液。 （4）0.05％罗丹明b乙醇溶液。

喷洒任一溶液，不同的化合物在荧光背景上可显黑色或其它荧光斑点。

二、苷类鉴定试剂 1、糖鉴定试剂

（1） －萘酚－硫酸试剂 检查还原糖。

①溶液i：10％ —萘酚乙醇溶液。溶液ⅱ：硫酸。取lml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液i 2～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液ⅱ，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。

②15％ —萘酚乙醇溶液21m1、硫酸13ml、乙醇87ml及水8ml混匀后使用。喷洒于薄层板上，100℃烤3～6min，多数糖显蓝色，鼠李糖显橙色，所显颜色于室温可稳定2天～3天。

（2）斐林试剂 检查还原糖。 ‘

溶液i：6.93g结晶硫酸铜溶于l00ml水中。溶液ⅱ：34.6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于l00ml水中。取lml样品热水提取液，加入4～5滴用时配制的溶液ⅰ、ⅱ等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。如检查多糖和甙，取lml样品水提液，加入lmll0％盐酸溶液，在沸水浴上加热l0min，过滤，再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。

（3）氨性硝酸银试剂 检查还原糖。

硝酸银1g，加水20ml溶解，小心滴加适量氨水，边加边搅拌，至开始产生的沉淀将近全部溶解为止，过滤。取lml样品的水溶液，加入lml试剂，混匀后，40℃微热数分钟，管壁析出银镜或产生黑色沉淀为阳性反应。本试剂也可作为色谱显色剂，喷洒后于110℃加热数分钟，显棕黑色斑点为阳性反应。还原性物质如醛类、邻二酚类等有干扰。

（4）茴香醛－硫酸试剂 检查糖类化合物。

硫酸lml加到含茴香醛0.5ml的乙酸溶液50ml中，需临用前配制。喷洒于薄层板上，105℃加热至显示色斑，不同糖显不同颜色。

（5）苯胺－邻苯二甲酸试剂 检查糖类化合物。

苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml水饱和的正丁醇中。作色谱显色剂用。喷后105℃烤5min，显红棕色斑点。

（6）l,3－二'羟基萘酚－磷酸试剂 检查酮糖、醛糖。

0.2％1，3--'二羟基萘酚乙醇溶液50ml与85％磷酸50ml混合均匀后使用。喷后105℃烤5min～10min，酮糖呈红色，醛糖显淡蓝色。

（7）苯胺－二苯胺－磷酸试剂 检查糖类化合物。

苯胺4ml、二苯胺4g及85％磷酸20ml溶于丙酮200ml中。喷洒于薄层板上，85℃加热10min，不同糖显不同颜色。

（8）2，3，5－三苯基氯化四氮唑(t．t．c)试剂 检查还原糖。

溶液ⅰ：4％t．t．c甲醇溶液。溶液ⅱ：4％氢氧化钠溶液。临用时将溶液ⅰ和ⅱ等体积混合。喷洒后，100℃加热5～10min，显红色斑点为阳性反应(醛类无干扰)。

（9）三氯化铁－冰醋酸(k．k)试剂 检查 －去氧糖，常用于强心甙。

溶液i：1％三氯化铁溶液0.5ml，加冰醋酸至l00ml。溶液ⅱ：硫酸。取样品乙醇提取液lml，置试管中，水浴上蒸去乙醇，残渣用0.5ml溶液i溶解，沿试管壁缓缓加入溶液ⅱlml，静置分层，上层渐显蓝色，下层显红色或棕色为阳性反应(其颜色随苷元羟基和双键的位置和个数不同而不同)。

（10）占吨氢醇试剂

检查 －去氧糖(常用于强心甙)。

10mg占吨氢醇溶于100ml冰醋酸中，再加入lml硫酸混合。取lml样品，加入试剂lml，置水浴上加热30min，显红色为阳性反应。

（11）gregg-gisvold试剂 检查2．6－去氧糖。

溶液i：10％三氯化铁溶液。溶液ⅱ：1％盐酸甲醇溶液(97.2ml甲醇中含2．8ml盐酸)。0.5ml溶液i与100ml溶液ⅱ混合。将样品的乙醇溶液点于滤纸片上，晾干后，喷洒上述混合试剂，110℃加热5min，显蓝色为阳性反应。

（12）3，5－二氨基苯甲酸－磷酸试剂 检查2－去氧糖。

3，5－二氨基苯甲酸二盐酸盐1g溶于80％磷酸25ml，加水稀释至60ml。喷洒后，100℃加热15min，2－去氧糖在日光下显棕色，在紫外光下显黄绿色荧光。

（13）对硝基苯胺－过碘酸试剂 检查去氧糖。

溶液i：饱和偏高碘酸溶液1份加水2份混匀。溶液ⅱ：1％对硝基苯胺乙醇溶液4份与盐酸1份混合。先喷溶液i，放置10min，再喷溶液ⅱ，去氧糖显黄色，紫外光下显强荧光，再喷5％氢氧化钠甲醇溶液，颜色转绿，乙二醇同样显色。

2、酚类鉴定试剂 （1）三氯化铁试剂 检查酚类化合物、鞣质。

1～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。取1m1样品的乙醇溶液，加入试剂1～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。作色谱显色剂用，喷洒后，显绿或蓝色斑点为阳性反应。 ·

（2）4－氨基安替匹林－铁氰化钾(emerson)试剂 检查酚羟基对位无取代基的化合物。

溶液i：2％4－氨基安替匹林乙醇溶液。溶液ⅱ：8％铁氰化钾溶液。作色谱显色剂用，先喷洒溶液i，再喷洒溶液ⅱ，用氨气熏，显橙红或深红色斑点为阳性反应。

（3）gibbs试剂

检查酚羟基对位无取代基的化合物。

溶液i：0.5％2，6－溴(氯)苯醌氯亚胺的乙醇溶液。溶液ⅱ：1％氢氧化钾乙醇溶液。取lml样品的乙醇溶液，滴加溶液ⅱ，使ph9～10，再加入1滴～2滴溶液i，显深蓝色为阳性反应。

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